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1材料與方法

1.1材料

健康20月齡雄性Wistar大鼠36只，體重400～500g，飼養(yǎng)于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。腺嘌呤由Sig-ma公司提供，STS為上海新亞制藥廠產(chǎn)品，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等指示劑盒購(gòu)于南京建成生物制品公司。MGP、Fetuin-AELISA試劑盒購(gòu)于上海韻涵生物科技有限公司。

1.2標(biāo)本采集

試驗(yàn)第10周注射過(guò)量戊巴比妥那處死全部動(dòng)物，處死前頸動(dòng)脈取血3ml，分離血清(－20℃保存?zhèn)溆茫郎y(cè)生化指標(biāo))，迅速剖開(kāi)動(dòng)物取胸主動(dòng)脈全長(zhǎng)，用PBS沖洗后－70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3血管組織鈣含量測(cè)定

取胸主動(dòng)脈組織1cm(約10mg)于80℃烤干，組織稱重，加入2mmol/L濃硝酸，室溫消化12～24h，將消化管放于自控電熱消化器上消化至酸全部揮發(fā)，冷卻后用去離子水2ml充分振蕩溶解過(guò)夜，取1.5ml樣品，加入1%氯化鍶150μl，用Perkin-Elmer703型原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定422.7nm波長(zhǎng)下的各管A值，自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出鈣含量，并換算成μmol/g。

1.4大鼠血MDA、SOD、MGP、Fetuin-A的測(cè)定

大鼠腹主動(dòng)脈取血，靜置，4℃2000r/min離心15min，分離血清，按照試劑盒說(shuō)明書用硫代巴比妥酸(TBA)微量法測(cè)定血清MDA含量;用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清SOD活性。ELISA法測(cè)定血Fe-tuin-A和MGP蛋白水平，每份標(biāo)本測(cè)定2次后取平均值。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)

以x±s示，各組間數(shù)據(jù)以單因素方差分析q檢驗(yàn)。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包分析完成。

2結(jié)果

2.1各組動(dòng)物血管鈣含量及血清SOD、MDA水平

STS治療組大鼠血管鈣含量顯著低于尿毒癥大鼠(P＜0.05);與尿毒癥大鼠相比，STS組大鼠血清MDA水平顯著降低、SOD活性明顯提高(P＜0.05)。

2.2各組動(dòng)物血漿MGP、Fetuin-A水平

與正常對(duì)照組比較，尿毒癥大鼠MGP、Fetuin-A水平顯著降低;與尿毒癥大鼠組相比，STS組大鼠MGP、Fetuin-A水平明顯提高(P＜0.05)。

3討論

3.1慢性腎臟病患者中的血管鈣化較

近年來(lái)最新的證據(jù)明，血管鈣化是一種類似于骨和軟骨形成的主動(dòng)的調(diào)節(jié)過(guò)程，伴隨著血管平滑肌細(xì)胞向成骨樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，在這一過(guò)程中，氧化應(yīng)激發(fā)揮了重要作用，Parhami等〔12〕指出脂質(zhì)過(guò)氧化物具有強(qiáng)的劑量依賴性的促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的作用，Mody等〔13〕的研究明過(guò)氧化氫或黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶能增加細(xì)胞內(nèi)的氧自由基，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的成骨細(xì)胞分化，這作用能被外源性抗氧化劑所阻斷。氧化應(yīng)激不僅存在于輕-中度腎功能不全患者，在存在于尿毒癥患者〔14〕，血清SOD和MDA的水平可分別從生成過(guò)程和生成物兩方面反映體內(nèi)氧自由基的含量，是過(guò)氧化反應(yīng)的重要指標(biāo)。SOD是細(xì)胞內(nèi)一種重要的抗氧化酶，催化O－轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O2和O2的歧化反應(yīng)，SOD活力高低間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力;MDA是氧自由基攻擊細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用并因此形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物，MDA的水平可以反映體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，并間接反映細(xì)胞膜損傷的程度。

3.2近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)

在這一過(guò)程中，促進(jìn)和抑制鈣化的因素尤其鈣化抑制因子的失調(diào)在系統(tǒng)和(或)局部水平起重要作用，鈣化抑制因子包括基質(zhì)Gla蛋白、Fetuin-A等。Fetuin-A是一種主要由肝細(xì)胞分泌的Ca2+結(jié)合蛋白，廣泛存在于細(xì)胞外液，是重要的循環(huán)鈣化抑制劑，一方面可與MGP及鈣磷酸鹽礦物質(zhì)結(jié)合形成循環(huán)蛋白礦物復(fù)合物以防止血管鈣化的發(fā)生，另一方面還可抑制BMP(骨形態(tài)發(fā)生蛋白)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的促鈣化作用〔15〕，F(xiàn)etuin-A基因缺陷小鼠能夠發(fā)生以主動(dòng)脈為主的血管、肺等軟組織鈣化〔16〕。MGP主要由骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞合成及分泌，是骨細(xì)胞成熟的晚期標(biāo)志之一。MGP含有5個(gè)羧基谷氨酸(Gla)基團(tuán)，是成骨細(xì)胞的標(biāo)志分子，以維生素K作為輔助因子的γ-谷氨酸羧化酶可將無(wú)活性的Gla殘基羧化為有活性的Gla殘基〔17〕。MGP有抑制血管鈣化的功能，研究顯示〔18〕，MGP基因敲除大鼠主動(dòng)脈及其分支發(fā)生嚴(yán)重的血管鈣化，后期逐漸發(fā)展為主動(dòng)脈破裂。另外，MGP能夠與Ca2+結(jié)晶結(jié)合，抑制羥磷灰石結(jié)晶的生長(zhǎng)，進(jìn)而抑制血管鈣化。STS是一種具有很強(qiáng)抗氧化特性的化合物，可與鈣離子形成螯合物，對(duì)人體無(wú)毒性作用。本文結(jié)果顯示目前對(duì)慢性腎臟病患者血管鈣化仍沒(méi)有有效地預(yù)防及治療方法。STS可以有效減少鈣在血管壁的沉積，延緩血管鈣化的發(fā)生，尿毒癥確實(shí)可以引起機(jī)體氧化應(yīng)激水平升高，STS可以阻止尿毒癥大鼠血管鈣化的發(fā)生，作用機(jī)制可能是STS通過(guò)其抗氧化特性減輕尿毒癥引起的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，增強(qiáng)SOD活性，提高機(jī)體抗氧化能力，促進(jìn)自由基清除、抑制或阻斷自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，改善細(xì)胞內(nèi)皮功能。尿毒癥大鼠血MGP、Fetuin-A等鈣化抑制蛋白明顯降低，是導(dǎo)致血管鈣化的原因之一，STS不僅具有抗氧化作用，而且具有調(diào)節(jié)某些鈣化抑制因子的能力，通過(guò)增加鈣化抑制因子的水平，抑制或減輕血管鈣化的發(fā)生。

作者：魏勇崔美玉單位：山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院