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ppt結(jié)束語范文第1篇

關(guān)鍵詞：IPTV網(wǎng)絡(luò)；P2P；技術(shù)開發(fā)；CDN

中圖分類號(hào)：TP393.01文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：16727800（2011）012011802

作者簡(jiǎn)介：宋利(1976-)，女，湖北蒲圻人，碩士，中國(guó)電信武漢分公司增值業(yè)務(wù)部維護(hù)服務(wù)室通信工程師，研究方向?yàn)楣芾硇畔⒒?/p>

0引言

IPTV（Internet Protocol Television，互聯(lián)網(wǎng)協(xié)議電視）系利用寬帶，以電視、電腦為主要終端電器，在IP網(wǎng)絡(luò)上傳送包含電視、視頻、圖形和數(shù)據(jù)等，并提供服務(wù)質(zhì)量/服務(wù)感受(QoS/QoE)保證、安全、交互性和可靠性的可管理的多媒體業(yè)務(wù)。P2P技術(shù)因?yàn)镾kype以及BT文件傳輸?shù)葢?yīng)用而為一般網(wǎng)絡(luò)用戶所熟悉。近年來，如何利用P2P提供網(wǎng)絡(luò)互動(dòng)電視之P2PIPTV系統(tǒng)已成為IPTV應(yīng)用技術(shù)發(fā)展的一個(gè)新研究方向。因此，本文針對(duì)P2PIPTV技術(shù)發(fā)展中存在的問題進(jìn)行研究。

目前的IPTV系統(tǒng)多采用C/S模式提供單播和點(diǎn)播業(yè)務(wù)（包括VoD和時(shí)移電視），由于服務(wù)器輸出/輸入(I/O)瓶頸的限制，一臺(tái)服務(wù)器只能夠支持有限的并發(fā)流。如果用戶較多或者服務(wù)器與用戶距離較遠(yuǎn)發(fā)生阻塞時(shí)，用戶觀看節(jié)目效果就會(huì)降低。為減輕中小服務(wù)器的負(fù)擔(dān)、提供用戶訪問內(nèi)容的響應(yīng)速度，當(dāng)前比較主流的IPTV網(wǎng)絡(luò)一是采用組播來提供廣播，二是在媒體分發(fā)時(shí)大多采用內(nèi)容分發(fā)網(wǎng)絡(luò)（CDN）技術(shù)，通過在現(xiàn)有的Internet中增加一層新的CDN網(wǎng)絡(luò)架構(gòu)，將內(nèi)容到離用戶最近的網(wǎng)絡(luò)“邊緣”，使用戶可以就近取到所需要的內(nèi)容，提高用戶訪問網(wǎng)站的響應(yīng)速度。

當(dāng)用戶要觀看節(jié)目時(shí)，首先需要確定最接近用戶的最佳CDN服務(wù)器，即上面的邊緣服務(wù)器，同時(shí)將用戶的請(qǐng)求指向該節(jié)點(diǎn)。CDN可以明顯提高Internet網(wǎng)絡(luò)中信息流動(dòng)的效率，從技術(shù)上解決由于網(wǎng)絡(luò)帶寬小、用戶訪問量大、網(wǎng)點(diǎn)分布不均等問題，提高用戶訪問網(wǎng)站的響應(yīng)速度。當(dāng)用戶的請(qǐng)求到達(dá)指定節(jié)點(diǎn)時(shí)，CDN的服務(wù)器（邊緣服務(wù)器）負(fù)責(zé)將用戶請(qǐng)求的內(nèi)容提供給用戶。通過用戶定位算法和服務(wù)器健康檢測(cè)算法綜合后的數(shù)據(jù)，可以將用戶的請(qǐng)求就近定向到分布在網(wǎng)絡(luò)邊緣的服務(wù)器上，保證用戶的訪問能得到更及時(shí)可靠的響應(yīng)。

1規(guī)模與成本問題

現(xiàn)有的網(wǎng)絡(luò)要支持組播就需要進(jìn)行改造，這會(huì)直接導(dǎo)致運(yùn)營(yíng)成本的增加。CDN架構(gòu)可將IPTV頭端對(duì)外的帶寬分散到各個(gè)區(qū)域，能夠緩解因?yàn)榉?wù)的用戶數(shù)不斷增長(zhǎng)而給中心服務(wù)器帶來的性能和帶寬壓力。但是當(dāng)請(qǐng)求的用戶數(shù)持續(xù)增長(zhǎng)時(shí)，邊緣服務(wù)器仍然會(huì)面臨著性能瓶頸，不僅需要部署更多的流媒體服務(wù)器還有極大的網(wǎng)絡(luò)帶寬，隨著用戶規(guī)模的增長(zhǎng)會(huì)帶來實(shí)際運(yùn)營(yíng)成本的持續(xù)增漲。

P2P最大的特點(diǎn)是隨著規(guī)模的增長(zhǎng)而成本直線下降。當(dāng)今互聯(lián)網(wǎng)，P2P技術(shù)通過著名的長(zhǎng)尾效應(yīng)，在提高用戶的下載或?yàn)g覽速度的同時(shí)又降低了對(duì)內(nèi)容服務(wù)器的依賴。P2P方式下，每個(gè)對(duì)等實(shí)體（Peer）既是服務(wù)的享用者，又是服務(wù)的提供者。以BT下載文件為例，下載同一個(gè)文件的眾多用戶，每一個(gè)用戶終端都只需要下載文件的一個(gè)片段，然后互相交換，最終用戶都可以得到所有片段以組合成一個(gè)完整的文件。該P(yáng)2P架構(gòu)的優(yōu)點(diǎn)在于用戶數(shù)增加時(shí)并不會(huì)同時(shí)增加服務(wù)器端的負(fù)載，還可以規(guī)避單點(diǎn)故障的無難題，極大提高了系統(tǒng)的擴(kuò)展性。

但是P2P技術(shù)往往會(huì)無節(jié)制吞噬網(wǎng)絡(luò)帶寬，這是P2P技術(shù)最大的劣勢(shì)。P2P技術(shù)采用的資源定位算法路由效率較低，如泛洪算法，給網(wǎng)絡(luò)帶來巨大的查詢流量；同時(shí)P2P技術(shù)在選擇提供服務(wù)的服務(wù)端對(duì)等點(diǎn)時(shí)仍缺乏有效的管理和引導(dǎo)，基本處于自由放任狀態(tài)，導(dǎo)致大量不合理的P2P流量，同時(shí)吞噬了大量的網(wǎng)絡(luò)帶寬資源。

由于P2P應(yīng)用開發(fā)商作為網(wǎng)絡(luò)的使用者，他并不關(guān)心網(wǎng)絡(luò)的運(yùn)維成本，而只是想著如何充分利用網(wǎng)絡(luò)資源，所以，非常多的P2P應(yīng)用在改進(jìn)P2P對(duì)網(wǎng)絡(luò)帶寬的吞噬上進(jìn)展不大。而網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商則由于P2P大量應(yīng)用而導(dǎo)致無法從持續(xù)網(wǎng)絡(luò)擴(kuò)容中獲得經(jīng)濟(jì)利益，因此，網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商對(duì)P2P技術(shù)采取的是反對(duì)的態(tài)度，2002年，以AT&T及Comcast為代表的部分美國(guó)網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商公開表示要對(duì)P2P應(yīng)用進(jìn)行限速和攔截。

隨著時(shí)間的推移，P2P應(yīng)用越來越廣泛，全球P2P數(shù)據(jù)流量已占全球因特網(wǎng)總數(shù)據(jù)流量的70%以上，在中國(guó)的情況也類似。為此，越來越多的網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商開始采用合作的態(tài)度與內(nèi)容提供商進(jìn)行對(duì)話，提出了運(yùn)營(yíng)商主動(dòng)參與的P2P技術(shù)，這種技術(shù)的全稱是“運(yùn)營(yíng)商主動(dòng)參與的P2P技術(shù)（Proactive Network Provider Participation for P2P）”，通常簡(jiǎn)稱P4P技術(shù)。從Open P4P網(wǎng)站公布的P4P現(xiàn)場(chǎng)使用結(jié)果看，使用了P4P技術(shù)的P2P網(wǎng)絡(luò)，總P2P占用帶寬至少減少到原來的1/2。P4P技術(shù)成熟度還有待市場(chǎng)的檢驗(yàn)，但這一思想完全可以借鑒到IPTV網(wǎng)絡(luò)中來。

2IPTV網(wǎng)絡(luò)中CND和P2P技術(shù)結(jié)合點(diǎn)分析

自從2007年起，國(guó)外CDN服務(wù)商和電信運(yùn)營(yíng)商已經(jīng)開始利用P2P技術(shù)降低CDN部署的高昂成本：Internap和P2P服務(wù)商Pando Networks共同了帶有P2P接入的Internap CDN平臺(tái)；Velocix將P2P技術(shù)與傳統(tǒng)CDN技術(shù)結(jié)合創(chuàng)建一個(gè)混合CDN或?qū)Φ容o助CDN；目前中國(guó)國(guó)內(nèi)有10多家網(wǎng)站采用自主開發(fā)的軟件提供P2P Internet流媒體直播視頻服務(wù)。用戶最多的是PPLive網(wǎng)采用的Synacast系統(tǒng)。由于采用了P2P技術(shù)進(jìn)行流媒體分發(fā)，1臺(tái)100Mb/s接入互聯(lián)網(wǎng)的普通PC服務(wù)器可以同時(shí)提供5~10路視頻節(jié)目的直播，每一路節(jié)目均可以支持百萬用戶同時(shí)收視，播放的電視節(jié)目碼率一般為3~500kb/s的碼率，有些頻道已經(jīng)開始提供800kb/s的碼率，超過VCD的畫面質(zhì)量。

目前在CDN中引入P2P技術(shù)是IPTV領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)，有在邊緣服務(wù)器層面引入P2P技術(shù)，也有在終端層面引入P2P技術(shù)，還有同時(shí)在邊緣服務(wù)器和終端層面同時(shí)引入P2P技術(shù)。由于CDN網(wǎng)絡(luò)是一種分域的網(wǎng)絡(luò)，特定域內(nèi)的邊緣服務(wù)器數(shù)量并不太多，如果僅在邊緣服務(wù)器直接實(shí)現(xiàn)P2P并不能充分發(fā)揮長(zhǎng)尾效應(yīng)。因此，要徹底改變當(dāng)用戶激增時(shí)網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器瓶頸就必須在終端層面引入P2P技術(shù)。

綜合考慮終端的成本和能力，以及終端在線的隨意性，邊緣服務(wù)器還必須作為備選對(duì)等服務(wù)點(diǎn)，從而提高用戶資源定位的成功率，避免大量的P2P查詢流量。由于網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商與內(nèi)容運(yùn)營(yíng)商在P2P技術(shù)的使用上存在態(tài)度上的差異的。P4P技術(shù)在解決P2P流量方面給我們提供了許多可以借鑒的經(jīng)驗(yàn)。網(wǎng)絡(luò)運(yùn)營(yíng)商應(yīng)采用積極態(tài)度，參與到P2P數(shù)據(jù)的交換中來，積極疏導(dǎo)P2P垃圾查詢流量，對(duì)用戶的資源請(qǐng)求進(jìn)行有效的管理和引導(dǎo)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)P2P流量的優(yōu)化。

3結(jié)束語

IPTV的發(fā)展面臨客戶機(jī)/服務(wù)器模式的制約，在IPTV網(wǎng)絡(luò)中引入P2P技術(shù)是近年來IPTV技術(shù)發(fā)展的趨勢(shì)，如何在引入IPTV技術(shù)同時(shí)避免P2P技術(shù)自身缺陷（如流量問題、安全問題等等）是在CDN網(wǎng)絡(luò)中引入P2P技術(shù)的難點(diǎn)。面對(duì)日益增長(zhǎng)的網(wǎng)絡(luò)點(diǎn)播用戶，如何維護(hù)IPTV網(wǎng)絡(luò)的可管理性和安全性，同時(shí)充分利用現(xiàn)有資源、降低運(yùn)營(yíng)成本，同時(shí)又帶給網(wǎng)絡(luò)用戶良好的體驗(yàn)，在以CDN結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的流媒體分發(fā)網(wǎng)絡(luò)中融合P2P技術(shù)不失為一種有意義的嘗試和探索。

參考文獻(xiàn)：

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The Technical Analysis for Combining CND

and P2P in IPTV Network

ppt結(jié)束語范文第2篇

結(jié)合PowerPoint軟件中的母版技術(shù)特別是2007／2010版提供的主題功能，能夠?qū)崿F(xiàn)PPT課件界面的自主靈活設(shè)計(jì)。

一、PPT課件界面設(shè)計(jì)相關(guān)工具介紹

在PowerPoint中的模板、配色方案、母版為界面設(shè)計(jì)提供了統(tǒng)一設(shè)置的工具，點(diǎn)位符及各種調(diào)整工具、形狀填充等工具可以對(duì)界面中的各種元素進(jìn)行靈活修改。特別是PowerPoint2007／2010提供了主題功能，將母版，字體，色彩等集成進(jìn)行統(tǒng)一設(shè)計(jì)，不僅實(shí)現(xiàn)了界面設(shè)計(jì)與內(nèi)容的相對(duì)獨(dú)立，也提高了界面設(shè)計(jì)的效率。另外PowerPoint中的SmadArt、圖像及文字的快速樣式設(shè)置也豐富了界面元素的美化方式，增強(qiáng)了PPT課件界面設(shè)計(jì)能力。

配色方案是PowerPoint中設(shè)置及管理色彩的工具，編輯預(yù)置的顏色可以統(tǒng)一修改所有對(duì)象的顏色效果，PPT課件界面設(shè)計(jì)可以用配色方案設(shè)置超級(jí)鏈接，文本框前景、背景等各種對(duì)象的顏色。

PowerPoint中的主題是對(duì)幻燈片中對(duì)象的格式預(yù)置，包括主題顏色、字體、樣式等，通過對(duì)主題的修改，可以將編輯的效果應(yīng)用于圖表、SmartArt圖形、形狀、圖片、表格、藝術(shù)字和文本。使用主題效果庫(kù)，可以替換不同的效果集以快速更改這些對(duì)象的外觀。

模板是PPT課件界面設(shè)計(jì)中最常用但也最容易出問題的工具，模板是根據(jù)幻燈片的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的一系列幻燈片效果。近年來PPF模板設(shè)計(jì)有了很大的發(fā)展，內(nèi)容更為豐富，一般包括：片頭動(dòng)畫、封面、目錄、過渡頁、內(nèi)頁、封底、片尾動(dòng)畫等頁面。

母版是相應(yīng)版式的幻燈片模型，PowerPoint2003中母版版式有兩種：標(biāo)題母版和幻燈片母版，在PowerPoint2007／2010中每一種版式的幻燈片都有相應(yīng)的母版，設(shè)置更為靈活，通過母版可以統(tǒng)一修改某一類(版式)幻燈片的布局和外觀，PowerPoint的多母版技術(shù)是指模板(主題中)包含多種母版版式，幻燈片可以按相應(yīng)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。

二、基于主題的PPT課件界面設(shè)計(jì)方法

基于主題的PPT界面設(shè)計(jì)方法有兩層含義，一層是指在PPT界面設(shè)計(jì)中利用主題技術(shù)進(jìn)行界面設(shè)計(jì)，而不是采用直接套用模板的方式修改PPT的界面，主題技術(shù)包括：自定義主題設(shè)置、自定義主題保存、主題利用等(PPT主題方法適用于PowerPoint2007／2010)。

1　自定義主題設(shè)置。自定義主題設(shè)置包括PPT的色彩配置、字體設(shè)置、效果選擇、背景設(shè)置等，如果需要修改幻燈片的布局與版面可以對(duì)主題的母版進(jìn)行重新定義和編輯。

2　自定義主題保存：在PPT中幻燈片主題可以保存為獨(dú)立的主題文件，方便界面設(shè)計(jì)方案的遷移與重用。

3　主題利用是指將已有的主題設(shè)計(jì)應(yīng)用到新的課件作品中，在PowerPoint中通過瀏覽主題選擇進(jìn)行選擇即可。

基于主題的PPT界面設(shè)計(jì)第二層含義是指界面的風(fēng)格應(yīng)當(dāng)和課件內(nèi)容的主題相統(tǒng)一。實(shí)現(xiàn)內(nèi)容與主題相統(tǒng)一的方法可以通過在PPT母版或相應(yīng)幻燈片中預(yù)留相應(yīng)的占位符或者主題替換圖片實(shí)現(xiàn)，課件制作者可以根據(jù)課件內(nèi)容提取出能表達(dá)其特點(diǎn)的相關(guān)圖片，利用PPT中的替換圖片功能。從而快速更改PPT界面，實(shí)現(xiàn)內(nèi)容與主題的統(tǒng)一。

三、基于主題的PPT課件界面設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)方法

課件制作追求內(nèi)容與形式的統(tǒng)一，但另一方面卻又希望課件具體內(nèi)容與顯示界面相對(duì)分離，界面與內(nèi)容的分離能夠大大提高界面修改的效率，并且方便課件界面的重復(fù)使用，PPT主題統(tǒng)一管理PPT的顯示外觀，集成了PPT的母版(模板)、配色方案、字體設(shè)置等，下面介紹利用主題進(jìn)行PPT界面設(shè)計(jì)的方法及主要過程。

1　制作課件內(nèi)容幻燈片，不需要任何修飾和美化。這是實(shí)現(xiàn)內(nèi)容與界面分享的前提，界面通過主題進(jìn)行管理和控制，與具體內(nèi)容盡可能無關(guān)，內(nèi)容的顯示如色彩、大小和樣式通過主題進(jìn)行相應(yīng)設(shè)置。

2　選擇一個(gè)模板幻燈片或作品，保存主題。在選擇過程中應(yīng)當(dāng)注意自己的課件的內(nèi)容，學(xué)科特點(diǎn)，適用對(duì)象等，讓界面與課件內(nèi)容相統(tǒng)一，最好的方法是自己在一定的基礎(chǔ)上對(duì)母版進(jìn)行重新設(shè)計(jì)，增加能表達(dá)內(nèi)容主題的元素，并且經(jīng)過一定的積累形成自己學(xué)科課件的界面風(fēng)格。

3　將自己保存的主題應(yīng)用到課件內(nèi)容幻燈片上。

4　在課件內(nèi)容幻燈上選擇幻燈片的版式，統(tǒng)一修改字體和顏色以及其他對(duì)象的效果。

5　對(duì)于無法應(yīng)用版式的幻燈片可以采用重用幻燈片的方式導(dǎo)入模板或作品中的幻燈片，或在母版設(shè)計(jì)中添加新的母版樣式，重用幻燈是指在PPT插入幻燈片中選擇，不是復(fù)制與粘貼幻燈片。

ppt結(jié)束語范文第3篇

[關(guān)鍵詞]ASP. NET 數(shù)據(jù)庫(kù) 動(dòng)態(tài) SQL

最近,一些基于TCP或IP的Internet或Intranet技術(shù),被廣泛應(yīng)用于各級(jí)企業(yè)網(wǎng)站,其中一個(gè)很重要的手段就是建立Web站點(diǎn)和瀏覽信息。傳統(tǒng)的靜態(tài)網(wǎng)頁技術(shù)已越來越不能滿足用戶的需求,因此各種動(dòng)態(tài)網(wǎng)頁技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。ASP就是目前比較流行的動(dòng)態(tài)網(wǎng)頁技術(shù)之一,而ASP. NET是微軟的新一代動(dòng)態(tài)網(wǎng)頁技術(shù)。ASP. NET不是ASP的簡(jiǎn)單升級(jí),而是微軟公司推出的新一代Active Server Pages,是微軟公司推出的新一代體系結(jié)構(gòu)Microsoft. NET的一部分。Microsoft. NET主要由W indows. NET、. NETFramework、. NET Enterp rise Server、Orchestration、MSN. NET、OFFICE. NET、Visual Studio. NET、bCentral. NET等部分組成。其中全新的技術(shù)架構(gòu)會(huì)使編程變得更簡(jiǎn)單,ASP. NET是在抓住ASP的最大優(yōu)點(diǎn)并全力使其擴(kuò)大化的基礎(chǔ)上開發(fā)出來的,同時(shí)也修復(fù)了許多ASP運(yùn)行時(shí)會(huì)發(fā)生的錯(cuò)誤。

一、ASP. NET的技術(shù)的發(fā)展及現(xiàn)狀

ASP. NET是建立在微軟新一代. NET平臺(tái)架構(gòu)上, 利用普通語言運(yùn)行時(shí)( CommonLanguageRuntime, CLR)在服務(wù)器后端為用戶提供建立強(qiáng)大的企業(yè)級(jí)Web應(yīng)用服務(wù)的編程框架。ASP. NET可完全利用. NET架構(gòu)的強(qiáng)大、安全和高效的平臺(tái)特性,是運(yùn)行在服務(wù)器后端編譯后的普通語言運(yùn)行時(shí)的代碼,運(yùn)行時(shí)早綁定( Early B inding) 、即時(shí)編譯、本地優(yōu)化、緩存服務(wù)、零安裝配置和基于運(yùn)行時(shí)代碼受管與驗(yàn)證的安全機(jī)制等都為ASP. NET帶來了卓越的性能。對(duì)XML,SOAP,WSDL等Internet標(biāo)準(zhǔn)的強(qiáng)有力的支持,為ASP. NET在異構(gòu)網(wǎng)絡(luò)里提供了強(qiáng)大的擴(kuò)展性。

二、ASP. NET的優(yōu)點(diǎn)

1.支持多種腳本語言

ASP曾在腳本引擎方面受到限制，特別是VBScrip t和JavaScript。而可以支持中的多種語言,例如C#、VB. Net等。這意味著可以擺脫VBScrip t的語言限制,代碼將是編譯后運(yùn)行的而不是原來的解釋執(zhí)行。

2.服務(wù)器處理

在Internet上作為服務(wù)的軟件是WebServices的核心。ASP. NET 提供了一個(gè)WebServices的基礎(chǔ)構(gòu)造環(huán)境,從而使開發(fā)人員能夠?yàn)檫@個(gè)服務(wù)模型創(chuàng)建服務(wù)。Web Services的不同之處在于,它允許你暴露一個(gè)服務(wù)而不必暴露數(shù)據(jù)。當(dāng)自動(dòng)提供商業(yè)服務(wù)的同時(shí),代碼和數(shù)據(jù)都是安全的。

3.代碼與內(nèi)容的分離

通常ASP代碼是和內(nèi)容混合在一起的,設(shè)計(jì)和編寫代碼同時(shí)進(jìn)行會(huì)變得困難。如果頁面需要升級(jí),就會(huì)存在危險(xiǎn)的潛在問題。ASP. NET可通過兩種方法來解決這個(gè)問題。第一種是代碼內(nèi)聯(lián)模型,在該模型中代碼仍然保存在ASP. NET頁面中,但它并不和HTML混合在一起。第二種分離代碼和內(nèi)容的方法是代碼后置模型,該模型中的代碼被完全轉(zhuǎn)移到一個(gè)單獨(dú)的文件中。

4.更好的代碼控制

對(duì)于COM對(duì)象不再需要再在服務(wù)器上注冊(cè)這個(gè)功能,是非常受程序員喜愛的。但是通過這種過程簡(jiǎn)化,你再也不能夠在你的服務(wù)器上運(yùn)行另外一個(gè)DLL版本,并且代碼相當(dāng)保密。這就意味著,如果沒有正確的開發(fā)工具和源代碼,很難改變代碼。

5.更好的升級(jí)能力

此系統(tǒng)建成,本身有著一定的特性,以改進(jìn)多處理器環(huán)境中的性能。例如, session state能夠通過單獨(dú)的處理器來維持,在一個(gè)單獨(dú)的機(jī)器上,甚至在數(shù)據(jù)庫(kù)中允許交叉的服務(wù)器會(huì)話。

三、ASP. NET的運(yùn)行環(huán)境

a. 服務(wù)器端:Windows 2003 Server。

b. 客戶端: Internet Exp lorer5.5以上。

c. ASP的開發(fā)環(huán)境:Visual 2005。

d. ASP. NET的開發(fā)語言: ,C#。

四、ASP. NET與WEB數(shù)據(jù)庫(kù)的連接

ASP. NET不僅帶來了,還帶來了SQL Managed Provider。這樣在里,我們就有了三種連接數(shù)據(jù)庫(kù)的方式:

(1)ADO. NETManaged Provider

(2)SQL Managed Provider

(3)ADO. NETManaged Provider +ODBC

其中,方式(1)可以連接到任何ODBC 或者OLEDB數(shù)據(jù)中心,而方式(2)可以連接到MS SQLServer。三種方法的對(duì)比如下:

一般來說,這三種存取數(shù)據(jù)庫(kù)的方法中, SQL Managed Provider 效率最高, 其次是ADO. NETManaged Provider + OLEDB,最差的是ADO. NETManaged Provider +ODBC。

SQL Managed Provider要優(yōu)于 Managed Provider, 而從ODBC 和OLEDB的對(duì)比來看,OLEDB要優(yōu)于ODBC。

ASP. Net與Access數(shù)據(jù)庫(kù)連接:

< %@ Import Namespace =“system. data. oledb”%>

< %@ Import Namespace =“system. data”%>

< %@ Import Namespace =”System. IO“%>

< %Dim dbconn asOledbConnectiondbconn = new OledbConnection (”p rovider = microsoft. jet. oledb. 4.0; data source=“ &server.MapPath (“XXX. mdb”))%>

ASP. Net與SQL數(shù)據(jù)庫(kù)連接:

< %@ Import Namespace =“system. data. oledb”% >

< %@ Import Namespace =“system. data”% >

< %@ Import Namespace =“System. IO”% >

< % Dim dbconn asOledbConnectiondbconn = new OledbConnection (“ p rovider =sqloledb; server =主機(jī)名稱; initial catalog =數(shù)據(jù)庫(kù)名稱; user id =XXX; password =XXX; ” ) % >建立記錄集對(duì)象:

< %Dim i as integerDim sql as OledbDataAdap terDim ds as new datasetsql = new OledbDataAdap ter (“ select 3 from contact” , dbconn)sql. fill ( ds, “ guest” ) % >

五、總結(jié)

ASP. NET從現(xiàn)有的ASP結(jié)構(gòu)體系上跨出了一大步, 其整個(gè)構(gòu)造體系使開發(fā)結(jié)構(gòu)化的應(yīng)用程序變?yōu)榭赡?。Web表單設(shè)計(jì)帶來了一種更加直接和易于使用的開發(fā)模式。服務(wù)器控件增加了提供公共功能的能力,從而使擴(kuò)展和加強(qiáng)現(xiàn)有功能變得容易。數(shù)據(jù)捆綁使創(chuàng)建數(shù)據(jù)約束型應(yīng)用程序變得十分簡(jiǎn)單。它不但具有許多很棒的新功能,而且還有一個(gè)用于開發(fā)Web應(yīng)用程序的真正框架。使用ASP. NET的組件,可以輕松地實(shí)現(xiàn)對(duì)網(wǎng)頁內(nèi)容的動(dòng)態(tài)控制,根據(jù)不同的瀏覽者,生成不同的頁面內(nèi)容。在ADO. NET的支持下, ASP. NET與遠(yuǎn)程主機(jī)上的數(shù)據(jù)庫(kù)的連接與操作變得非常簡(jiǎn)單。隨著越來越多的開發(fā)者開始使用這種新技術(shù),給Internet的發(fā)展帶來了一次新的浪潮。

參考文獻(xiàn)：

[1]曹建英:的安全性及其實(shí)現(xiàn)的策略[J].溫州師范學(xué)院學(xué)報(bào), 2005,(02)

[2]蘭靜:基于的在線考試系統(tǒng)[J].山西廣播電視大學(xué)學(xué)報(bào), 2005,(02)

ppt結(jié)束語范文第4篇

關(guān)鍵詞：GPS；RTK；供水管線；測(cè)量；移動(dòng)站

引言

單點(diǎn)定位的GPS技術(shù)，可應(yīng)用于地面車輛、船舶等概略定位的精度為30-100m的偽距單點(diǎn)定位。而實(shí)時(shí)差分定位的GPS技術(shù)，精度可以達(dá)到厘米級(jí)，則可應(yīng)用于土地利用調(diào)查、土地整理、地形測(cè)量、線路測(cè)量等工程項(xiàng)目，可以降低作業(yè)人員工作強(qiáng)度、提高工作效率、節(jié)約作業(yè)成本。GPS RTK技術(shù)用于供水管線測(cè)量工程，可以最大限度地減輕勘測(cè)工作量、提高勘測(cè)效率和勘測(cè)精度，一直是水利測(cè)量工作者孜孜以求的目標(biāo)。

1.GPS RTK系統(tǒng)的特點(diǎn)

1. 1 RTK測(cè)量的基本原理

RTK （Real Time Kinematic）即實(shí)時(shí)載波相位差分技術(shù)是基于載波相位觀測(cè)值的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)定位技術(shù)，它是利用多臺(tái)（2臺(tái)以上）GPS接收機(jī)同時(shí)接收衛(wèi)星信號(hào)，其中一臺(tái)安置在己知點(diǎn)上作為基準(zhǔn)站（也可以任意設(shè)置測(cè)站），另外的接收機(jī)用來測(cè)定未知點(diǎn)的坐標(biāo)即流動(dòng)站。在RTK作業(yè)模式下，基準(zhǔn)站通過數(shù)據(jù)鏈將其載波相位觀測(cè)值和測(cè)站三維坐標(biāo)信息（如基準(zhǔn)站坐標(biāo)和天線高度）一起傳送給流動(dòng)站，流動(dòng)站在完成初始化后，一方面通過數(shù)據(jù)鏈接收來自基準(zhǔn)站的數(shù)據(jù)，另外自身也采集GPS觀測(cè)數(shù)據(jù)，并在系統(tǒng)內(nèi)組成差分觀測(cè)值進(jìn)行實(shí)時(shí)一處理，再經(jīng)過坐標(biāo)轉(zhuǎn)換，即可給出實(shí)時(shí)的厘米級(jí)定位結(jié)果。RTK是以WGS-84系統(tǒng)做為基準(zhǔn)坐標(biāo)系統(tǒng)的，其全部觀測(cè)值及解算結(jié)果均屬于WGS-84系統(tǒng)。

GPS測(cè)得的高程是該點(diǎn)在WGS-84橢球上的大地高，必須采用高程擬合的方法，來求得正常高。而高程擬合的精度取決于由GPS大地高程轉(zhuǎn)換為正常高的精度，其中關(guān)鍵是高程異常的精度，也就是說，參與擬合的水準(zhǔn)點(diǎn)的個(gè)數(shù)及分布的均勻控制程度和地形起伏狀況。對(duì)于引水管線放樣來講，路線兩側(cè)布設(shè)的水準(zhǔn)點(diǎn)足以保證中樁高程的擬合精度。

1.2 RTK測(cè)量的特點(diǎn)

（1）RTK作業(yè)自動(dòng)化、集成化程度高，測(cè)繪功能強(qiáng)大，RTK可勝任各種測(cè)繪內(nèi)、外業(yè)流動(dòng)站無需人工干預(yù)便可自動(dòng)實(shí)現(xiàn)多種測(cè)繪功能，使輔助測(cè)量工作減少，減少人為誤差，保證了作業(yè)精度

（2）降低了作業(yè)條件要求RTK技術(shù)只要求滿足“電磁波通視”和對(duì)天基本通視，因此，和傳統(tǒng)測(cè)量相比，RTK技術(shù)受通視條件、能見度、氣候、季節(jié)等因素的影響和限制較小，只要滿足RTK的基本工作條件，它就能進(jìn)行快速的高精度定位作業(yè)。

（3）定位精度高，數(shù)據(jù)安全可靠，沒有誤差積累，不同于個(gè)站儀在多次搬站后，都存在誤差累積的狀況，RTK沒有誤差積累只要滿足RTK的基本工作條件，在定的作業(yè)半徑范圍內(nèi)，RTK的平面精度和高程精度都能達(dá)到厘米級(jí)。

（4）操作簡(jiǎn)便、數(shù)據(jù)處理能力強(qiáng)，移動(dòng)站可以邊走邊獲得測(cè)量結(jié)果坐標(biāo)數(shù)據(jù)輸入、存儲(chǔ)、處理、轉(zhuǎn)換和輸出能力強(qiáng)，能方便快捷地與計(jì)算機(jī)、其它測(cè)量?jī)x器進(jìn)行通信。

2. RTK測(cè)量技術(shù)的工作條件

（1）基準(zhǔn)站和流動(dòng)站同時(shí)接收到5顆以上GPS衛(wèi)星信號(hào)。

（2）基準(zhǔn)站和流動(dòng)站同時(shí)接收到衛(wèi)星信號(hào)，流動(dòng)站實(shí)時(shí)接收到基準(zhǔn)站發(fā)出的差分信號(hào)。

（3）基準(zhǔn)站和流動(dòng)站要連續(xù)接收GPS衛(wèi)星信號(hào)和基準(zhǔn)站發(fā)出的差分信號(hào)即流動(dòng)站遷站過程中不能關(guān)機(jī)，不能失鎖，否則RTK須重新初始化。

3. RTK外業(yè)實(shí)施過程

GPS定位是直接得到點(diǎn)位在WGS-84中的坐標(biāo)和高程，故進(jìn)行GPS-RTK測(cè)量時(shí)需要進(jìn)行坐標(biāo)轉(zhuǎn)換或點(diǎn)位校正，從而求得地方坐標(biāo)與WGS -84坐標(biāo)間的轉(zhuǎn)換參數(shù)。

RTK具有靜態(tài)、穩(wěn)定等功能，事先必須對(duì)其主機(jī)作相應(yīng)的基準(zhǔn)站、移動(dòng)站、靜態(tài)或GPRS設(shè)置。作RTK使用，若用常規(guī)UHF電臺(tái)，則基站設(shè)為外掛UHF電臺(tái)基站方式，移動(dòng)站設(shè)為內(nèi)置UHF電臺(tái)移動(dòng)站方式；若用GPRS通訊，則基站設(shè)為內(nèi)置GPRS基站方式，移動(dòng)站設(shè)為內(nèi)置GPRS移動(dòng)站方式。

移動(dòng)站在兩個(gè)己知控制點(diǎn)上采集數(shù)據(jù)（解類型必須為固定解），通過添加己知點(diǎn)坐標(biāo)或在控制點(diǎn)坐標(biāo)庫(kù)中查找，求轉(zhuǎn)換參數(shù)并進(jìn)行高程擬合。待參數(shù)結(jié)算完畢后其比例在0. 97-1.03之間，即可放樣其他碎部點(diǎn)。

4. RTK技術(shù)和全站儀在城市供水管線測(cè)量中的應(yīng)用

4.1項(xiàng)目區(qū)概況

山東某農(nóng)村飲水土程管線，全長(zhǎng)60 km，管線沿山勢(shì)布設(shè)，溝谷多為U形，起伏較大，但視野開闊，適宜GPS RTK進(jìn)行施工放樣。在線路勘測(cè)時(shí)沿管線每隔3 km左右布設(shè)1個(gè)GPS控制點(diǎn)。

4.2 RTK技術(shù)在供水管線施工放樣中的應(yīng)用

本項(xiàng)目GPS RTK的使用主要是放樣供水管線中線以及縱斷面和橫斷面測(cè)量。使用中海達(dá)V9型雙頻接收機(jī)（1臺(tái)基準(zhǔn)站+2臺(tái)移動(dòng)站）作業(yè)，流動(dòng)站組成為接收天線、無線電臺(tái)、電池、碳纖桿、7400手簿及手簿拖架；基準(zhǔn)站包含GPS接收天線、終端、傳感器、大功率的電臺(tái)、電池、5 m高的無線電發(fā)射天線。

首先選取間距大于500 m的3個(gè)導(dǎo)線點(diǎn)，在無參數(shù)的狀態(tài)下安置好儀器，架好基準(zhǔn)站，持流動(dòng)站測(cè)量另外2個(gè)導(dǎo)線點(diǎn)，得到的數(shù)據(jù)為當(dāng)?shù)刈鴺?biāo)（BLH）。將當(dāng)?shù)刈鴺?biāo)對(duì)應(yīng)工程坐標(biāo)輸入手簿，經(jīng)計(jì)算求得轉(zhuǎn)換參數(shù)（四參數(shù)），轉(zhuǎn)化為WGS-84坐標(biāo)系。

放樣前需要輸入的數(shù)據(jù)有路線直曲線要素的起訖樁號(hào)、半徑、緩和曲線長(zhǎng)度等，計(jì)算生成放樣數(shù)據(jù)，自動(dòng)保存在RTK文件的目錄下。手簿程序有檢核功能，若輸入數(shù)據(jù)錯(cuò)誤，手簿桌面上會(huì)有文字提示。放樣時(shí)，需要從放樣點(diǎn)庫(kù)中提取所需段落，選中放樣點(diǎn)。確定一臺(tái)流動(dòng)站放樣中樁，選擇一個(gè)樁號(hào)后，GPS RTK馬上會(huì)提示目前位置距樁號(hào)位置距離及方向。實(shí)箭頭方向與虛箭頭方向重合時(shí)，表明行走的路線正確；如當(dāng)前位置距離樁號(hào)位置小于先設(shè)置好的精度響應(yīng)范圍時(shí)（如50 cm），儀器會(huì)發(fā)出“嘀滴”聲。從GPS PTK看出當(dāng)前位置與樁號(hào)位置的前后、左右或東西、南北的距離為零時(shí)，表明放樣成功，即可釘樁。然后按下一個(gè)點(diǎn)，實(shí)行下一個(gè)點(diǎn)的放樣。

以此類推。所有測(cè)量數(shù)據(jù)（樁號(hào)、高程、樁位、坐標(biāo)）也可以用CAD或文本文件的形式導(dǎo)出。用另一臺(tái)流動(dòng)站按照數(shù)據(jù)采集模式采集整樁、加樁和橫斷面地形變化點(diǎn)的三維坐標(biāo)。

4. 3內(nèi)業(yè)成圖

將RTK與計(jì)算機(jī)進(jìn)行連接，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入到計(jì)算機(jī)，并轉(zhuǎn)換為CASS繪圖格式數(shù)據(jù)。在CASS中繪制供水管線的橫斷面圖和縱斷面圖。

5. 結(jié)語

RTK技術(shù)實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)平而和高程測(cè)量達(dá)到厘米級(jí)的精度，而所測(cè)數(shù)據(jù)山控制器直接傳入到了計(jì)算機(jī)內(nèi)，其間沒有造成精度損失，與常規(guī)方法比較，減少了人為ICI素的十?dāng)_RTK技術(shù)還減輕了外業(yè)作業(yè)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度.減少了作業(yè)人員的數(shù)量，同時(shí)卻人人提高了作業(yè)速度隨著對(duì)RTK技術(shù)的研究和應(yīng)用，改變了線路測(cè)量的傳統(tǒng)作業(yè)模式，帶來了次技術(shù)革命RTK測(cè)量技術(shù)在各種供水管線測(cè)量中取得了明撤的經(jīng)濟(jì)效益疇

參考文獻(xiàn)：

[1] 朱建榮； 黨仁民.GPSRTK在供水管線測(cè)量中的應(yīng)用研究.礦山測(cè)量.2013（04）

ppt結(jié)束語范文第5篇

關(guān) 鍵 詞：運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)；力竭運(yùn)動(dòng)；核因子-κB；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶；軟骨；創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎；大鼠

中圖分類號(hào)：G804.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-7116（2014）01-0138-07

Effects of high intensity exhaustive exercise and PDTC intervention on rat’s

articular cartilage injury as well as NF-κB signal pathway exploration

HUANG Wei

（School of Physical Education，Zhengzhou University，Zhengzhou 450044，China）

Abstract： In order to observe the effects of one-time high intensity exhaustive exercise and pyrrolidine dithiocarbamate （PDTC， an NF-κB inhibitor） supplementation on rat’s knee articular cartilage inducible nitric oxide synthase （iNOS）， nitric oxide （NO） content， matrix metalloproteinase-13 proenzyme （pro-MMP-13） and active-MMP-13， so as to probe into a possible mechanism of over-exercise inducing iNOS expression increase and causing cartilage injury， the author divided 40 SD rats randomly into 4 groups， namely， a control group （group C）， a PDTC fed group （group P）， an exercise group （group E）， and an exercise + PDTC fed group （group EP）， injected 1 mL of normal saline into the abdominal cavity of the rats in group C， injected 200 mg/kg of PDTC into the abdominal cavity of the rats in group P， injected 1ml of normal saline into the abdominal cavity of the rats in group E and then let them do an one-time high intensity exhaustive exercise， injected PDTC into the abdominal cavity of the rats in group EP and then let them do an one-time exhaustive exercise， 2 h after the experiment， extracted synovia， measured NO content by using the nitrate reductase method， observed morphological cartilage changes by means of HE dyeing and determined Mankin’s scores， measured iNOS and MMP-13 mRNA levels by means of real-time fluorescent quantification PCR， measured iNOS， pro-MMP-13 and active-MMP-13 protein expression levels by using the western blot method， measured the activity of combination of NF-κB and DNA by means of electrophoretic mobility shift assay （EMSA）， and revealed the following findings： comparing the rats in groups E and EP with the rats in group C， Mankin’s scores， synovial NO content， iNOS and MMP-13 mRNA levels， iNOS and active-MMP-13 protein levels， and the activity of combination of NF–κB and DNA increased very significantly （P

Key words： sports medicine；exhaustive exercise；NF-κB；iNOS；cartilage；traumatic osteoarthritis；rat

在競(jìng)技體育中，特別是足、籃、排球等頻繁跑跳的項(xiàng)目，膝關(guān)節(jié)最易發(fā)生運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷。運(yùn)動(dòng)員在大強(qiáng)度訓(xùn)練或比賽后常出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、酸軟等臨床癥狀，一般認(rèn)為長(zhǎng)期大強(qiáng)度訓(xùn)練將增加骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）的危險(xiǎn)，稱為創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎（Traumatic Osteoarthritis，TOA）[1]，其主要病理變化是關(guān)節(jié)軟骨退化損傷和軟骨下骨反應(yīng)性增生。TOA不僅影響運(yùn)動(dòng)員的競(jìng)技狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)成績(jī)，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵直畸形甚至致殘[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，OA患者關(guān)節(jié)滑液中一氧化氮（NO）含量明顯升高，而應(yīng)用誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）抑制劑可對(duì)軟骨產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng)[2]，提示iNOS/NO系統(tǒng)在OA中起關(guān)鍵作用[3]。研究證實(shí)，iNOS催化L-精氨酸產(chǎn)生NO[4]，NO可誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡[5]以及通過上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）表達(dá)[6-8]造成軟骨基質(zhì)降解。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是炎癥和免疫反應(yīng)調(diào)控過程中的核心轉(zhuǎn)錄因子[9]，同時(shí)生物信息學(xué)研究表明，iNOS基因啟動(dòng)子序列包含NF-κB結(jié)合位點(diǎn)[10]，提示iNOS是NF-κB下游的靶基因。TOA的發(fā)生是在關(guān)節(jié)創(chuàng)傷未完全恢復(fù)的情況下多次劇烈運(yùn)動(dòng)積累的結(jié)果[1]，但是一次大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)是否通過激活NF-κB上調(diào)iNOS并參與了TOA的形成，目前尚無報(bào)道。本研究擬觀察一次急性大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)和補(bǔ)充NF-κB抑制劑——吡咯烷二巰基氨甲酸（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）對(duì)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨NF-κB、iNOS、NO和MMP-13的影響，探討過度運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)軟骨損傷的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3月齡SPF級(jí)雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量240～300 g，購(gòu)自中國(guó)人民軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)籠選擇塑料制品，并配有不銹鋼罩、塑料吸水瓶和金屬吸水管，環(huán)境溫度為15～16 ℃，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)固體混合飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食水。

1.2 分組及實(shí)驗(yàn)干預(yù)

所有大鼠安靜飼養(yǎng)3 d，以適應(yīng)新環(huán)境；然后進(jìn)行3 d適應(yīng)性跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（10 m/min，15 min/d）；休息1 d后開始實(shí)驗(yàn)。

將動(dòng)物隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（C組）、PDTC給藥組（P組）、大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)組（E組）、大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)+PDTC給藥組（EP組）。C組給予1 mL生理食鹽水腹腔注射后安靜休息；P組給予200 mg/kg PDTC（美國(guó)Sigma公司）腹腔注射后處于安靜狀態(tài)；E組腹腔注射1 mL生理食鹽水，1 h后在低電流脈沖動(dòng)物刺激籠中進(jìn)行一次大強(qiáng)度跳躍運(yùn)動(dòng)（參照文獻(xiàn)報(bào)道的“電刺激跳躍”法[11-13]并稍作改進(jìn)），刺激時(shí)間為0.2～0.5 s，每15 s刺激1次，直至力竭（動(dòng)物不能繼續(xù)完成跳躍）；EP組腹腔注射PDTC溶液（200 mg/kg），1 h后進(jìn)行1次力竭運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)方式同E組。

1.3 組織取材和HE染色

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后2 h，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，進(jìn)行以下操作：（1）關(guān)節(jié)液的提取。右膝關(guān)節(jié)剪毛、消毒，于髕韌帶外側(cè)用1 mL注射器施行膝關(guān)節(jié)穿刺證實(shí)刺入關(guān)節(jié)腔后，注入生理鹽水0.5 mL，反復(fù)回抽3次后，將液體抽出并注入EP管內(nèi)，3 000 r/min離心10 min，取上清液，-20 ℃保存待測(cè)NO含量。（2）于右側(cè)膝關(guān)節(jié)切開關(guān)節(jié)囊，精心剝離膝關(guān)節(jié)周圍的肌肉和韌帶等組織，用咬骨鉗將股骨、脛骨內(nèi)外髁軟骨取下，注意不要傷及軟骨表面。生理鹽水沖洗后，將組織分為2份，一份用液氮預(yù)冷后轉(zhuǎn)入-80 ℃低溫冰箱凍存待測(cè)基因表達(dá)；另一份用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%多聚甲醛固定48 h后常規(guī)脫鈣液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%EDTA）脫鈣，梯度酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋。沿標(biāo)本縱軸切片，4 μm連續(xù)切片。HE染色，光鏡觀察軟骨形態(tài)學(xué)變化（軟骨表面是否規(guī)則、有無裂隙，細(xì)胞數(shù)量、分布、排列是否規(guī)則，潮線是否完整）并參考Mankin’s評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[14]對(duì)HE染色標(biāo)本進(jìn)行評(píng)分（分別由3名病理學(xué)專家單獨(dú)評(píng)分，取均值）。

1.4 關(guān)節(jié)液NO濃度測(cè)定

取出裝有關(guān)節(jié)液的EP管，采用硝酸還原酶法測(cè)定NO濃度，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作，測(cè)試儀器：722型分光光度計(jì)（上海市第三分析儀器廠）。單位：μmmol/L。

1.5 iNOS和MMP-13 mRNA表達(dá)水平測(cè)定

iNOS和MMP-13 mRNA表達(dá)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定。方法為：稱取100 mg軟骨組織勻漿后用RNA提取試劑盒（美國(guó)Promega公司；Trizol法）抽提細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA（逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司）。利用Primer 5.0設(shè)計(jì)上下游引物，見表1。將cDNA樣品配置于Real-time PCR 20 μL反應(yīng)體系中，混合離心后置于7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性4 min，40個(gè)PCR循環(huán)（94 ℃，20 s；58 ℃，30 s；72 ℃，10 s），最后72 ℃延伸5 min。依據(jù)循環(huán)閾值（CT值）計(jì)算各基因的相對(duì)表達(dá)量（C組的倍數(shù)）。β-actin為內(nèi)參基因。

1.6 iNOS、MMP-13蛋白表達(dá)水平測(cè)定

iNOS、MMP-13酶原（pro-MMP-13）和活性MMP-13（active-MMP-13）蛋白表達(dá)用蛋白質(zhì)印跡（western blot）法測(cè)定。方法為：稱取100 mg軟骨組織勻漿后用細(xì)胞質(zhì)裂解液裂解細(xì)胞，BCA法測(cè)定蛋白濃度，取50 μg蛋白上樣到質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠，電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF膜，質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%BSA室溫下封閉2 h，加一抗（iNOS稀釋1︰1 000，pro-MMP-13、active-MMP-13和β-actin均為1︰2 000）（美國(guó)Santa cruz公司）4 ℃過夜，PBS洗膜3次。二抗用HRP標(biāo)記的IgG（1︰2 000稀釋）（美國(guó)Santa cruz公司），37 ℃孵育1 h，PBS洗膜3次，轉(zhuǎn)膜、顯色。用Image Quant TL軟件對(duì)目的蛋白進(jìn)行光密度分析，計(jì)算各蛋白的相對(duì)表達(dá)量（C組的倍數(shù)）。β-actin為內(nèi)參蛋白。（稀釋均為體積比）

1.7 NF-κB與DNA結(jié)合活性測(cè)定

用凝膠電泳遷移率分析（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）測(cè)定NF-κB與DNA結(jié)合活性。方法為：首先按照細(xì)胞核提取試劑盒（美國(guó)Pierce公司）提取白，然后根據(jù)EMSA試劑盒（美國(guó)Pierce公司）說明進(jìn)行。20 μg白和生物素標(biāo)記的含有公認(rèn)的NF-κB結(jié)合位點(diǎn)的DNA探針（正義鏈：5’-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3’，反義鏈3’-TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG-5’）（上海博尚生物技術(shù)有限公司合成）混合，總體積20 μL，室溫靜置20 min。采用6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（100 V，1 h），轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，紫外燈下交聯(lián)15 min，洗膜，滴加化學(xué)發(fā)光底物，在暗室中把X光片曝光并洗像觀察結(jié)果，以積分灰度值表示NF-κB與DNA的結(jié)合活性（C組的倍數(shù)）。樣本中同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照（反應(yīng)體系中未加白，只有標(biāo)記的DNA探針）作為探針位置的標(biāo)志和冷探針競(jìng)爭(zhēng)對(duì)照（在C組中加入過量的未標(biāo)記的NF-κB競(jìng)爭(zhēng)探針）以驗(yàn)證探針與NF-κB結(jié)合的特異性。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。組間比較使用單因素方差分析（one-way ANOVA），Bonferroni進(jìn)行多重比較。P

2 結(jié)果及分析

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量

實(shí)驗(yàn)過程中，E組出現(xiàn)1只動(dòng)物拒跑，EP組出現(xiàn)1只拒跑、1只死亡。因此，最終納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的樣本量分別為：C組（n=10只），P組（n=10只），E組（n=9只），EP組（n=8只）。

2.2 HE染色和Mankin’s評(píng)分

C組為正常軟骨組織，表面平整光滑無破損，軟骨細(xì)胞核呈藍(lán)色、排列整齊，基質(zhì)呈淡粉色，著色均勻，潮線清晰Mankin’s評(píng)分（0.85±0.04）；P組形態(tài)學(xué)表現(xiàn)同C組，Mankin’s評(píng)分（0.76±0.06）與C組無顯著性差異；E組可見軟骨表面粗糙，細(xì)胞出現(xiàn)輕度變形或排列紊亂，孔隙不均勻增大，Mankin’s評(píng)分（3.12±0.14）高于C組和P組（P

2.3 各組關(guān)節(jié)液NO濃度的變化

P組關(guān)節(jié)液NO濃度與C組無顯著性差異（P>0.05）；E組和EP組關(guān)節(jié)液NO濃度較C組分別升高了176.6%（P

1）與C組比較，P

圖1 各組關(guān)節(jié)液NO濃度的比較

2.4 各組iNOS和MMP-13 mRNA表達(dá)的變化

各組iNOS和MMP-13 mRNA表達(dá)的變化規(guī)律基本一致，即P組與C組無顯著性差異（P>0.05）；E組（iNOS：+215%，P

1）與C組比較，P

圖2 各組iNOS和MMP-13 mRNA表達(dá)的比較

2.5 各組iNOS、pro-MMP-13和active-MMP-13蛋白表達(dá)的變化

pro-MMP-13蛋白水平在各組均無顯著性差異。iNOS和active-MMP-13的變化趨勢(shì)一致，即P組與C組無顯著性差異（P>0.05）；E組（iNOS：+242%，P

1）與C組比較，P

圖3 各組iNOS、pro-MMP-13和active-MMP-13蛋白表達(dá)的比較

2.6 各組NF-κB與DNA結(jié)合活性的變化

EMSA圖像顯示，有濃黑的生物素標(biāo)記探針自由帶（lane 1～6）及深淺不一的蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合條帶（lane 2、4、5、6），游離的生物素標(biāo)記DNA探針在電泳圖的最下端。樣本中無白的陰性對(duì)照（lane 1）僅有自由帶，無結(jié)合帶。C組（lane 2）在電泳圖中部出現(xiàn)一條蛋白與DNA探針結(jié)合后的阻滯帶。冷探針競(jìng)爭(zhēng)對(duì)照（lane 3）為C組加過量非標(biāo)記探針做競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)，在原來出現(xiàn)蛋白-DNA結(jié)合帶的位置無條帶出現(xiàn)，說明此帶是NF-κB與DNA結(jié)合的特異帶。P組（lane 4）與C組光密度值無顯著性差異（P>0.05），E組（lane 5）和EP組（lane 6）顯著高于C組（E組：+240%，P

1）與C組比較，P

圖4 各組NF-κB與DNA結(jié)合活性的比較

3 討論

3.1 運(yùn)動(dòng)性關(guān)節(jié)軟骨損傷模型的建立

關(guān)節(jié)負(fù)重和運(yùn)動(dòng)對(duì)于維持正常關(guān)節(jié)軟骨的結(jié)構(gòu)和功能是必不可少的，但當(dāng)負(fù)重強(qiáng)度和頻率超出或低于允許的范圍時(shí)，關(guān)節(jié)軟骨的合成與降解失去平衡，導(dǎo)致軟骨組成與超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化[1]。關(guān)于運(yùn)動(dòng)與OA的關(guān)系，已有的證據(jù)證實(shí)，適度運(yùn)動(dòng)特別是中等強(qiáng)度耐力訓(xùn)練能增強(qiáng)關(guān)節(jié)功能，但不會(huì)導(dǎo)致OA發(fā)生[1，15]；而大強(qiáng)度超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)與OA的關(guān)系尚有爭(zhēng)論，多數(shù)研究認(rèn)為，關(guān)節(jié)長(zhǎng)期受到高強(qiáng)度沖擊力、剪切應(yīng)力和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷可增加患OA的風(fēng)險(xiǎn)（如足、籃、排球運(yùn)動(dòng)），但這種危險(xiǎn)性的增加主要是由關(guān)節(jié)損傷引起的，即TOA[1，15]。本研究HE染色顯示，E組出現(xiàn)軟骨損傷，Mankin’s評(píng)分較C組升高，說明本研究成功建立了一次大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨損傷模型。PDTC給藥后，組織學(xué)表現(xiàn)較E組稍有減輕，Mankin’s評(píng)分低于E組，但仍高于C組，提示PDTC未完全逆轉(zhuǎn)力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的軟骨損傷。研究表明，機(jī)械因素對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的損傷不僅取決于負(fù)荷強(qiáng)度，而且取決于作用時(shí)間（或頻率）。因此，我們認(rèn)為，一次大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)可造成關(guān)節(jié)軟骨損傷，若機(jī)體得不到充分恢復(fù)，多次超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)的積累效應(yīng)最終形成TOA。

3.2 iNOS/NO/MMPs信號(hào)途徑在TOA發(fā)病機(jī)制中的作用

OA最重要的病理改變是軟骨組織（包括軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)）的破壞，而iNOS/NO/MMPs在此過程中起關(guān)鍵作用。NO由一氧化氮合酶（NOS）催化L-精氨酸產(chǎn)生。NOS家族包括3個(gè)成員：神經(jīng)型NOS（nNOS），誘導(dǎo)型NOS（iNOS）和內(nèi)皮型NOS（eNOS），三者雖然在分子結(jié)構(gòu)上具有高度同源性，但在基因定位、組織分布、離子依賴活性以及病理生理功能上存在顯著差異，軟骨細(xì)胞則以表達(dá)iNOS為主[3]。關(guān)于NO在對(duì)軟骨的作用，研究發(fā)現(xiàn)，低濃度的NO作為信號(hào)分子具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗凋亡作用[16]，其機(jī)制與低濃度NO負(fù)反饋調(diào)節(jié)iNOS基因表達(dá)有關(guān)[17]，而高濃度NO可轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂苫ㄟ^氧亞硝酸鹽）并造成炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[16]。OA患者iNOS過表達(dá)、內(nèi)源性NO產(chǎn)生增加[18]，提示過量產(chǎn)生的NO是OA發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，E組iNOS mRNA和蛋白水平以及NO含量均高于C組。由于iNOS常與炎癥因子共表達(dá)，故iNOS表達(dá)上調(diào)常被認(rèn)為是組織分解代謝的標(biāo)志，結(jié)合前人的研究[19]，我們推測(cè)，力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨損傷時(shí)產(chǎn)生促炎癥因子（IL-1β、TNF-α等）和氧自由基（ROS），誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞表達(dá)iNOS并大量合成NO。NO可通過cGMP-PKG介導(dǎo)的信號(hào)途徑[20]以及直接對(duì)靶蛋白的硝基化作用[6]激活MMP-13（最重要的膠原酶），從而導(dǎo)致軟骨基質(zhì)降解。本研究還發(fā)現(xiàn)，E組pro-MMP-13蛋白水平與C組無顯著性差異，而active-MMP-13蛋白含量則高于C組，這是因?yàn)?，各種MMPs由軟骨細(xì)胞以酶原（pro-MMPs）形式（即無活性的蛋白前體）分泌到細(xì)胞外，通過前肽裂解而激活（active-MMPs，即具有生物學(xué)活性的MMPs）[21]，因此，運(yùn)動(dòng)對(duì)MMP-13的激活與pro-MMP-13總體水平變化無關(guān)，active-MMP-13而非pro-MMP-13的變化才具有病理生理意義。同時(shí)提示，在本研究的動(dòng)物模型中，運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO并未上調(diào)pro-MMP-13蛋白表達(dá)量，而是在翻譯水平上（磷酸化或硝基化）直接激活MMP-13（即active-MMP-13）。此外，過量的NO還可在ROS作用下形成過氧亞硝酸鹽，誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡，參與對(duì)軟骨組織的破壞[22]?？傊?，力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的軟骨損傷激活了iNOS/NO/MMPs信號(hào)通路，這是造成軟骨基質(zhì)降解進(jìn)而發(fā)展為TOA的重要分子機(jī)制。

3.3 一次力竭運(yùn)動(dòng)通過NF-κB信號(hào)途徑介導(dǎo)iNOS表達(dá)上調(diào)

NF-κB是由p50和p65亞基構(gòu)成的異源二聚體，是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要轉(zhuǎn)錄因子。生理?xiàng)l件下NF-κB與其抑制蛋白IκB在胞漿中結(jié)合，從而抑制NF-κB 的核轉(zhuǎn)位，使其處于失活狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，IκB被上游的IκB激酶（IKK）磷酸化而降解，IκB與NF-κB分離，NF-κB激活并轉(zhuǎn)移至胞核內(nèi)促進(jìn)眾多基因轉(zhuǎn)錄，參與調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育等過程。

NF-κB的適度表達(dá)在維持生理穩(wěn)態(tài)中是必要的，當(dāng)NF-κB出現(xiàn)調(diào)節(jié)異常或持續(xù)激活時(shí)，則導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)慢性炎癥性以及相關(guān)疾病，如OA。既往運(yùn)動(dòng)與NF-κB的研究主要集中在骨骼肌組織[23]，研究顯示，急性亞極量運(yùn)動(dòng)可暫時(shí)性地激活NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，運(yùn)動(dòng)后數(shù)小時(shí)恢復(fù)至安靜水平[24]；長(zhǎng)期規(guī)律的有氧運(yùn)動(dòng)能夠降低NF-κB的活性，降低炎癥反應(yīng)，是機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)的適應(yīng)性反應(yīng)[25]；急性大強(qiáng)度離心訓(xùn)練可導(dǎo)致肌細(xì)胞NF-κB信號(hào)激活，下游炎癥因子基因表達(dá)增多，是肌肉疲勞、運(yùn)動(dòng)性肌肉損傷和延遲性肌肉酸痛的重要原因[26]；長(zhǎng)期劇烈運(yùn)動(dòng)（加之間歇時(shí)間不足）可持續(xù)提高NF-κB活性，這是急性大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的積累效應(yīng)，從而造成肌肉炎癥性損傷和蛋白質(zhì)降解[27]。上述研究提示，NF-κB的間歇式激活對(duì)于肌肉是有益的，促進(jìn)機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)的適應(yīng)，但NF-κB的慢性持續(xù)激活對(duì)機(jī)體是有害的，若恢復(fù)時(shí)間不足，肌肉無法產(chǎn)生適應(yīng)性變化甚至出現(xiàn)應(yīng)激損傷。運(yùn)動(dòng)與軟骨組織的研究較為少見，且主要是離體實(shí)驗(yàn)研究。利用血流切應(yīng)力模擬運(yùn)動(dòng)負(fù)荷對(duì)體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞實(shí)施干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，低切應(yīng)力（低強(qiáng)度）可抑制軟骨降解[28]，而高切應(yīng)力（高強(qiáng)度）則使MMPs表達(dá)上調(diào)，軟骨細(xì)胞出現(xiàn)凋亡、基質(zhì)降解[29]，同時(shí)伴隨NF-κB活性升高和iNOS表達(dá)上調(diào)[30]，說明運(yùn)動(dòng)對(duì)軟骨細(xì)胞的作用具有運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性，NF-κB和iNOS可能起關(guān)鍵作用。本研究于在體水平對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)軟骨損傷的機(jī)制進(jìn)行了初探并發(fā)現(xiàn)，與C組比較，E組NF-κB DNA結(jié)合活性明顯升高，iNOS mRNA和蛋白水平分別升高了215%和242%；使用NF-κB抑制劑——PDTC后，與E組比較，EP組NF-κB DNA結(jié)合活性降低、iNOS表達(dá)量減少，說明運(yùn)動(dòng)對(duì)iNOS信號(hào)途徑的激活作用可被PDTC逆轉(zhuǎn)，提示力竭運(yùn)動(dòng)上調(diào)iNOS表達(dá)至少部分是通過活化NF-κB實(shí)現(xiàn)的。PDTC抑制NF-κB活性的具體機(jī)制尚不完全明確，可能與抑制p65亞基、抑制IκB降解以及減少NF-κB核移位有關(guān)。此外，EP組NO含量和active-MMP-13表達(dá)量降低，說明PDTC可能具有潛在的抗TOA作用。

關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)高濃度NO是造成軟骨細(xì)胞凋亡和軟骨基質(zhì)降解的重要機(jī)制[3]，而力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)軟骨細(xì)胞iNOS表達(dá)上調(diào)是NO大量產(chǎn)生的主要原因，本研究則證實(shí)，NF-κB對(duì)于iNOS表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)NO過量產(chǎn)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。最近的研究發(fā)現(xiàn)，過量的NO反過來又可激活p38-MAPK，p38-MAPK通過磷酸化IKK繼續(xù)活化NF-κB[31-32]，從而形成對(duì)NF-κB的正反饋調(diào)節(jié)。因此，NF-κB信號(hào)途徑參與了運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)軟骨損傷的病理過程。

當(dāng)然，運(yùn)動(dòng)對(duì)iNOS的調(diào)控除了NF-κB信號(hào)途徑外，還可能存在其他不依賴于NF-κB的信號(hào)通路，尚待深入研究。本研究一方面提示，運(yùn)動(dòng)員在訓(xùn)練中要適時(shí)監(jiān)控訓(xùn)練負(fù)荷，同時(shí)采取必要措施減少關(guān)節(jié)損傷，降低關(guān)節(jié)退行性變（TOA）的危險(xiǎn)性；另一方面，在大強(qiáng)度超負(fù)荷訓(xùn)練后，可采取各種手段抑制NF-κB/iNOS/NO/MMPs信號(hào)通路的過度激活，促進(jìn)出現(xiàn)微損傷的關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)，iNOS成為OA治療的靶點(diǎn)已被臨床實(shí)驗(yàn)所證實(shí)，而NF-κB抑制劑——PDTC可能也具有潛在的抗OA作用，但這一藥理作用尚未在人體試驗(yàn)得到證實(shí)。因此，需要進(jìn)一步的臨床實(shí)驗(yàn)研究。今后的研究應(yīng)探索大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后軟骨組織NF-κB的變化規(guī)律以及恢復(fù)手段對(duì)NF-κB的影響，為制定適宜的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、確定大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后的間歇時(shí)間、加快機(jī)體恢復(fù)以及預(yù)防關(guān)節(jié)損傷和TOA發(fā)生提供理論依據(jù)。

力竭運(yùn)動(dòng)造成的關(guān)節(jié)損傷是TOA形成的重要原因。一次大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)通過NF-κB信號(hào)途徑介導(dǎo)iNOS表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)NO大量釋放和MMP-13激活，從而參與了軟骨損傷的過程。

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