前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇十大古曲范文，相信會為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

十大古曲范文第1篇

Most people didn't know who Sheena Matheiken was. Her passion is in getting children in the slums into the school in India. To help raise awareness and money for the Akansha Foundation， she pledged to wear the same dress every day for a full year.

At first， the project did not gain much attention. However， each day， Sheena Matheiken photographed herself in the outfit. Through the clever use of accessories and folding， she prepared a different look each day. The creative combinations and blog posts soon thrust her into the public eye and raised a media storm. The one outfit that she wore each day was none other than the little black dress. In fact， she originally called her project Little Black Dress for 365 Days， according to the Uniform . However， it soon became known as the Uniform Project when she exceeded her goal of $100，000 and then opened it up to other women who wanted to join her. Joining is simple. All you have to do is pledge to wear one little black dress for 365 days and donate the savings to underprivileged1） children in the slums.

同一條裙子

絕大多數(shù)人以前都不知道希娜?馬思肯這個人。她致力于讓印度貧民窟里的孩子們進學堂。為了幫助“阿坎莎基金會”提高知名度并募集資金，她承諾在一整年內每天都穿同一條裙子。

起初，這一計劃并沒有獲得多少關注。不過，每一天，希娜?馬思肯都把自己穿同一條裙子的裝扮拍下來。通過巧妙地使用配飾和折疊方法，她每天都把自己打扮得不一樣。這些創(chuàng)意的組合和博客帖子很快就把她推進公眾的視野，還掀起了一場媒體風暴。她每天所穿的那件衣服無非就是一條小黑裙。按照“同服項目”網站的說法，其實她最初就管這個計劃叫“小黑裙的365天”。然而當她募集到的資金超過了目標十萬美元并把這個計劃向其他想要加入的女性開放時，這一計劃很快就以“同服項目”一名而變得為大家熟知。參與計劃很簡單，你所需要做的就是承諾在365天里穿同一件小黑裙，并把省下的錢捐獻給貧民窟里無法上學的孩子們。

Stunt Driving Librarian

According to World of ， Sue Harding was not born with a thirst for adventure. However， she hated the stereotype that librarians were boring just as much as she cared for the Warwickshire and Northamptonshire Air Ambulance Service. She frequently thought about ways to combat the image of the boring librarian. She then came up with the idea to destroy the stereotype by involving herself in a stunt driving course. In the process she raised funds. According to The Times， people could come out and watch. All proceeds2） were to be donated to the Warwickshire and Northampton Air Ambulance Service.

When the big day came， she had far exceeded her initial goals and her stunt driving skills turned out to be quite impressive for a librarian. Not only did it smash the stereotype but it also raised money for the ambulance service. It is still considered one of the more unusual ways for raising money for an ambulance， but according to their official website， they were just glad that Sue Harding didn't have to use their service.

表演特技駕駛的圖書管理員

根據(jù)“不同的世界”網站所述，休?哈丁并不是天生就渴望冒險。然而，她厭惡人們認為圖書管理員無趣這一成見，一如她喜歡沃里克郡和北安普敦郡空中救護服務隊。她經常思考打破無趣的圖書管理員這一形象的方法，然后就想到了通過讓自己學習特技駕駛來消除人們的成見。在學習的過程中她就募集到了資金。據(jù)《泰晤士報》報道，人們可以出來觀看她的表演。所有的收入都將捐給沃里克郡和北安普敦郡空中救護服務隊。

最終表演的日子到來的時候，募集到的資金已經遠遠超出了她最初的目標。而且，就一名圖書管理員來說，她的特技駕駛技能結果也著實令人欽佩。這不僅粉碎了人們的成見，而且為救護服務隊募集到了資金。就為救護服務募集資金而言，這仍然被認為是比較與眾不同的方式之一。不過按照該救護服務隊官網的說法，他們實在很高興休?哈丁不需要使用他們的服務。

The Ron Swanson Mustache

Few mustaches have become quite so iconic as the Ron Swanson mustache. Famous for his character， Ron Swanson， in Parks and Recreation， actor Nick Offerman came up with an idea to support pediatric3） cancer efforts. He offered to shave off his mustache， put it back together， mount4） it， and present it to the winning bidder. The proceeds would then go entirely to the charity Because of .

The sale itself was private. However， the mustache was successfully removed， reassembled， glued， and then mounted behind glass. To ensure that it had the proper shape， the mustache was reassembled against a mold of Nick Offerman's face.

榮恩?斯沃森的胡子

很少有誰的胡子能變得像榮恩?斯沃森的小胡子那么出名。演員尼克?奧弗曼因在《公園與游憩》中飾演榮恩?斯沃森而出名，他想出了一個資助兒科癌癥工作的點子。他提議剃掉自己的胡子，然后整理成原樣并固定好送給中標者。所募集的善款全部交給慈善團體Because of 。

拍賣本身并沒有公開。不過，榮恩?斯沃森的胡子被成功地剃掉、重新整理好、粘合后固定好放入了玻璃罩中。為了確保胡子保持本身的形狀，重新整合的工作是在尼克?奧弗曼的臉部模具上完成的。

Skydiving for the Blind

Most men in their 70s look for tamer ways to raise money for their favorite charities. However， Larry Ekstrom decided that the best way to celebrate his 70th birthday and raise money for Leader Dogs for the Blind was to sky dive 70 times on his birthday. According to the Huffington Post， this is not the first time he has done a feat5） like this. On his 60th birthday， he jumped 60 times to raise money for multiple sclerosis6） research as his wife suffers from it.

He succeeded in raising a significant amount of money， although he did not say how much.

為失明者跳傘

絕大多數(shù)70多歲的人會尋求更為安全些的方式為自己喜歡的慈善機構募捐。然而，拉里??？怂固佚堈J定慶祝自己70歲生日并為導盲犬訓練學校募集資金最好的方式就是在生日那天跳傘70次。據(jù)《赫芬頓郵報》報道，拉里做這類的壯舉已經不是第一次了。在他60歲生日的時候，他曾跳傘60次為多發(fā)性硬化癥研究募捐，因為他的妻子患有這種疾病。

盡管他并未透露具體數(shù)目，但他成功地募集到了一大筆善款。

Stop Bieber

There are two types of people in this world： those who love Justin Bieber and those who can't stand him. However， even those who love Justin Bieber sometimes tire of listening to his music non-stop. And evenfans sometimes have certain songs that they absolutely hate. According to ， one of those songs is "Baby".

The Evanston Township High School of Illinois wanted to raise cash to redecorate a cafe and art center. When they ran into walls at other fundraisers， they decided that the best solution was to play the Justin Bieber song Baby over the loud speakers. Over the top of this， the students would urge their fellow students to contribute. They needed to raise $1，000 to achieve the goal. Reaching the goal was the only way to make the song stop. The school actually gave them one week to raise this money. However， they reached and exceeded the goal within three days， according to Sun Times. The song played approximately 20 times before just about everyone in the school caved7）. Even the teachers and the workers donated to stop the "Baby" song， according to CBS.

阻止賈斯汀

十大古曲范文第2篇

賺取時間 就是賺取了財富

李秀恒，男，1954年生，港事顧問，經貿商會會長，香港金寶時計集團董事長，1991年香港十大杰出青年，1993年獲香港青年工業(yè)家獎。10年間他一手建立10億資產的鐘表王國，坐擁兩億元物業(yè)，收藏了數(shù)百萬元的名表、名古董，在香港被稱為“鐘表大王”。這位億萬身家的“鐘表大王”，手上卻只戴著價值200余元的自產手表，他說他看重的不是身分，而是時間。

說起來，做鐘表不是我先前的興趣，只是當時看報紙的招聘欄，見到這行業(yè)招人就選擇這行業(yè)。如果當年我選擇地產，我現(xiàn)在的會議室可能都有兩千多尺啦！（笑）

不瞞你說，小時候我的理想是當作家，幻想將來寫文藝小說和愛情散文。中學時我的書法和作文經常得獎?？上菚r候我家里太窮，父親是解放前從廣東清遠移居來港的，在一家電燈公司做線路檢查工。我們一家4口住在50平方尺的板間房，我年年暑假都必須做暑假工賺點生活費。這么窮，讓我當作家的夢都不現(xiàn)實，因為靠稿費養(yǎng)家糊口是不行的。中學畢業(yè)本來已考上大學，可我怕家里負擔太重，索性放棄了上大學的機會，到鐘表行當了文員。

俗話說“人窮志短”，可我卻偏偏最有志氣。因為我知道我沒有回頭路，一回頭便沒有生活，唯有向前走，所以我的斗志和毅力比誰都強。工作、再工作，是突破貧窮的唯一辦法。做鐘表不是為興趣，是為生活，但干得久了，對行業(yè)熟悉了，興趣也就來了。由于是做鐘表，我更懂得生命的短暫、時間的寶貴。

在鐘表行當文員當了兩年，我就跳槽到一家日本公司，專門推銷日本手表和零件。當時香港幾乎沒有自己的手表工業(yè)，市場全讓瑞士表占領了，港人當時也是非瑞士表不買。所以剛開始推銷日本產品還是很困難的。不過盡管瑞士表確有質高、精巧和品牌老的盛名，但與價廉物美的日本新興石英電子鐘表相比，已落后于時代。由于看到這一點，我推銷表時不怕麻煩，不辭勞苦，以誠待客，結果業(yè)績不錯，我很快被提升為營業(yè)經理，這是當時華人在這家公司里的最高職位。別人都很羨慕，可我卻希望自己擁有

生產鐘表的工廠，而且夢想香港有朝一日能夠超過瑞士、日本，成為世界生產和出口鐘表的王國。

到了80年代，高科技的電子表更是大批量進入市場，大有一舉取代傳統(tǒng)機械表之勢。我立即意識到，電子表由于成本低，價廉物美，走時準確，款式新穎，將會為愈來愈多的消費者所接受，這是個難得的機遇，于是決定辭職另立門戶。我用自己11年的打工積蓄和鐘表業(yè)經驗，成立了自己獨資擁有的“金寶時計”，引進日本先進的設備、零配件和技術，一方面在自己的工廠生產，另一方面輸入給同行，并輔助培訓本地廠家生產裝配技術，推動廠商們利用低成本生產鐘表，然后再掉轉頭來同日本公司競爭。我自己也以多品種多款式生產了大量禮品式鐘表，以獨特的經營方式搏擊市場，很快獲得了成功。

你問我成功的秘訣？嘿（笑），談不上。不過體會是有的。一是快，香港這地方沒什么資源，可那么多人成功了，靠什么？就是快，必須永遠走在人家前面，所以香港的生活節(jié)奏這么快。二是靚，這是廣東話，意思是要將事情做得漂亮、完美，否則光快是沒有用的。比如同樣是制作一張名片或賀卡，制作得好與壞那差距可就大了。所以我做事不是要求100分，而是要求101分！三是變，即是創(chuàng)新。事業(yè)穩(wěn)定之后一定要不斷創(chuàng)新，否則你就沒有進步，就會落伍。我曾經給別人打過比方，說自己是一座電腦（笑）。當然是一座有用的電腦，要Update（不斷更新）軟件和硬件。我說的軟件就是腦袋，要靠進修來充電；而硬件是外表，你看我40都出頭了，可人家老覺得我長著一張娃娃臉，所以我要靠打扮和留胡子來增加外表的穩(wěn)重（笑）。不過相比之下，我更重視軟件的Update，參加工作之后，為了彌補低學歷造成的知識欠缺，我用了7年的業(yè)余時間讀完了美國圣提巴拉大學函授課程，取得了工商管理碩士學位，而現(xiàn)在又在攻讀廣州暨南大學工業(yè)經濟博士。不過，有投入也就有產出（笑），眼下，我給《星島日報》《信報》《文匯報》《香港商報》《東方日報》《東周刊》等多家報紙開專欄，寫財經和工商分析方面的文章，人家還稱我“專欄作家”哩（笑）！因為有這么多事要做，我必須千方百計賺取時間，因為賺取時間你就賺取了財富。

你問我創(chuàng)業(yè)者最重要的素質是什么？要我說，最重要的是找個好老板、找份你喜歡做的工作，然后腳踏實地。即使是專職掃地的，若能像我這樣在鐘表業(yè)

中干20年的話，此后跳槽到任何公司，也會得到不錯的待遇。換句話說，“?！笔呛苤匾?，經常轉換工作的話，便不能為自己建立基礎，也不會有提升機會。此外，決心也是很重要的，只要肯下決心苦干，你就能獲得成功。

記得我獲得青年工業(yè)家獎后出席某個演說，有個年輕人挑戰(zhàn)我，說：“你有這么多成就，又有這么多機會，當然這樣說啦！”我想告訴年輕人，今日我是老板，一樣求才若渴，我很想給年輕人機會，但年輕人沒有證明給我看他值得我給予機會。一萬元工資，他就只做一萬元成績，你給我兩萬時，我才交兩萬的表現(xiàn)。大家只在想：你先給我機會我才搏給你看，但做老板的又豈會這樣用人？所以，不是沒有機會，是你們有沒有爭取機會。

小時候我形容自己是精忠報國，因為我背后有一顆大痣（笑），我知道自己必定要畢生辛苦作戰(zhàn)，因此我加入了鐘表行，一切也要自己辛苦摸索；但到了現(xiàn)在年長了，若我仍要拼命開展事業(yè)的話，便成了為金錢打工，那是我不愿意的。為了讓自己輕松一點，我學習了日本人的一套維系員工基礎的系統(tǒng)，放權讓下屬替我負起責任，自己卻能掌握大權，因此我現(xiàn)在便能“不務正業(yè)”（笑），時常抽出時間來讀書寫作。

十大古曲范文第3篇

【關鍵詞】股市 散戶 投資 誤區(qū)

近些年來，“炒股”成了我們生活的重要話題。從2007年10月開始，A股市場一路下行，累計跌幅已超過60%。在日常的股票投資活動中，筆者發(fā)現(xiàn)多數(shù)散戶投資者多多少少都會犯一些這樣那樣的錯誤，導致投資損失。在散戶投資的眾多誤區(qū)中，筆者根據(jù)自己的實踐經驗總結出散戶朋友的十種典型錯誤，為散戶朋友們今后的投資提供一些參考。

一、買入價本位思想

即無論何時、何種市況，都是以自己的買入價作為賣出或是繼續(xù)持有的標準。散戶朋友們這一錯誤具體表現(xiàn)為缺乏行之有效的“止贏止損”方法和原則。小賺不跑，小虧不出，大虧認賠，虧了不忍心割肉,放手讓虧損持續(xù)擴大，這是很多散戶投資者容易犯的錯誤。今年以來，A股市場的大幅下跌，有的投資者甚至自作聰明，為攤薄成本向下買入攤平，結果越套越深?！皶I的是徒弟，會賣的是師傅，會割肉的是爺爺”是投資高手總結的經驗。割肉一方面是為了保存資金實力，另一方面就是提高資金的使用效率，是綜合考慮了資金的時間成本和機會成本的?！百I入價本位思想”是散戶朋友投資理念狹隘的體現(xiàn)，也是散戶投資者易犯的常見錯誤。

二、持股過于分散或集中

投資過于分散，表面上看起來可以分散風險，但是對于一般的散戶來說，其實是一種極其分散精力的行為和一種缺乏信心的表現(xiàn)。我有一位朋友只有7萬塊錢，持有10只股票。這位朋友以為分散持股可以東方不亮西方亮，殊不知一匹再大的黑馬有再大的力氣，也拉不動裝著9頭瘸驢的車。投資過于集中，只買一只，違背了把“雞蛋放在同一籃子”一損俱損的教訓。喬治.索羅斯說的好：“承擔風險無可指責，但同時記住千萬不能孤注一擲!”根據(jù)筆者的經驗，持股適度按股票行業(yè)和地域分配比較好，3-6只股票適宜，持倉要講究立體性，投資和投機結合，短線和中長線結合。

三、依據(jù)所謂專家、朋友、小道消息或者是媒體的建議作為買賣的標準

在股票市場，我的經驗是不要輕易相信股評專家等人的結論，他們的話只能參考。他們說的漲、跌和你所理解的漲跌不同。大多數(shù)情況下一般股民理解的都是短期行為，而證券研究報告說的卻是中長期。缺乏主見和自己的投資標準，人云亦云，沒有正確判斷風險和市場的能力，只能讓自己永遠停留在業(yè)余水平。沃倫.巴菲特說：“風險來自你不知道自己正在干什么”，正確的做法應如江恩所說：“順應趨勢，花全部的時間研究市場的正確趨勢，如果保持一致，利潤就會滾滾而來!”成為股市贏家需要建立自己正確的投資哲學與方法，不能有不勞而獲的思想。不要把“中國是政策市”等作為不學無術的借口，炒股實戰(zhàn)技巧需要反復總結和摸索，不斷地深入學習和領悟，才能為炒股贏利奠定堅實的基礎。

四、買賣時只喜歡限價交易，而不會利用非現(xiàn)價（市價）交易

有的散戶往往會因為一、兩分錢的便宜而因此誤了最佳進入時機，這是典型的“揀芝麻丟西瓜”、“占小便宜吃大虧”的失敗投資者。短線投資高手利用信息炒作波段，看準時機，利用市價果斷成交，快進快出，往往受益匪淺。當然資歷尚淺的散戶投資朋友是不能理解其中的奧妙的。

五、不敢買正在創(chuàng)新高的股票或板塊，而喜歡買處于長期下跌趨勢的股票

比如2007年6-10月，有色、煤炭、鋼鐵等資源型股票天天新高，但很多散戶朋友在此類股票面前望而卻步。以筆者周邊的股票投資者為例，90%的人不會也不敢買那些正在創(chuàng)新高的股票，缺乏賺大錢的氣魄和思想。美國人威廉. 歐奈爾說：“主流類中的股票，常能漲得驚天動地，但其他平庸個股，連一絲漣漪都不會起！”這類投資者不敢買入高價股，只喜歡買便宜股，他們不知道高價有高價的理由和“強者恒強”的道理。

六、急功近到，不愿長期持有

筆者身邊很多散戶朋友買賣股票就是典型的T+1，今天買明天賣，追漲殺跌，總想在最短的時間內，不費力氣賺大錢。這種急功近利的思想，普遍存在于大多數(shù)的散戶投資者思維當中。忍耐是一種等待，是莊家醞釀盈利的一種高超手段。很多好股票就是忍出來或捂出來的，對那些優(yōu)質、成長性好和壟斷行業(yè)的股票可以有長期投資的思想。萬科董事長王石有個朋友叫劉元生，從萬科創(chuàng)業(yè)起即買入其原始股持有到現(xiàn)在，400萬元變?yōu)?.32億元股票。巴菲特的一生中重倉過13只股票，7只股票賺了270億美金。巴菲特最驕人的業(yè)績是持有《華盛頓郵報》股票30年，股票價值增長128倍。

七、難以克服貪婪之心和不冷靜的心態(tài)

很多股民朋友將人性的貪婪這一缺點在投資股票時進一步放大，表現(xiàn)得淋漓盡致。典型的是自己的賬戶資金升值已達20%、50%或更多，但還是不死心，不平倉，掙多了還想再掙更多。跌了甚至到深套以后，從恐懼、謾罵、后悔到連死了的心都有。比如經歷2007年5月30日的風暴之后，筆者周邊的很多散戶朋友的市值大幅縮水，更別說今年以來的大跌，散戶朋友跌的面目全非，中間永遠不止損。但到現(xiàn)在上證指數(shù)2300點，周邊散戶在恐懼中拋售所有股票，把股票賣在地板價上。反復的追漲殺跌，陷入無休止的惡性循環(huán)，最終心灰意冷，以大幅的虧損離場而去。股民朋友炒股投資,就一定要克服人性貪婪和不冷靜的心態(tài)這兩個缺點。

八、不擅長學習和做功課

很多散戶朋友喜歡把小道消息和電視上的股評當飯吃，不擅長學習是散戶朋友投資股票的大敵。“股票是經濟的睛雨表”，制約股票的漲跌因素相當復雜，股票供求、通貨膨脹率、國內外的政治、軍事、經濟、自然等因素的變化，都會直接影響股票的升降。這要求散戶投資者要兢兢業(yè)業(yè)，勤勤懇懇，認真學習，不斷進步，做好功課。投資總有失誤甚至犯錯誤的時候，重要的是我們應該懂得怎樣在失敗當中吸取教訓，更重要的是不要讓同樣的錯誤多次發(fā)生?！俺晒Φ姆椒ㄔ谟诎l(fā)現(xiàn)和改正自己的問題，把自己的弱點變成長處”。投資的成功是建立在已有的知識和經驗基礎上的。美國投資大師杰姆. 羅杰斯說：“決定命運的不是股票市場，也不是上市公司本身，而是投資者本人的學習、經驗和判斷”。

九、對股市缺乏基本的判斷和信念

如很多朋友毫無道理的篤信大盤暴跌時，政府一定會出面救市；奧運會前股票一定漲；市盈率低的股票就是好股票；ST股票絕對不能買等等。把這些無稽之談當成投資寶典，其實是誤入歧途而毀己不倦。股票的投資經驗需要時間積累和總結，或者前輩們反復總結出來的精華散戶朋友可以借鑒和參考（僅此而已），如買進有信心、持股要耐心、賣股靠決心；短線炒消息，中線炒題材，長線炒業(yè)績；買股要慢，賣股要快，持股要穩(wěn)。不要在大漲后追高買進，不要在大跌后低位殺出；不要在利好公布后買進，不要在利空公布后賣出，不要買進有明顯缺陷的股票等等，這些都是股民高手朋友們結合中國股市特點總結出來的精華，散戶朋友當可以學習和引以為鑒。

十、心態(tài)不正，不夠平常心

賺了嫌少，后悔自己沒有在股市高點獲利了結；虧了悶悶不樂，不敢坦然面對和接受自己的錯誤和失敗。在股市投資，這些朋友是以健康受損和心靈受折磨為代價來投資的。不論盈虧，“知足者常樂，而貪婪者常悲”。炒股要有平常心，要有純凈的境界，證監(jiān)會尚主席說的好，炒股要三閑：閑錢、閑時間和閑心態(tài)，這是散戶投資者投資股票的一個真理。

在股票投資的誤區(qū)中，以上十點是散戶最容易犯的錯誤。當然，仁者見仁，智者見智。但對于想靠炒股致富的散戶朋友來說，如果不注意克服以上十種錯誤，則對炒股非常不利。實際上，我們要通過炒股發(fā)現(xiàn)自己的人性缺點，然后逐一克服，不斷提升自己的素養(yǎng)，這樣我們的炒股水平和生活質量才會大大提高，財源就會滾滾而來。

十大古曲范文第4篇

關鍵詞：去勢大鼠；骨質疏松；基因表達譜

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.12.011

中圖分類號：R446 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2012）12-0029-03

Preliminary Analysis on Gene Expression Profiles of Osteoporosis in Ovariectomized Rats GAO Feng1， MO Xin-min1， LI Jin-ping2， LIU Shi-jie1， ZHANG Xiao-jun1 （1.Hunan University of TCM， Changsha 410007， China；2.College of Pharmacy， Central South University， Changsha 410013， China）

Abstract：Objective To investigate the difference of the gene expression profile between osteoporosis of ovariectomized rats and normal rats， and analyze the characters of the gene expression profile of the osteoporosis of ovariectomized rats. Method The gene expression difference between osteoporosis of ovariectomized rats and normal rats was tested by using cDNA microarray technology. The gene information of the gene expression difference was analyzed in Gene Ontology （GO） database， and the different genes were analyzed by GO analysis using the software Agilent Genespring GX11. Results A total of 118 significant differentially expressed genes were detected， among them， 48 genes were up regulated， 70 were down regulated. Conclusion Many abnormal genes expression related with osteoporosis in ovariectomized rats.

Key words：ovariectomized rats；osteoporosis；gene expression profiles

骨質疏松癥（osteoporosis，OP）是以骨量減少、骨的微觀結構退化為特征，骨的脆性增加易于發(fā)生骨折的一種疾病。骨質疏松癥的發(fā)生、發(fā)展是一個復雜過程，其演化過程涉及大量的基因突變、缺失、擴增及失活等異常表達信息，因此，發(fā)揮基因芯片技術多樣本、高通量、高效率和平行監(jiān)測識別功能，對闡明骨質疏松癥的病因，揭示其發(fā)病機制以及開辟新的診斷途徑和治療方法有廣闊前景。本研究利用大鼠全基因組微珠芯片初步探討OP基因表達譜系的變化，并對差異表達基因進行生物信息學分析，以探討原發(fā)性骨質疏松癥的發(fā)生機制。

1 材料與方法

1.1 動物

采用3月齡SD雌性大鼠20只，體質量250 g左右，SPF級。飼料為標準普通飼料，湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（湘）2009-0004。

1.2 試劑

RatRef-12_V1 55900970鼠全基因組微珠芯片，美國Illumina公司制作；Cy3 Amersham pharmalia Biotech；反轉錄酶（SuperscriptⅡ），Gibco BRL；Oligo（dt）18，生研（上海）

基金項目：國家自然科學基金（30873291）

通訊作者：莫新民，Tel：0731-85539630，E-mail：moxinmin52@

生物科技有限公司；dNTP，PROMEGA。

1.3 主要儀器

電動玻璃勻漿機，DY89-1，寧波新芝科器研究所；電泳儀FR-280，上海復日科技凝膠成像儀FR-200，上海復日科技；雜交箱DND-9052型，上海精宏實驗設備有限公司；雜交艙聯(lián)合基因，S-200純化柱，S-200HR Columns Amersham Pharmacia Biotech Inc.；核酸分析儀；Gene Quant pro Biochrom Ltd. Cambridge CB4 OFJ England；Milli-Q 水生成儀，Milli-Q Biocel MILIPORE Ltd；掃描儀Bead Station 500 System， illumina，Inc.；分析軟件，Bead Studio Gene Expression Module，illumina，Inc.；低溫高速離心機，Biofuge fresco， Heraeus instrumennts；移液槍，200、10、1 000 ?L，GILSON，法國；核酸定量檢測儀，美國INFINIGEN公司；Unigamma骨密度儀（意大利）；MIAS醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)；Motic B5顯微攝像系統(tǒng)；WDW-000Ⅲ微機控制電子式萬能實驗機。

2 實驗方法

2.1 分組

動物適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分為模型組和假手術組，每組10只。

2.2 造模

按照絕經后骨質疏松癥動物造模方法[1]，以2%戊巴比妥鈉（0.2 mL/100 g）麻醉，在無菌條件下從距離大鼠第一胸腰椎外側1 cm處縱向切開皮膚及兩側肌肉，摘除雙側卵巢；假手術組則切除等同于卵巢體積大小的脂肪。止血后分兩層縫合，術后連續(xù)3 d大腿肌肉注射青霉素，每只大鼠4萬U/d。

2.3 指標檢測

2.3.1 造模指標檢測 造模13周后處死大鼠，取完整左右后肢及第2～4腰椎，保留骨膜，去除其他組織。骨密度檢測：取第2～4腰椎骨用濕紗布包裹，送湖南中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院骨密度室；骨生物力學檢測：取右脛骨用濕紗布包裹，送國防科技大學物理系測骨最大彎曲強度；病理學檢測：取左脛骨用4%多聚甲醛固定48 h，然后用5%硝酸脫鈣1周，送湖南中醫(yī)藥大學病理檢驗中心觀察組織形態(tài)變化，測量平均骨小梁密度。

2.3.2 RNA 提取、純化、質檢、放大 取左側股骨加液氮研磨按照Unizol試劑（上海博星基因芯片有限責任公司）提取方法提取總RNA。使用QIAGEN Rneasy Kit純化總RNA。經分光光度計檢測吸光度（A），并進行保溫試驗，于-20 ℃和70 ℃保溫1 h后，用1%瓊脂糖凝聚電泳檢測28 s，18 s 條帶進行質檢。然后使用Ambion Illumina RNA Amplification Kit進行RNA線性擴增。

2.3.3 芯片雜交、洗滌 將基因芯片和雜交探針分別做94 ℃水浴變性后，加入混合探針，置42 ℃雜交箱中避光雜交16～18 h。按順序用1×SSC/0.2%SDS、0.1×SSC/0.2%SDS、0.1×SSC洗滌，室溫晾干，避光保存于干燥器中。

2.3.4 基因芯片數(shù)據(jù)處理與分析 應用illumina微珠芯片掃描儀和illumina微珠芯片分析軟件對圖像信號進行處理，對原始數(shù)據(jù)選擇的歸一化方法為Cubic Splinc，差異基因的篩選標準為Diffscore值小于-20或大于20即為差異基因。將數(shù)據(jù)導入分析軟件Genespring，通過美國國立醫(yī)學生物技術信息中心（NCB，Ihttp：//ncbi.nlm.nih.gov）對差異表達基因進行基因信息學分析。

3 結果

3.1 骨生物力學、骨密度及骨小梁密度檢測結果（見表1、圖1）

表1 2組大鼠骨生物力學、骨密度、骨小梁密度比較（―x±s，每組10只）

組別 脛骨最大抗彎曲度 第2～4腰椎骨密度 脛骨骨小梁密度

假手術組 375.02±8.88 0.268±0.012 3 0.915 6±0.009 5

模型組 315.00±7.40 0.224±0.012 0 0.869 3±0.013 2

注：與模型組比較，P

模型組 假手術組

圖1 大鼠脛骨組織形態(tài)病理圖（×400）

3.2 RNA抽提結果

電泳結果顯示，2 個樣品總RNA均有清晰的18 s和28 s條帶，沒有明顯的降解發(fā)生，A260/A280比值符合芯片實驗要求，2個樣品質量均符合芯片實驗要求。樣品處理結果見表2、圖2。

表2 2組大鼠RNA樣品基本信息

組別 總量（?g） A260 A280 A260/A280

模型組 158.508 33.023 15.648 2.11

假手術組 208.128 43.360 20.485 2.12

圖2 假手術組與模型組樣品總RNA電泳圖

3.3 表達譜芯片結果分析

3.3.1 探針標記和芯片雜交掃描結果 雜交后芯片熒光信號強度較高，背景均一，沒有明顯缺陷，符合芯片結果分析。

3.3.2 芯片雜交質量判定結果 Cy3雜交信號的相關性符合預期標準，顯示出樣品間的差異性和實驗操作的影響都較低。芯片上內參基標準基因的雜交信號強度高，樣品間的表達變化較小，比值穩(wěn)定，表明實驗操作對結果穩(wěn)定性影響較小。見圖3。

圖3 信號強度相關性散點圖

3.3.3 骨質疏松癥差異表達基因 篩選標準值Diffscore≥20或≤-20，經篩選發(fā)現(xiàn)OP差異表達基因共有118條，其中48條基因上調，70條基因下調。見表3、表4。

3.3.4 差異基因Gene Ontology分析結果 在生物過程中涉及的基因有Agt、C1dn5、Pcaf、Bnip3、Sncg、Adipoq，其中Agt幾乎參與了整個生物過程；分子功能中涉及的基因有Fn1、Sparc、Mt3、Aoc3；細胞組分中涉及的基因有Ces3、Mt3、Scd1、Adipoq、Hsd11b1、F2r、Fn1、Carhsp1、Pctp、Ca5b、Abhd5、Tra1、Cav2、Nucb2、Gpd1、Golph3、Cdo1、Rpsq、Bnip3、Qscn6、RT1-Ba、RT1-A2、RT1-BA、Rcn2。功能分類比例為：細胞質部分35%，內質網13%，脂代謝調節(jié)9%，銅離子結合5%，主要組織相容性蛋白復合物8%，膠原蛋白結合3%。

表3 上調基因

基因 功能描述

Pctp 脂質結合；脂質轉運

C1dn5 蛋白特異結合

Sparc 膠原結合；銅離子、鈣離子結合；成骨

Mt3 去超氧化物自由基；銅、鋅、金屬離子結合

Rcn2 鈣離子結合；蛋白結合

RT1-A2 蛋白結合

Qscn6 內質網

Tra1 鈣離子結合；低密度脂蛋白受體結合

Carhsp1 蛋白結合；鈣介導信號

表4 下調基因

基因 功能描述

RT1-Ba 免疫相關

Sncg 周圍神經發(fā)育

Rps9 蛋白合成

Ces3 羧酸酯水解酶活性，催化活性

Cdo1 半胱氨酸、?；撬岽x；氧化還原酶、半胱氨酸雙加氧酶活性

Aoc3 氧化還原酶活性；蛋白結合

Pcaf 組蛋白乙酰化酶，轉錄因子活性；負向調節(jié)細胞增殖

Fn1 蛋白酶活化劑活性；損傷應答；細胞基質黏附

F2r 細胞凋亡；G蛋白偶聯(lián)；凝血酶活性

Hsd11b1 脂代謝

Ca5b 金屬離子結合；裂解酶活性

Abhd5 脂代謝；蛋白結合；氧化還原酶活性

Cav2 負向調控內皮細胞增值；突觸蛋白結合；蛋白質二聚體活性

Nucb 鈣離子動態(tài)平衡；鈣離子結合

Gpd 磷酸葡萄糖脫氫酶；三磷酸-甘油脫氫酶活性

Golph3 高爾基體

Bnip3 蛋白質二聚體活性；氧和活性氧代謝；負向調控基因產物活性

Scd1 氧化還原酶活性；鐵離子結合；脂肪酸生物合成

Agt 絲氨酸內肽酶抑制劑活性；平滑肌細胞分化

Adipoq 蛋白結合；激素活性；脂肪細胞補體相關蛋白；正向調節(jié)脂肪

酸代謝；負向調控糖異生

4 討論

本實驗研究觀察到，OP模型共有118個差異表達基因，其中48條基因上調表達，70條基因下調表達，經GO分析后發(fā)現(xiàn)，下調基因主要與脂代謝、酶活性、蛋白質結合、鈣、鐵離子結合相關，上調基因與鈣離子結合、銅離子結合、膠原結合、低密度脂蛋白受體結合相關。

脂代謝與骨代謝之間有密切的聯(lián)系，脂肪細胞和成骨細胞之間也可以相互轉化[2]，已有研究發(fā)現(xiàn)，血脂水平與破骨細胞活性呈正相關[3]，n-3脂肪酸對骨有保護作用[4]，下調與肥胖呈負相關的脂肪分泌蛋白Adipoq[5]和上調Tra1-predicted均可致血脂升高，與以往研究結論一致。鐵是很多酶的活性中性，

在體內催化一系列成骨的化學反應[6]，本研究中Scd1下調表達。銅是許多氧化酶的組成成分，對骨的生長發(fā)育和修復等有重要作用，銅缺乏可引起膠原合成障礙，骨質疏松患者銅含量降低[7]，Sparc、Mt3均上調，可能是負向調節(jié)的結果。與膠原結合及蛋白酶活化劑活性相關的Fn1下調表達，F(xiàn)n能通過與CD44相互作用影響破骨前體細胞分化與成熟[8]?；蛟诠琴|密度方面可能起到50%～80%的作用，而且不同基因在不同年齡階段起著不同作用[9]，Agt幾乎參與了整個生物過程，Agt、Adipoq共同參與脂代謝調節(jié)，占生物過程40%，值得進一步研究。從分子水平上推測OP的發(fā)生發(fā)展是多基因多途徑調控的雙向動態(tài)調整的復雜過程。

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十大古曲范文第5篇

關鍵詞二化螟;發(fā)生特點;發(fā)生原因;防治措施;江蘇徐州;賈汪區(qū)

隨著產業(yè)結構的調整[1],紫莊鎮(zhèn)水稻種植面積達1 666.67 hm2,其中雜交稻1 400.00hm2,粳稻266.67hm2。二化螟是水稻上的主要害蟲,近年來發(fā)生日趨嚴重,1代螟蟲發(fā)生期間,依據(jù)發(fā)育進度調查及燈光誘蟲信息預測、預報,2009年為大發(fā)生,是20世紀80年代以來發(fā)生危害最重的一年。提出主治秧田,普治大田,壓低2代二化螟繁殖基數(shù)的防治對策。5月底至6月上旬,防治1～2次,6月下旬至7月上旬,根據(jù)不同水稻栽插期進行不同時間的本田普治1次,防治面積為1 333.33公頃次,失治面積約33.33hm2。8月上旬對2代二化螟進行了全面普治,防治面積為

1 666.67公頃次。

1發(fā)生特點

1.11生早、持續(xù)時間長、為害重,2生峰次多、時間長

2009年由于5月線路不通沒有開燈,到6月4號燈光通電正常,當天1代燈下蛾量為215頭,整個6月上旬每天平均蛾量為147.4頭,雌雄比為1.9∶1.0,6月12日為終見期,累計蛾量1 099頭。田間4月25日在稻樁上對越冬基數(shù)剝查,蛾量為8 116.5頭/hm2,較2008年多2 334.0頭/hm2。秧田6月1～3日進入發(fā)蛾高峰,當時秧田有卵1.0萬塊/hm2,6月10日止累計卵量為3.0萬塊/hm2,秧田發(fā)蛾盛期為5月27日至6月8日,持續(xù)了12d。2代燈下7月27日始見,而峰次較多、時間長,到8月24日一直為盛期,9月15日終止,其中8月1日、19日、27日3次峰日,當日蛾量分別為19、35、29頭,9月12日下旬仍零星出現(xiàn)。10月上旬,田間還能見到二化螟成蟲。從7月22日至9月30日,各旬累計蛾量分別為54、109、118、100、43、115、1頭,累計為540頭。

1.2螟害損失率高

由于2009年二化螟發(fā)生重,提出了秧田防治1～2次,本田普遍防治1次,甚至有的農戶防治3次,結果秧田危害較輕,本田危害較重。7月中旬調查被害穴率0～30%,平均8%,枯心苗率平均1.6%,高達5%,為害重的田塊“枯心塘”率均占全田的4%左右,嚴重達10%左右,殘蟲量9 450～30 001.5頭/hm2,平均為19 726.5頭/hm2,是2008年同期的2倍,一般雜交稻重于粳稻,部分失治田螟害穴率達40%以上,“枯心苗”達15%以上,失治面積約33.33hm2。2代同樣為大發(fā)生。由于1代殘蟲量較高,造成2代加重危害,9月15日調查(收獲前)失治田,“枯心塘”率占全田的15%以上,嚴重的達20%左右,螟害穴率平均為1.05%,殘蟲量19 863.75頭/hm2。失治面積100hm2左右,9月25日對產量損失測定,粒重下降11.8%,直接稻谷損失105.9t。

1.3地區(qū)差異均等

近幾年來,原紫莊鎮(zhèn)西部幾個村二化螟發(fā)生較重,東部發(fā)生輕,特別是中西部,如阮莊、趙莊、董莊、彭莊、徐臺等村,麥、稻年年連作,常年發(fā)生偏重,近2年東部螟蟲危害同樣加重,已遍及全鎮(zhèn)。

2發(fā)生原因

2.1蟲源基數(shù)較多,發(fā)生條件比較適宜

多年來,稻、麥連作實行免(少)耕,大面積的稻茬得不到清理,給螟蟲提供了“寬敞”的越冬場所,促使螟蟲有效積累。隨著人民生活水平的提高,家庭用材“生火”改用了“現(xiàn)代化”的能源生火,使大量稻草堆滿場間、地頭、路邊,再加上溝、河、路邊、雜草叢生,多年不清理,給越冬蟲源提供了棲息處。水稻落谷提前,1代螟蟲增加。近兩年來隨著品種的更換,水稻落谷由5月初到5月10日,提前到了4月26日至5月初,前移了5d左右,在1代二化螟發(fā)蛾盛期,而秧齡已達3～5葉,增加了1代的有效蛾量,提供了產卵場所。雜交稻早熟品種的擴大促進了積累。目前大面積推廣特優(yōu)559,破口抽穗與1代二化螟卵孵期不相吻合,有利于晚熟品種為害。越冬期干旱少雨,越冬成蟲活率高。近2年來秋冬一直干旱少雨,氣溫偏高,提高了越冬幼蟲的生存率和生活力。通過對越冬蟲源基數(shù)調查,1999年殘蟲量為1 950頭/hm2,2000年為4 911頭/hm2,2001年為6 769.5頭/hm2,2002年為8 161.5頭/hm2,為2009年二化螟大發(fā)生奠定了基礎。

2.2適生危害期延長

二化螟為害期與水稻敏感生育期吻合程度較高,特別是早栽稻與1代為害吻合,晚栽晚熟稻與2代為害吻合,這樣就延長了適生危害期。不同的品種、栽插期、成熟期及施肥水平,其為害程度不同[2]。通過調查,1代為害,早栽為害重于晚栽,施肥重的受害重于施肥輕的;2代為害,早熟品種輕于晚熟品種,特別是汕優(yōu)類品種為害重。另一個因素是水漿管理,灌水淺受害重于灌水深的。

2.3藥劑防治存在問題

藥劑品種不同效果有差異。目前農藥市場較混亂,品種多而復雜,同一藥劑成分不同,且品牌較多,不能統(tǒng)一性藥劑防治。實踐證明在總體推薦的藥品中,防治1代螟蟲適期內必須用內吸性強藥劑,如40%久效磷為最佳藥劑,而甲胺磷、樂果防效差不能使用。殺蟲雙、殺蟲丹應為當家主方。這為防2代螟蟲打下較牢的基礎。在防治2代適期內,如離收獲還有30多天,也可適當加些有機磷藥劑(在不超過標準殘留量下),否則用一次性藥劑在大發(fā)生的情況下難以控制。另外,施藥量要足,特別是2代防治藥液量要足,提倡放深水(5cm以上)細噴霧,不能粗噴。掌握水稻不同生育期、破口的早晚進行技術指導,在適期內防治后,根據(jù)情況適當二次補治,為壓低第2年的蟲源基數(shù)打下良好基礎。

3防治措施

盡量統(tǒng)一品種、統(tǒng)一指導、統(tǒng)一藥劑、統(tǒng)一防治。強化冬季清理雜草,銷毀積存稻草,耕翻稻茬殘蟲基數(shù),開展綜合防治[3]。治理農藥市場,選擇高效藥劑品種,加強基數(shù)研究,積極開發(fā)新型內吸、高效的治螟藥種。加強檢測系統(tǒng)建設,提供預測預報的準確率,認真實施綜防技術,狠抓農業(yè)防治,在化學防治中,應堅持實施“狠治1代、普治2代、壓低越冬代的基數(shù)”,妥善協(xié)調好各項技術措施[4]。改進耕作制度,實行水旱輪作,充分發(fā)揮“栽培避螟”的作用,把螟蟲的危害損失降到極限。

4參考文獻

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