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驗(yàn)收申請(qǐng)書范文第1篇

手術(shù)時(shí)機(jī)如何選擇？

總的來(lái)說(shuō)，青光眼在明確診斷后，通過藥物、激光等治療，眼壓仍得不到控制、視神經(jīng)損傷加重以及視野缺損繼續(xù)進(jìn)展，此時(shí)就需要手術(shù)治療。但對(duì)于不同類型的青光眼，手術(shù)時(shí)機(jī)的選擇還要考慮不同因素。

對(duì)于閉角型青光眼，需要考慮眼壓水平、前房角關(guān)閉程度及晶體混濁情況。閉角型青光眼在反復(fù)應(yīng)用降眼壓藥物并行激光周邊虹膜切除術(shù)后前房角仍沒有明顯加深且眼壓不能降至正常者，應(yīng)考慮早期手術(shù)治療。

對(duì)于開角型青光眼手術(shù)時(shí)機(jī)的選擇，多數(shù)醫(yī)生主張一旦藥物治療或選擇性激光小梁成形術(shù)無(wú)法控制原發(fā)性開角型青光眼達(dá)到目標(biāo)眼壓水平、視神經(jīng)損傷及視野缺損持續(xù)進(jìn)展，就應(yīng)盡早行小梁切除術(shù)。

先天性青光眼的患兒在明確診斷后，應(yīng)立即進(jìn)行手術(shù)治療，一般不考慮藥物治療。原因是藥物對(duì)先天性青光眼治療效果差，患兒不能很好配合，長(zhǎng)期使用藥物治療對(duì)小兒副作用較大。

對(duì)于某些繼發(fā)性青光眼，如葡萄膜炎性青光眼、外傷后房角后退性青光眼、新生血管性青光眼等，以治療繼發(fā)因素為主。當(dāng)繼發(fā)因素控制后眼壓仍不能恢復(fù)正常者才需要手術(shù)治療。手術(shù)成功率高嗎？

首先要明確青光眼治療是一個(gè)長(zhǎng)期甚至終身的過程，青光眼手術(shù)成功率也不是非常高，有時(shí)一次手術(shù)并不能解決問題，可能需要術(shù)后繼續(xù)依賴藥物治療甚至再次或多次手術(shù)。這是因?yàn)?，無(wú)論哪種類型的青光眼手術(shù)方式，設(shè)計(jì)思路基本是人為建立一條引流通道，通過這個(gè)通道將眼內(nèi)房水引流至眼外起到降眼壓目的。但由于人體修復(fù)功能及個(gè)體化差異等多種原因，隨著時(shí)間延長(zhǎng)這個(gè)“引流通道”可能會(huì)逐漸阻塞導(dǎo)致眼壓再次升高，故青光眼手術(shù)會(huì)有一定失敗率。

影響青光眼手術(shù)成功率的因素有很多，如疾病發(fā)現(xiàn)是否及時(shí)、發(fā)現(xiàn)時(shí)病程長(zhǎng)短、病情嚴(yán)重程度、青光眼類型、手術(shù)方式的選擇、既往手術(shù)次數(shù)、是否合并其他眼部及全身疾病、患者自身?xiàng)l件如年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況等。

白內(nèi)障手術(shù)能同時(shí)做嗎?

青光眼和白內(nèi)障可以同時(shí)發(fā)生，除了年齡因素外，青光眼和白內(nèi)障在發(fā)展過程中是相互影響的。目前青光眼白內(nèi)障聯(lián)合手術(shù)己成為某些合并白內(nèi)障的青光眼的一項(xiàng)成熟的治療方法，特別是合并白內(nèi)障的原發(fā)性閉角型青光眼。其優(yōu)點(diǎn)在于，聯(lián)合手術(shù)改變了以往分次的、間隔一定時(shí)間的傳統(tǒng)手術(shù)治療方法，對(duì)于合適的青光眼病人一次手術(shù)可同時(shí)解決兩大問題，減少多次手術(shù)給病人帶來(lái)的痛苦。聯(lián)合手術(shù)還可以解決多種導(dǎo)致與白內(nèi)障相關(guān)的青光眼的致病因素，使術(shù)后的并發(fā)癥明顯減少，大大提高了手術(shù)的成功率。

驗(yàn)收申請(qǐng)書范文第2篇

區(qū)安委：

20xx年初，區(qū)安委對(duì)我鎮(zhèn)安全生產(chǎn)情況進(jìn)行了全面檢查，根據(jù)檢查結(jié)果，我鎮(zhèn)福嶺磚廠被定為了區(qū)級(jí)安全隱患企業(yè)，其基本隱患是：制磚車間電路不規(guī)范、部分底壓線路老化。針對(duì)這一結(jié)果，東溝鎮(zhèn)人民政府高度重視，立即組織專人專班，督促該廠進(jìn)行了全面整改，鎮(zhèn)長(zhǎng)助理趙火俊任整改責(zé)任人，我們主要是從以下幾個(gè)方面做好整改工作的：

1、有計(jì)劃。我們知道檢查結(jié)果后，立即組織實(shí)施整改方案，針對(duì)存在的安全隱患，制定一套完整的整改計(jì)劃，根據(jù)“先急后緩”、“先大后小”的原則，對(duì)隱患進(jìn)行整改。

2、有隊(duì)伍。組織專人專班，督促整改落實(shí)，整改期間鎮(zhèn)政府及鎮(zhèn)安委辦必須有人參加負(fù)責(zé)整改期間的安全工作、材料組織工作、資金到位情況等。

3、有資金。整改期間，資金必須及時(shí)到位，以保證整改工作能順利進(jìn)行，有計(jì)劃的合理運(yùn)用這筆資金，讓整改達(dá)到最好的效果。

目前，整改工作已全面完工，鎮(zhèn)復(fù)檢工作組已經(jīng)過初步驗(yàn)收，現(xiàn)特申請(qǐng)區(qū)安委進(jìn)行復(fù)檢，消除我鎮(zhèn)福嶺磚廠區(qū)級(jí)安全隱患企業(yè)。

特此申請(qǐng)。

東溝鎮(zhèn)人民政府

20xx年10月10日

產(chǎn)品復(fù)檢申請(qǐng)書二：交收商品爭(zhēng)議復(fù)檢申請(qǐng)書

南寧(中國(guó)—東盟)商品交易所：

我公司憑貴交易所交收物流部簽發(fā)的《提貨憑證》(編號(hào) )于 年 月 日，在 指定交收倉(cāng)庫(kù)驗(yàn)收 單位提供的 (商品名稱)時(shí)，我公司對(duì)該批商品有如下異議：

一、質(zhì)量方面： 1、 2、

二、包裝方面： 1、 2、

三、其他方面： 1、 2、

現(xiàn)特向ncce提出申請(qǐng)，望貴交易所給予協(xié)調(diào)處理。

申請(qǐng)單位(蓋章)：

申請(qǐng)日期：

聯(lián)系人：

聯(lián)系電話：

產(chǎn)品復(fù)檢申請(qǐng)書三：粉雞蛋交收復(fù)檢申請(qǐng)書

武漢農(nóng)畜產(chǎn)品交易所：

我(公司/個(gè)人)根據(jù)貴交易所的 ea1207011001 號(hào)配對(duì)結(jié)果于 20xx年 7 月 6 日在 黃岡市浠水縣xxxxxxx交收倉(cāng)庫(kù)進(jìn)行交收?，F(xiàn)對(duì)初檢結(jié)果存在如下異議：

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

現(xiàn)特向武漢農(nóng)畜產(chǎn)品交易所提出復(fù)檢申請(qǐng)，望貴所給予協(xié)調(diào)處理。

申請(qǐng)人(簽章)：張某某

申請(qǐng)日期：20xx-7-6

聯(lián)系人：張某某

聯(lián)系電話：

驗(yàn)收申請(qǐng)書范文第3篇

1． （招標(biāo)人名稱）的（招標(biāo)工程項(xiàng)目名稱），已由（項(xiàng)目批準(zhǔn)機(jī)關(guān)名稱）批準(zhǔn)建設(shè)。現(xiàn)決定對(duì)該項(xiàng)目的工程施工進(jìn)行邀請(qǐng)招標(biāo)，擇優(yōu)選定承包人。

2． 本次招標(biāo)工程項(xiàng)目的概況如下：

（）〈說(shuō)明招標(biāo)工程項(xiàng)目的性質(zhì)、規(guī)模、結(jié)構(gòu)類型、招標(biāo)范圍及資金來(lái)源和落實(shí)情況等〉；

（）工程建設(shè)地點(diǎn)為______________________；

（）計(jì)劃開工日期為_____年____月______日，竣工日期為____年_____月____日，工期_____天；

（）工程質(zhì)量要求達(dá)到國(guó)家施工驗(yàn)收規(guī)范_________標(biāo)準(zhǔn)。

（不提供資格予審文件時(shí)）

3． 被邀請(qǐng)參加本次招標(biāo)項(xiàng)目投標(biāo)的投標(biāo)人均須具備建設(shè)行政主管部門核發(fā)的（建筑業(yè)企業(yè)資質(zhì)類別、資質(zhì)等級(jí)）級(jí)及以上和具有足夠資產(chǎn)及能力來(lái)有效地履行合同的施工企業(yè)。以及以下條件：

（1） 項(xiàng)目經(jīng)理資質(zhì)等級(jí)：_______；

（2） ……

4． 如你方對(duì)本工程上述（一個(gè)或多個(gè)）招標(biāo)工程項(xiàng)目感興趣，可向招標(biāo)人提出資格予審申請(qǐng)，只有資格予審合格，才有可能被邀請(qǐng)參加投標(biāo)。

5． 請(qǐng)你方按本邀請(qǐng)書要求將資格予審資料密封后，在_____年____月______日______時(shí)以前送至招標(biāo)人。

（提供資格予審文件時(shí)）

．被邀請(qǐng)參加本次招標(biāo)項(xiàng)目投標(biāo)的投標(biāo)人均須具備建設(shè)行政主管部門核發(fā)的（建筑業(yè)企業(yè)資質(zhì)類別、資質(zhì)等級(jí)）級(jí)及以上和具有足夠資產(chǎn)及能力來(lái)有效地履行合同的施工企業(yè)。

．如你方對(duì)本工程上述（一個(gè)或多個(gè)）招標(biāo)工程項(xiàng)目感興趣，可向招標(biāo)人提出資格予審申請(qǐng)，只有資格予審合格，才有可能被邀請(qǐng)參加投標(biāo)。

．請(qǐng)你方按本邀請(qǐng)書后所附招標(biāo)人或招標(biāo)機(jī)構(gòu)地址從招標(biāo)人或招標(biāo)機(jī)構(gòu)處獲取資格予審文件，時(shí)間為_____年____月______日至_____年____月______日，每天上午___時(shí)___分至___時(shí)___分，每天下午___時(shí)___分至___時(shí)___分（公休日與節(jié)假日除外）。

．資格予審文件每套售價(jià)______元人民幣，售后不退。如欲郵購(gòu)，可以書面形式通知招標(biāo)人，并另加郵費(fèi)每套______元，招標(biāo)人將立即以航空掛號(hào)方式向投標(biāo)人寄送資格予審文件，但在任何情況下，如寄送的文件遲到或丟失招標(biāo)人均不對(duì)此負(fù)責(zé)。

．資格予審申請(qǐng)書必須經(jīng)密封后，在_____年____月______日______時(shí)以前送至招標(biāo)人。申請(qǐng)書封面上應(yīng)清楚地注明“（招標(biāo)工程項(xiàng)目名稱和標(biāo)段名稱）資格予審申請(qǐng)書”字樣。

8． 遲到的申請(qǐng)資料（申請(qǐng)書）將被拒絕（以送達(dá)招標(biāo)人的時(shí)間為準(zhǔn)）。

．招標(biāo)人將及時(shí)通知投標(biāo)申請(qǐng)人資格予審結(jié)果，并預(yù)計(jì)于_____年____月______日發(fā)出資格予審合格通知書。

10．凡資格予審合格的投標(biāo)申請(qǐng)人，請(qǐng)按照資格予審合格通知書中通知的時(shí)間、地點(diǎn)和方式獲取招標(biāo)文件及有關(guān)資料。

11．有關(guān)本項(xiàng)目投標(biāo)的其他事宜，請(qǐng)與招標(biāo)人或招標(biāo)機(jī)構(gòu)聯(lián)系。

招標(biāo)人：________________________（蓋章）

單位地址：_______________________

郵政編碼：______________________ 聯(lián)系電話：_________________

傳真：__________________________ 聯(lián)系人：___________________

招標(biāo)機(jī)構(gòu)：________________________（蓋章）

單位地址：_______________________

郵政編碼：______________________ 聯(lián)系電話：_________________

驗(yàn)收申請(qǐng)書范文第4篇

農(nóng)村居民建房應(yīng)當(dāng)使用原有的宅基地和村內(nèi)空閑地，能夠利用劣地的不得占用好地，能夠占用荒地的不得占用耕地，使用國(guó)有土地的必須辦理出讓手續(xù)。下面就是小編給大家?guī)?lái)的2022農(nóng)村宅基地建房申請(qǐng)書，希望能幫助到大家!

2022農(nóng)村宅基地建房申請(qǐng)書_ _土地規(guī)劃局：

我叫___，是__鄉(xiāng)__村__組農(nóng)民。由于下列幾個(gè)原因，我申請(qǐng)新建住房。

一、我現(xiàn)住的房屋，還是20__年建的簡(jiǎn)陋木制瓦房，至今己近50年，雖經(jīng)過多次整修，但破損處仍然較多，修修補(bǔ)補(bǔ)既難解決漏雨漏風(fēng)問題，也影響房屋外觀。因而建新房非常有必要。

二、我現(xiàn)居住的房屋一共5間，60多平方米，要住8人，還要堆放糧食等，顯得十分擁擠。特別是我大兒子后年要娶媳婦，女方家要求必須有新房才肯嫁過來(lái)。為了改善現(xiàn)有的住房狀況，為.了我大兒子能順利成家，我也必須建新房。

三、這些年來(lái)，黨的政策越來(lái)越好，我們農(nóng)民的收入也一年比一年增加。我通過二十多年的辛勤勞動(dòng)，不斷積攢，已基本上攢夠了建新房(建成磚混水泥房)的費(fèi)用。只要上級(jí)一批準(zhǔn)，我就能馬上動(dòng)工。

四、我建房的`方案是：拆除現(xiàn)有的住房，主要在老地基建新房，另外占用我現(xiàn)住房背后的自留地40平方米。所建房屋為一樓一底，約200平方米。

特此申請(qǐng)，敬請(qǐng)審核批準(zhǔn)。

附：l.現(xiàn)住房照片2.生產(chǎn)小組的證明。

此致

敬禮!

申請(qǐng)人：申請(qǐng)書模板

__年__月__日

溫州農(nóng)村建房審批辦理流程(一)農(nóng)村村民向戶口所在地的村集體經(jīng)濟(jì)組織或者村民委員會(huì)提出建房書面申請(qǐng)，提交村集體經(jīng)濟(jì)組織、村民委員會(huì)討論審核。

(二)經(jīng)村集體經(jīng)濟(jì)組織、村民委員會(huì)討論通過后予以公示。公示無(wú)異議的，向鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處或在浙江政務(wù)服務(wù)網(wǎng)上遞交申請(qǐng)材料。

(三)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處重點(diǎn)審查申請(qǐng)人是否符合申請(qǐng)條件、擬用地是否符合宅基地合理布局要求和面積標(biāo)準(zhǔn)、擬用地是否符合相關(guān)規(guī)劃、宅基地和建房(規(guī)劃許可)申請(qǐng)是否經(jīng)過村組審核公示、是否有農(nóng)房設(shè)計(jì)方案等。符合條件的由鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處核準(zhǔn)農(nóng)村宅基地和建房(規(guī)劃許可)審批表并向申請(qǐng)人核發(fā)農(nóng)村宅基地批準(zhǔn)書和受托核發(fā)鄉(xiāng)村建設(shè)規(guī)劃許可證。

在城鎮(zhèn)建設(shè)用地范圍內(nèi)的農(nóng)民建房，由自然資源主管部門或鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處受托核發(fā)建設(shè)工程規(guī)劃許可證。

工程投資額在30萬(wàn)元以上并且建筑面積在300平方米以上的建筑工程，還應(yīng)當(dāng)由建設(shè)主管部門或鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處受托核發(fā)建設(shè)工程施工許可證。鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處要積極建立一個(gè)窗口對(duì)外受理、多部門內(nèi)部聯(lián)動(dòng)運(yùn)行的農(nóng)村宅基地用地建房聯(lián)審聯(lián)辦制度。

(四)申請(qǐng)人取得相關(guān)審批證書，并與建筑施工單位或農(nóng)村建筑工匠簽訂施工合同后，應(yīng)預(yù)約申請(qǐng)放樣。

鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處應(yīng)當(dāng)自收到建房村民放樣申請(qǐng)之日起7個(gè)工作日內(nèi)，及時(shí)組織相關(guān)人員到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行開工查驗(yàn)，實(shí)地丈量批放宅基地，確定建房位置。

(五)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)農(nóng)村住房施工現(xiàn)場(chǎng)的監(jiān)督巡查。建房村民應(yīng)當(dāng)將確定的基槽驗(yàn)收、竣工驗(yàn)收時(shí)間事先告知或者經(jīng)由村民委員會(huì)告知鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處。鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處屆時(shí)應(yīng)當(dāng)派員到場(chǎng)監(jiān)督并形成記錄。

(六)農(nóng)戶建房完工后，鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處組織相關(guān)部門進(jìn)行驗(yàn)收，實(shí)地檢查農(nóng)戶是否按照批準(zhǔn)面積、四至、建筑高度等要求使用宅基地，是否按照批準(zhǔn)面積和規(guī)劃要求建設(shè)住房等，并出具《農(nóng)村宅基地和建房(規(guī)劃許可)驗(yàn)收意見表》。通過驗(yàn)收的農(nóng)戶，應(yīng)及時(shí)向不動(dòng)產(chǎn)登記部門申請(qǐng)辦理不動(dòng)產(chǎn)登記。

(七)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處負(fù)責(zé)將農(nóng)村住房建設(shè)管理中收集的資料整理歸檔，參照城市建設(shè)檔案管理規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)農(nóng)村住房建設(shè)檔案管理并建立電子檔案，并及時(shí)將審批情況報(bào)縣級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村、自然資源、住房和城鄉(xiāng)建設(shè)主管部門備案。

具體事項(xiàng)可咨詢當(dāng)?shù)卮寮w經(jīng)濟(jì)組織、村民委員會(huì)，鄉(xiāng)(鎮(zhèn))人民政府、街道辦事處。

南京農(nóng)村自建房申請(qǐng)材料+審批時(shí)限【申請(qǐng)材料】

對(duì)于在規(guī)劃發(fā)展村中申請(qǐng)新建住宅或利用已有宅基地翻建、改建住宅的，由村民提出申請(qǐng)，在村(社區(qū))委員會(huì)出具確認(rèn)其符合申請(qǐng)建房資格的書面意見后，向鎮(zhèn)(街)申請(qǐng)辦理規(guī)劃許可，并提交以下材料：

(一)建設(shè)工程規(guī)劃許可申請(qǐng)表;

(二)戶籍證明和身份證件;

(三)宅基地使用證或土地權(quán)屬證明文件(占用農(nóng)用地的，需提供農(nóng)用地轉(zhuǎn)用證明文件);

(四)村(社區(qū))委員會(huì)意見;

(五)建筑物平面定位圖、建筑高度示意圖。

對(duì)于在規(guī)劃城鎮(zhèn)建設(shè)用地以外且近期無(wú)搬遷計(jì)劃的一般村，經(jīng)區(qū)規(guī)劃、國(guó)土等部門和所在鎮(zhèn)(街)認(rèn)定為正當(dāng)改善需求的村民建房，應(yīng)允許村民利用已有宅基地進(jìn)行住房建設(shè)。申請(qǐng)要件應(yīng)參照規(guī)劃發(fā)展村莊執(zhí)行。

【審批時(shí)限】

1.鎮(zhèn)(街)對(duì)村民的申請(qǐng)材料進(jìn)行初審。

符合條件的，由鎮(zhèn)(街)組織在項(xiàng)目所在村及村(社區(qū))委員會(huì)進(jìn)行公示(公示時(shí)間不少于10日)，并于10日內(nèi)(不含公示時(shí)間)將村民申報(bào)材料、鎮(zhèn)(街)初審意見和公示意見等報(bào)規(guī)劃分局審核。

2.規(guī)劃分局應(yīng)自受理之日起20日內(nèi)作出決定。

驗(yàn)收申請(qǐng)書范文第5篇

[關(guān)鍵詞] 褪黑素受體；再灌注損傷；腎臟

[中圖分類號(hào)] R692 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）20-0001-03

腎臟為高灌注器官，因而缺血再灌注損傷（I/R）在缺血性急性腎損傷的病理過程中起重要作用，是臨床常見的一個(gè)多因素、多途徑的復(fù)雜的病理過程[1]。然而，I/R的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為氧自由基是I/R發(fā)病過程中的重要因素[2]。褪黑素（melatonin，MT）是松果腺分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有廣泛的生理作用，如抗氧化、抗衰老、抗腫瘤及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等。研究證實(shí)，MT主要通過直接清除自由基和調(diào)節(jié)抗氧化酶發(fā)揮抗氧化作用[3，4]。褪黑素受體（MR）在人體器官組織中廣泛分布，褪黑素與其特異性膜受體結(jié)合后發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究證實(shí)，應(yīng)激狀態(tài)時(shí)組織細(xì)胞中MR降低[5，6]。本實(shí)驗(yàn)我們建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型，通過研究MR在缺血再灌注損傷大鼠腎臟的表達(dá)水平，進(jìn)一步闡明I/R的發(fā)生機(jī)制以及MR在I/R中的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的建立及分組

選取體重為250～280 g的SD大鼠24只，分為以下3組：①缺血再灌注組（n = 8）：2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠（45 mg/kg體重），500 u肝素鈉腹腔注射，進(jìn)腹后游離雙側(cè)腎臟，切除右腎，夾閉左腎動(dòng)、靜脈45 min，然后開放，縫合腹壁。②假手術(shù)組（n = 8）：手術(shù)步驟與缺血再灌注組相同，但僅切除右腎，不夾閉左腎動(dòng)、靜脈。③正常對(duì)照組（n = 8）：大鼠正常喂養(yǎng)，不做任何預(yù)處理。

1.2 主要儀器和試劑

Trizol試劑（美國(guó)GIBCO公司）；Taq DNA聚合酶（日本Takara公司）；10000×SYBR Green（美國(guó)Invitrogen公司）；MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和RNA酶抑制劑（美國(guó)epicentre公司）；UniCalD×C800全自動(dòng)生化儀（美國(guó)Beckman公司）；ABI PRISM 7900 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）；MTI、MT2受體引物、U6引物由上海英俊生物有限公司提供。

1.3 標(biāo)本采集和處理

實(shí)驗(yàn)大鼠分別于手術(shù)24 h后開腹經(jīng)腹腔靜脈采血，3 000 rpm/min離心15 min，取上清（血清）用于血肌酐和尿素氮水平檢測(cè)。處死各組大鼠，獲取腎臟組織。一部分在無(wú)RNA酶的研磨器內(nèi)加液氮反復(fù)研磨成粉狀，然后每50～100 mg組織樣品，加入1 mL的TRIZOL試劑，置于1.5 mL微量離心管并充分混勻，置于-80°C冰箱備用；另一部分用10%中性甲醛溶液固定后，常規(guī)石蠟包埋。

1.4 觀察指標(biāo)

①腎功能檢測(cè)：采用日本Olympus公司Au2700型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）濃度水平。②腎組織的病理學(xué)觀察：取各組大鼠同一部位腎臟組織常規(guī)制成石蠟標(biāo)本，切片行HE染色，200倍光鏡下觀察腎間質(zhì)小管病變程度。

1.5 RT-PCR測(cè)定MT1和MT2表達(dá)水平

MR1、MR2受體引物、U6引物由上海英俊生物有限公司提供（引物序列見表1）。①總RNA的提?。翰捎肨rizol法提取血清總RNA，異丙醇法濃縮RNA。NanoDrop ND-1000測(cè)定RNA濃度并評(píng)估純度，Agilent 2100 Bioanalyzer檢測(cè)RNA分子完整性。②逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：使用MMLV反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（按epicentre公司說(shuō)明書規(guī)范操作）。③熒光定量PCR反應(yīng)：將試劑按說(shuō)明書要求加入于反應(yīng)管中并置于PCR儀上。反應(yīng)條件如下：94℃ 1 min， 55℃ 1 min，72℃ 2 min延伸，40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后繼續(xù)從72℃緩慢加熱到99℃以建立PCR產(chǎn)物的熔解曲線（每5秒升高1℃），實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。④數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCT法（CT值定義為每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)）對(duì)MR1和MR2 表達(dá)進(jìn)行分析。

表1 RT-PCR的引物序列

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組數(shù)據(jù)的組間差異的分析采用方差分析和t檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清尿素氮及肌酐濃度水平比較

正常情況下，大鼠血清BUN和Cr濃度分別為（6.87±1.54） mmol/L和（24.17±4.29） μmol/L。缺血再灌注組大鼠血清BUN和Cr濃度分別為（34.73±7.95） mmol/L和（124.65±25.33） μmol/L，明顯高于正常組大鼠（P < 0.01）。假手術(shù)組大鼠血清BUN和Cr濃度略有升高，但和正常大鼠相比較差異不顯著（P > 0.05），見表 2。

2.2 各組大鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)變化觀察

光鏡下缺血再灌注組大鼠腎臟可見近曲小管出現(xiàn)上皮細(xì)胞空泡變性、壞死和管腔擴(kuò)張，其中可見管型和脫落細(xì)胞，間質(zhì)水腫。假手術(shù)組大鼠腎小管基底膜完整，小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯損傷。采用Paller法對(duì)腎小管損傷程度評(píng)分：每高倍鏡視野隨機(jī)選擇10個(gè)腎小管計(jì)分，腎小管明顯擴(kuò)張、細(xì)胞扁平1分；刷狀緣損傷1分，脫落2分；管型2分，腎小管管腔內(nèi)有脫落的、壞死的細(xì)胞（未成管型或細(xì)胞碎片）計(jì)1分。缺血再灌注組大鼠腎臟Paller評(píng)分結(jié)果明顯高于正常組和假手術(shù)組（P < 0.01），見表 2。

表2 各組大鼠腎功能水平和腎組織Paller評(píng)分（x±s）

注：與正常組比較，t = 5.878，P < 0.01；與正常組比較，t = 13.469，P < 0.01；與正常組比較，t = 10.074，P < 0.01

2.3 MR1和MR2各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎臟組織中的表達(dá)情況

以U6為內(nèi)參基因，熒光定量PCR顯示正常情況下大鼠腎臟組織中MR1和MR2 mRNA表達(dá)強(qiáng)度分別為（0.75±0.16）和（0.64±0.10），I/R處理24 h后腎臟組織中MR1和MR2的表達(dá)強(qiáng)度分別為（0.37±0.08）和（0.28±0.05），較正常組和假手術(shù)組顯著下降（P < 0.01）（圖 1）。

圖1 各組大鼠腎組織MT1和MT2表達(dá)情況

3 討論

腎臟缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，至今仍未完全闡明。其病理過程主要為缺血階段和再灌注階段：缺血階段是指由于血流量下降而使腎組織缺血缺氧的狀態(tài)；再灌注階段則是使缺血的組織恢復(fù)血流的過程，但是再灌注的過程可以進(jìn)一步加重缺血性組織的損傷。目前認(rèn)為氧化應(yīng)激狀態(tài)是導(dǎo)致腎缺血再灌注損傷的重要因素之一。其通過大量產(chǎn)生內(nèi)氧自由基（OFR）使脂質(zhì)過氧化破壞生物膜，而且還可以引起蛋白質(zhì)、核酸損傷而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[7]。此外，缺血缺氧后引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+的增加，形成Ca2+超載。腎小管上皮細(xì)胞和腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞所產(chǎn)生的腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素1、6、8（IL-1、6、8）等炎性因子和活性氧族也會(huì)加重缺血再灌注損傷[8，9]。

目前研究發(fā)現(xiàn)褪黑素是一種作用很強(qiáng)的內(nèi)源性抗氧化劑，能夠直接清除和抑制氧自由基產(chǎn)生， 抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少氧自由基引起的Ca2+超載，還能增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶的作用。因此褪黑素對(duì)心、腦、肝等器官缺血再灌注損傷具有較強(qiáng)的保護(hù)作用[10，11]。褪黑素受體（MR）屬G 蛋白偶聯(lián)受體超家族（GPCRs）。G蛋白系統(tǒng)主要分為刺激性G蛋白（Gs）及抑制性G蛋白（Gi）系統(tǒng)。MR為膜受體， 通過特異性與褪黑素結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。目前研究證實(shí)，人體內(nèi)許多組織器官都有褪黑素受體表達(dá)，其中主要為MRI和MR2 兩種亞型[12]。研究發(fā)現(xiàn)，生理狀態(tài)的改變或病理狀態(tài)下，人體褪黑素受體含量會(huì)隨之發(fā)生改變[13，14]。有研究顯示，在生理性狀態(tài)下，大鼠游泳前后體內(nèi)MT和MR的表達(dá)水平會(huì)發(fā)生改變，提示在應(yīng)激狀態(tài)下MT 升高的同時(shí)而MR 水平降低。王瑩等[15]報(bào)道缺血性腦損傷中，大鼠腎上腺組織MT 升高、MR 降低，給予外源性MT 可抑制缺氧缺血導(dǎo)致的過度應(yīng)激損傷，提示MT 和MR 在機(jī)體抗應(yīng)激過程中起一定作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，正常情況下大鼠腎組織中褪黑素受體MR1和MR2 mRNA表達(dá)強(qiáng)度分別為（0.75±0.16）和（0.64±0.10），缺血再灌注應(yīng)激可以導(dǎo)致大鼠腎組織中褪黑素受體表達(dá)水平明顯下調(diào)，I/R處理24 h后腎臟組織中MR1和MR2的表達(dá)強(qiáng)度分別為（0.37±0.08）和（0.28±0.05），較正常組和假手術(shù)組顯著下降（P < 0.01）。假手術(shù)組大鼠腎臟組織中MR表達(dá)水平較正常略有下降，但是并不明顯。以上的研究數(shù)據(jù)提示，MR表達(dá)水平的下降與應(yīng)激狀態(tài)下腎臟組織損傷程度有關(guān)。即應(yīng)激導(dǎo)致的損傷程度越重，MR的表達(dá)水平越低。這與前面的文獻(xiàn)報(bào)道是一致的。

總之，我們的研究表明應(yīng)激器官組織中MR表達(dá)水平不僅可以反映應(yīng)激損傷程度，而且其水平變化程度也可能參與調(diào)控應(yīng)激過程。因此，進(jìn)一步研究MR在腎臟I/R損傷中的作用及其機(jī)制，不僅能夠提高我們對(duì)MR與相關(guān)疾病關(guān)系的認(rèn)識(shí)和診療水平，也將為臨床有效治療腎臟I/R損傷提供新的思路和方法。

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