前言:想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎?我們特意為您整理了5篇動物行為學的意義范文,相信會為您的寫作帶來幫助,發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。
關鍵詞:實驗動物學;生物醫(yī)學;動物模型
1實驗動物學在國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀
由于生物動物學得天獨厚的優(yōu)勢,很多多家都早早進行了這方面的研究。英國、美國、日本、法國分別在47、50、53、56年成立生物學研究方向中心。聯(lián)合國教科文組織與生物科學協(xié)會以及醫(yī)療科學國際組織聯(lián)合在1956年成立了國際實驗動物委員會,現(xiàn)今已經(jīng)有45個國家參與。在這些國家努力下,實驗動物學的發(fā)展十分迅速,甚至早早就設立了獨立的科學研究部門。研究實驗動物學的部門也越發(fā)建立起法律、法規(guī)逐步完善教育、管理、科研。這樣的有組織的發(fā)展,促進了有關生物學的各方面發(fā)展。美、日等國家更是專門設立了大規(guī)模獨立的研究,用于發(fā)展生物實驗。時間來到近些年,很多國家為了加強實驗動物學的發(fā)展,都設立的專門的大學來培養(yǎng)人才。醫(yī)學院、獸醫(yī)院和很多綜合性的大學也孕育而生,為了培養(yǎng)專業(yè)的人才,學校都設有高水平、大規(guī)模、先進性的設備確保實驗中心的研究工作。動物保護協(xié)會在動物實驗中也提出:Replacement(替代)、Reduc-tion(減少)、Refinement(優(yōu)化)這三個宗旨。提出實驗中盡可能少地使用動物,如果能另尋它法最好。善待動,物對實驗動物飼養(yǎng)和管理盡量以最佳條件,使動物實驗的設計、操作達到最佳的方案。我國實驗動物學的發(fā)展近況:我國實驗動物研究學起步較晚,1918年元北平中央防疫處剛開始用小白鼠進行防疫試驗。20世紀30年代,幾個大城市少數(shù)的科研單位開始進行小規(guī)模的實驗飼養(yǎng)。在解放后實驗動物工作才算正式發(fā)展起來,20世紀50年代為預防各大傳染病我國在各地建立起研究單位,并開始大規(guī)模的飼養(yǎng)繁殖。1982年我國科委主持召開全國首次實驗動物科技的會議,正式將實驗動物科技加入規(guī)劃,先后建立起4個國家級實驗動物中心。1987年成立了中國實驗動物學會。1988國家科委經(jīng)國務院批準,頒布了《實驗動物管理條例》。1994年國家技術監(jiān)督局了實驗動物的國家標準,從此我國的生物實驗動物開始走上了科學、標準的軌道。目前,我國科學工作者在實驗動物學方面的研究做了大量工作,當然也取得了很大成就。實驗動物的管理條例也愈發(fā)成熟,各級省、市、自治區(qū)都成立了實驗動物管理機構。并各大醫(yī)學院校設立了實驗動物學課程,一些院校還設立了實驗動物專業(yè),并且招收碩士、博士研究生。中國政府和日本合作開設中國實驗動物培訓中心,培訓出了大批良好的人才。我國培訓這些人才,都為實驗動物科學的發(fā)展起到了至關重要的作用。據(jù)1995年不完全統(tǒng)計,全國生產(chǎn)大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、猴、地鼠、豬、SPF雞等實驗動物約900萬只。在數(shù)量上大部分地區(qū)基本可以滿足科技工作的需要,實驗動物的生產(chǎn)已開始向企業(yè)化、商品化、社會化方向發(fā)展。
2動物模型的優(yōu)越性
2.1避免在人身上進行實驗帶來的風險
臨床試驗是最有效果知道試驗結(jié)果的醫(yī)學方式,但是臨床上外傷、中毒等試驗研究是十分有難度的。還有急性和慢性呼吸系統(tǒng)疾病等不可能在人身上反復試驗的。因此動物可以作為人類的試驗者,在工作人員反復研究下可以反復觀察試驗體的情況進行研究??朔祟愒谘芯恐杏龅降膫惱砗蜕鐣拗茊栴},試驗中可能為了試驗需要損傷動物器官或處死動物。
2.2可以嚴格控制實驗條件
臨床上很多疾病是復雜的,就來一個換有腎臟疾病的病人來說,他也同時患有心臟病或肺臟疾病。即使患有同樣疾病的兩個人也會因自身的特點年齡、性別、體重、健康狀態(tài)等等原因疾病的發(fā)展而產(chǎn)生千差地別的影響。而動物就能克制這些因素的發(fā)生,各方面的因素甚至濕度、溫度、私聊方面都能嚴格控制。無論是在營養(yǎng)學、衛(wèi)生學、腫瘤學、環(huán)境等方面,同一時期內(nèi)很難在人身上取得一定數(shù)量的定性疾病材料。動物模型不僅僅在數(shù)量上可以得到滿足,而且還可以通過投服一定劑量的藥物或移植。
2.3有利于全面認識疾病的本質(zhì)
臨床研究多會有局限性,病原體的感染會應為動物的不同而表現(xiàn)出不同的特點。通過人畜感染患病比較研究,可以研究出同一病原體對不同機體帶來各種損害、不良反應。從中工作人員能發(fā)現(xiàn)某種疾病的本質(zhì),有利于解釋在人體上的病歷變化。動物疾病模型的另一個成效的用途:能仔細觀察環(huán)境或遺傳因素對疾病發(fā)生后的發(fā)展情況,對于全面地認識疾病本質(zhì)有重要意義。
3結(jié)論
/
“氨基酸脫水縮合”是高中生物教學中發(fā)展學生探究能力、考查學生邏輯推理能力、訓練學生思維發(fā)散能力的好素材。筆者以轉(zhuǎn)變學生的學習方式、發(fā)揮學生在學習過程中的主體作用為前提,創(chuàng)新教學設計,優(yōu)化教學過程,在模型構建、角色扮演、任務驅(qū)動、情境設置、逐層拓展、典例應用等教學環(huán)節(jié)中,融教師有意義的“教”和學生有意義的“學”為一體。這樣不僅可幫助學生獲取知識、發(fā)展能力、提升思維,而且引導學生在參與中學會、在拓展中學到、在應用中鞏固,進而在構建高效課堂的基礎上實現(xiàn)有效教學。
2 內(nèi)容分析
本節(jié)內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)的氨基酸的結(jié)構通式、氨基酸脫水縮合的過程、脫水縮合的規(guī)律等。其中,組成蛋白質(zhì)的氨基酸的結(jié)構通式、氨基酸脫水縮合的過程和脫水縮合規(guī)律是教學重點,氨基酸脫水縮合規(guī)律的拓展和歸納是教學難點。在教學過程中,通過人體模型構建氨基酸的結(jié)構,以角色扮演的方式展示氨基酸脫水縮合的過程,并以情境設置、問題驅(qū)動引導學生逐層分析、歸納總結(jié)脫水縮合的規(guī)律,進而幫助學生把握重點、突破難點。
3 教學目標
3.1 知識目標
寫出氨基酸的分子結(jié)構通式,并指出其特點;解釋氨基酸脫水縮合的過程,并命名多肽化合物;得出氨基酸脫水縮合過程中,形成的肽鍵的數(shù)目、脫去的水分子數(shù)目、化合物中游離的氨基和羧基的數(shù)目及肽鏈肽環(huán)的相對分子量;闡明氨基酸脫水縮合的規(guī)律。
3.2 能力目標
通過模型構建氨基酸的結(jié)構通式;通過角色扮演氨基酸脫水縮合的過程,提升模擬探究能力;通過參與問題串的學習和討論,提高分析問題、解決問題的能力;通過歸納總結(jié)脫水縮合的規(guī)律,發(fā)展邏輯推理能力、思維發(fā)散能力和語言表達能力。
3.3 情感目標
通過感悟知識的生成,體驗學習的樂趣,收獲成功的喜悅,自覺自信地參與教學活動的各個環(huán)節(jié)。
4 教學過程
4.1 構建模型,巧學氨基酸結(jié)構通式
理解氨基酸的脫水縮合是以了解組成蛋白質(zhì)的氨基酸分子的結(jié)構通式為基礎的,因此,學生對氨基酸分子結(jié)構通式的理解程度直接決定了對氨基酸脫水縮合過程及規(guī)律的掌握程度。教師要充分利用教室中的學生資源,以人體組成為模型,直觀生動地展示氨基酸分子的結(jié)構特點:人體的左臂、右臂、下肢及頭部連接在同一個軀干上,就像氨基酸分子的氨基、羧基、H原子、R基團共同連接在中心碳原子上;與軀干相連的左臂對應與中心碳原子相連的氨基;右臂對應羧基;下肢對應H原子;頭部就是氨基酸分子的R基了。教師以自身為模型,一邊引導學生比劃,一邊描述:中心碳原子左手拉著氨基,右手領著羧基,腳底下還踩著氫,頭頂上頂著R基。教師通過各具特色的臉龐認識了每位學生,以此類比區(qū)分各種各樣組成蛋白質(zhì)的氨基酸是根據(jù)R基的不同。
設計意圖:直觀形象的肢體展示,再配上活潑生動的語言描述,在拉近師生距離的同時,也拉近了學生和知識點的距離,為后續(xù)的教學活動的組織創(chuàng)造自然輕松的環(huán)境。
活動方案設計:請甲、乙兩位學生走上講臺面對黑板,聽口令并用肢體演示出來。筆者站在講臺下也面對黑板,此時通過肢體語言向?qū)W生發(fā)出信息,示意他們說出其代表的氨基酸的結(jié)構。甲、乙兩位學生聽到指令后,也用身體的相應部位表示出來,根據(jù)兩位學生的表演,其他學生再做評價。
設計意圖:在這個輕松自然的活動中,表面上是在檢測講臺上甲、乙兩位學生對知識的理解情況,其實質(zhì)是營造一個全體學生共同參與學習的氛圍,讓每位學生有機會融入教學設計的環(huán)節(jié),提高學生學習的積極性和主動性。
4.2 角色扮演,模擬脫水縮合;任務驅(qū)動,實現(xiàn)高效構建
活動設計一:蛋白質(zhì)是以氨基酸為基本單位構成的生物大分子,小分子的氨基酸是怎樣結(jié)合成蛋白質(zhì)的肽鏈呢?教師要求學生帶著問題自學人教版生物必修1教材22頁“氨基酸分子相互結(jié)合的方式”,并將與答案相關的知識點在教材上劃出來。
活動設計二:教師要求學生一起放聲朗讀氨基酸脫水縮合的過程,動眼、動口、動腦、動耳多器官的共同參與,進一步熟悉“脫水縮合、肽鍵、二肽、多肽、肽鏈”等術語,為知識的理解、鞏固和準確表達奠定基礎。
活動設計三:扮演氨基酸的甲、乙兩位學生通過自身的肢體變化,模擬氨基酸脫水縮合的過程。甲、乙兩位學生走到一起,甲學生的右手握住乙學生的左手,同時保持雙臂伸展的姿勢。此時,筆者和其他學生利用這個模型,對新形成的“化合物”進行討論分析:
① 觀察新形成的“化合物”,說出各個部位的名稱。
② 分析在脫水縮合前后,甲、乙兩個氨基酸的哪些部位發(fā)生了變化,發(fā)生了怎樣的變化?
③ 兩個氨基酸“手拉手”的方式是什么?形成的新化學鍵叫什么名稱,如何表示?在形成該結(jié)構的過程中還發(fā)生了什么變化?
④ 新形成的化合物如何命名?該化合物中還含有多少個游離的氨基和羧基?
⑤ 既然氨基酸分子相互結(jié)合的方式是脫水縮合,那么構建的這個模型怎樣才能更形象更生動地展示脫水縮合呢?
話音剛落,丙學生大步走上講臺,若無其事地站在甲、乙兩位學生的面前,一本正經(jīng)地說:“不是脫水縮合嗎?沒有水的生成怎么能叫脫水縮合呢?”說完,從背后拿出準備好的瓶子,將水緩緩地倒在兩位學生拉手的部位。頓時,雷鳴般的掌聲在教室里響起。
活動設計四:那么3個氨基酸又是如何脫水縮合呢?教師邀請丁學生的熱情加入,給其他學生展示3個氨基酸的脫水縮合。3位學生手拉手排成一排。教師提問:此時3個氨基酸手拉手脫水縮合形成的鏈狀化合物叫什么?該化合物中含有多少個肽鍵,還有多少個游離的氨基和羧基?脫水縮合前后,物質(zhì)的相對分子質(zhì)量發(fā)生了怎樣的變化?
4.3 情境設置,逐層拓展,歸納總結(jié)脫水規(guī)律
拓展1:如果每個人都是一個氨基酸的話,全班25位女生手拉手脫水縮合形成的一條鏈狀化合物叫什么?該化合物含有多少個肽鍵,在形成肽鍵的過程中,脫去多少個水分子?假如其余的35位男生也手拉手脫水縮合形成一條肽鏈,該化合物又該如何命名?又合成多少個肽鍵,生成多少個水分子?脫水縮合前后,物質(zhì)的相對分子質(zhì)量又發(fā)生怎樣的變化?
歸納小結(jié)一:
N個氨基酸脫水縮合形成具有一條肽鏈的N肽化合物,脫去了N-1個水分子,該化合物中含有N-1個肽鍵,至少含有一個游離的氨基和一個游離的羧基分布在該肽鏈的兩端。
拓展2:當全班25位女生手拉手形成一條肽鏈,其余的35位男生也手拉手形成一條肽鏈,共同形成一個具有兩條肽鏈的蛋白質(zhì),請問該蛋白質(zhì)分子中含有多少個肽鍵,形成肽鍵的過程中脫去多少分子的水?胰島素分子有A、B兩條肽鏈,A鏈有21個氨基酸,B鏈有30個氨基酸,胰島素分子中肽鍵的數(shù)目是多少?該胰島素分子中至少含有多少個游離的氨基和羧基?
拓展3:N個氨基酸脫水縮合形成具有M條肽鏈的蛋白質(zhì),請問該蛋白質(zhì)中含有多少個肽鍵,形成肽鏈時,又脫去多少分子的水?脫水縮合前后,物質(zhì)的相對分子量又發(fā)生怎樣的變化?該蛋白質(zhì)分子中至少含有多少個游離的氨基和羧基?
歸納小結(jié)二:
氨基酸的數(shù)目-肽鏈的數(shù)目=脫去的水分子的數(shù)目=生成的肽鍵的數(shù)目;
蛋白質(zhì)分子中至少含有的游離的氨基、羧基的數(shù)目=該蛋白質(zhì)中肽鏈的數(shù)目。
拓展4:N個氨基酸脫水縮合時,若形成的多肽是環(huán)狀蛋白質(zhì),請問該蛋白質(zhì)分子中又含有多少個肽鍵,形成肽鍵時,又脫去多少個水分子?脫水縮合前后,物質(zhì)的相對分子量又發(fā)生怎樣變化?
歸納小結(jié)三:
N個氨基酸脫水縮合形成肽環(huán)時,脫去N個水分子,形成N個肽鍵。即氨基酸的數(shù)目=生成的肽鍵的數(shù)目=脫去的水分子的數(shù)目。
歸納小結(jié)四:
[關鍵詞] 二至百合濃縮膏;抗焦慮;雌性大鼠;去勢;高架十字迷宮;明暗箱
[中圖分類號] R363 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616(2013)12-20-03
更年期綜合征是婦女在這一時期由于雌激素水平下降所致的以機體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主,伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群。二至百合組方中包含女貞子、旱蓮草、百合、知母、牡蠣等中藥組成成分,具有滋陰潛陽,退熱安神之功效。主要用于婦女更年期初期,證見陰虛陽亢,陰虛發(fā)熱,骨蒸潮熱,焦慮煩躁,失眠多夢者。本實驗通過雌性大鼠雙側(cè)卵巢祛除術復制大鼠更年期綜合征模型,觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學指標的影響,初步評價藥物的改善更年期焦慮作用。
1 資料與方法
1.1 藥品及試劑
二至百合濃縮膏,北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司(批號20120902)。
1.2 實驗動物
Wistar大鼠,75只,雌性,體重(200±20)g,SPF級,購自中國人民軍事科學院實驗動物中心。許可證編號:SCXK-(軍)2007-004。
1.3 儀器
海爾BCD-257SL冷藏冷凍冰箱:青島海爾股份有限公司;Sartorious BT 124S電子精密天平:賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;明暗穿梭箱、高架十字迷宮、高架十字迷宮實驗視頻分析系統(tǒng)、SLY-ETS小動物行為活動記錄分析系統(tǒng),均由北京碩林苑科技有限公司生產(chǎn)。
1.4 方法
1.4.1 動物模型制備與分組 在適應性飼養(yǎng)5 d后,將75只大鼠隨機分為5組,分別為:假手術空白組,模型組,二至百合高劑量(1.92 g濃縮膏/kg)、中劑量(0.96 g濃縮膏/kg)、低劑量(0.48 g濃縮膏/kg)組,每組15只。
模型組及受試樣品3個劑量組制備雌性去勢大鼠(雙側(cè)卵巢切除術)模型[1-2]:大鼠0.1%戊巴比妥鈉0.5 mL/100 g體重(50 mg/kg)腹腔注射麻醉。麻醉大鼠取俯臥位,在背部中1/3處剪毛、備皮,碘伏常規(guī)消毒。自腰椎沿背部正中線向下做縱行切口約2~3 cm,切開皮膚,沿肩胛線分別于左右兩肋下剪開腰肌,暴露出卵巢及緊密相連的子宮,在子宮角上做兩個結(jié)扎,結(jié)扎后切斷,將卵巢摘除,縫合皮膚。術后連續(xù)腹腔注射72萬U/kg青霉素,以防感染,1次/d,連續(xù)3 d。術后第3天開始給大鼠陰道涂片觀察,連續(xù)5 d,每天1次,以確定卵巢完全切除。實驗動物從術后的第5天起全部進入動情間期,但動物不再出現(xiàn)動情前期,動情期的雌激素變化,動物基本上符合“更年期”表現(xiàn)。假手術空白組大鼠除不行卵巢摘除外,其余步驟同模型組。
造模后9 d,除假手術空白組和模型組給予等體積蒸餾水外,其余各組開始灌胃給藥,每日1次,連續(xù)45 d后分別進行高架十字迷宮和明暗箱行為學實驗測試(先開展高架十字迷宮實驗,其后間隔1周后開展明暗箱實驗)。
1.4.2 大鼠高架十字迷宮實驗 末次給藥30 min后,進行高架十字迷宮行為學的測評。實驗開始時,將大鼠放入高架十字迷宮中央,頭朝開臂,觀察5 min內(nèi)大鼠的活動情況[3-5]。觀察并記錄以下各項指標:進入開臂次數(shù),進入閉臂次數(shù),以及在兩臂的滯留時間。分別計算大鼠進入開臂的時間占總時間(開臂和閉臂滯留的時間之和)的百分比(open arm time percent,OT%),以及大鼠進入開臂的次數(shù)占總次數(shù)(開臂與閉臂之和)的百分比(open arm entry percent,OE%)。觀察時以大鼠四爪均進入開臂或閉臂為準。
1.4.3 大鼠明暗箱實驗 末次給藥30 min后,將大鼠置于明箱中央,背朝通道,觀察5 min內(nèi)大鼠的活動情況并記錄明暗箱停留時間和穿箱次數(shù)。
以上兩種行為學檢測實驗操作時,應保持外界環(huán)境安靜,每次放入大鼠前清理干凈箱內(nèi)的排泄物,盡可能保證每批次檢測的客觀性。
1.5 統(tǒng)計學處理
采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理,數(shù)據(jù)以()表示,數(shù)據(jù)先進行方差齊性檢驗。方差齊選用One-Way ANOVA法進行各組間比較;方差不齊選用t檢驗進行組間比較。
2 結(jié)果
2.1 二至百合濃縮膏對去勢大鼠高架十字迷宮行為活動的影響
實驗結(jié)果顯示,模型組組大鼠與假手術空白組比較,OE%和OT%顯著減小(均P
2.2 二至百合濃縮膏對去勢大鼠明暗箱穿梭行為的影響
研究結(jié)果顯示,模型組大鼠明箱停留時間和穿箱次數(shù)均顯著降低,與假手術空白組比較差異有統(tǒng)計學意義(分別P
3 討論
更年期綜合征[6]屬于中醫(yī)學“絕經(jīng)前后諸癥”范疇,歷代文獻關于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中。絕經(jīng)前后腎臟虛損,腎氣漸衰,耗傷,陰陽平衡失調(diào),臟腑功能紊亂而出現(xiàn)絕經(jīng)前后諸癥證候[7]。隨著我國人口結(jié)構不斷老齡化和社會競爭日益激烈,不良的工作環(huán)境、家庭關系緊張及精神等因素影響,婦女進入更年期逐漸增加、年齡提早,從而使更年期焦慮癥的發(fā)病率亦明顯增加[8]。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會意義。
二至百合方由經(jīng)典方劑“二至丸”和“百合知母湯”合方加減而成,具有滋陰潛陽,退熱安神之功效。本研究主要通過雌性大鼠卵巢祛除術復制大鼠更年期綜合征模型,進而采用高架十字迷宮和明暗箱實驗觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學的影響,評價處方的改善更年期綜合征焦慮作用。
高架十字迷宮模型,為抗焦慮研究中公認的非條件反射模型,是抗焦慮研究中應用最廣泛的模型之一[9]。它利用動物對新異環(huán)境的探究特性相對高懸敞開臂的恐懼心理,形成動物的矛盾行為,進入開放臂的百分數(shù)(OE%)和在開放臂停留時間的百分數(shù)(OT%)反映的是動物趨近規(guī)避沖突的結(jié)果,與焦慮程度直接相關。通??菇箲]藥只增加動物對開放臂的探索,使OE%和OT%上升。開放臂和封閉臂總進入次數(shù)反映了動物總的運動能力,可用來觀察藥物有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強度。被保護區(qū)的活動性一定程度上與抗焦慮劑的效應相關[10]焦慮動物的OE%和OT%明顯降低,經(jīng)典抗焦慮藥物則使兩者升高[11];明暗箱行為實驗[12-13]中,明箱活動時間越長,探洞和穿梭次數(shù)越多,反映實驗動物對新環(huán)境的探索欲望水平越高,探索欲越強則代表環(huán)境適應能力越強,焦慮水平越低。
本實驗以去勢大鼠造成更年期模型,考慮動物行為檢測的個體差異可能比較大,所以本實驗選用了較為經(jīng)典的2種焦慮行為檢測方法進行二至百合膠囊的抗焦慮實驗。本研究表明,高架十字迷宮實驗中,與假手術空白組比較,去勢大鼠進入開閉時間和次數(shù)的百分率顯著下降,在明暗箱實驗中,與假手術空白對照組比較,去勢大鼠在明箱停留時間明顯縮短,穿箱次數(shù)明顯減少。由此提示,去勢動物處于焦慮狀態(tài)。高架十字迷宮實驗中,二至百合濃縮膏3個劑量組均可增加去勢大鼠OE%和OT%值,與模型組比較,中劑量組OE%和OT%值有明顯的統(tǒng)計學意義(P
根據(jù)相關文獻報道含有百合[14-15]、知母[16-17]等藥物組方在臨床上對更年期綜合征具有明顯治療作用,有實驗表明含有女貞子[18]的復方藥物連續(xù)灌胃可明顯降低更年期大鼠血清促性腺激素FSH含量,對血清E2含量有顯著增加作用,使更年期陰虛內(nèi)熱、煩躁不安、失眠等癥狀得以緩解。
本實驗研究結(jié)果表明二至百合方對更年期焦慮癥狀有明顯改善,對更年期綜合征有一定的緩解作用,但是二至百合方改善更年期綜合征模型大鼠焦慮行為學的作用機理有待進一步深入研究。
[參考文獻]
[1] 徐叔云.藥理實驗方法學[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,199:1293
[2] 董麗,程衛(wèi)東,李建,等.玫參膠囊對雌性去卵巢大鼠性激素與下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)作用的實驗研究[J].陜西中醫(yī),2009,30(3):356-357.
[3] 王欣,謝鳴.酸棗仁湯對高架十字迷宮大鼠行為學影響的量效關系評價[J].中國實驗方劑學雜志,2004,10(1):35.
[4] Pellow S,Chopin P,F(xiàn)ile SE,et al.Validation ofopen:closed arm entries in an elevated plus-maze as ameasureof anxiety in the rat[J].J Neurosci Methods,1985,14(3):149-167.
[5] Bertoglio LJ,Carobrez AP.Previousmaze experience required to increase open arms avoidance in rats submitted to the elevated plus-maze model of anxiety[J].Behav Brain Res,2000,108(2):197-203.
[6] 樂杰,謝幸,豐有吉.婦產(chǎn)科學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:349-352.
[7] 馬寶璋,劉瑞芬,杜慧蘭.中醫(yī)婦科學[M].上海:上海科學技術出版社,2007:118-120.
[8] 秦莉花,李晟,易霞,等.中醫(yī)藥治療更年期焦慮癥的思考[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2012,14(11):128-130.
[9] Gard PR,Haigh SJ,Cambursano PT,et al.Strain differences in anxiolytic effects of losartan in the mouse[J].Pharmacol Biochem Behav,2001,69:35-40.
[10] Cole JC,Rodgers RJ.An ethological analysis of the effects of chlordiazepoxide and bretazenil(Ro16-6028) in themurine ele-vated plus-maze[J].Behav Pharmaco,1993,4(6):573-580.
[11] Dalvi A,Rodgers RJ.Behavioral effects of diazepam in the murine plus-maze:flumazenil antagonism of enhanced head dipping but not the disinhibition of open-arm avoidance[J].Pharmacol Bichem Behav,1999,62(4):727-734.
[12] 黃繼忠,王祖承.焦慮動物模型的實驗方法和藥理學評價[J].上海精神醫(yī)學,2003,15(2):106-109.
[13] 元曉麗,林文娟.焦慮和抑郁動物模型的研究方法和策略[J].心理科學進展,2005,13(3):327-333.
[14] 唐安全.百合龍牡湯治療更年期綜合征50例療效觀察[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2011,5(2):184.
[15] 張士金.百合地黃湯加味聯(lián)合西藥用于更年期郁證的臨床研究[J].中醫(yī)學報,2012,8(27):1049-1050.
[16] 楊艷秋,周麗雅.補腎養(yǎng)血法治療更年期綜合征48例臨床觀察[J].吉林正醫(yī)藥,2012,32(6):604-605.
[17] 呂新建.滋腎疏肝寧心湯治療圍絕經(jīng)期綜合征65例[J].陜西中醫(yī),2010,31(9):1185-1186.
【關鍵詞】 圍絕經(jīng)期綜合征; 肝郁; 去勢; 慢性束縛應激; 行為學
圍絕經(jīng)期綜合征指婦女絕經(jīng)前后由于性激素波動或減少所致的一系列軀體及精神心理癥狀,其中雌激素水平下降是引起該病的主要原因[1-2]。隨著生活水平提高,工作壓力加大,人口老齡化加劇,圍絕經(jīng)期綜合征的發(fā)病率逐年增高。肝氣郁結(jié)證是其主要中醫(yī)證型,中醫(yī)藥治療已經(jīng)取得較好的療效,而且副作用小[3-4]。目前比較認可的圍絕經(jīng)期綜合征肝郁模型是運用自然衰老的大鼠進行造模,然而由于其飼養(yǎng)周期長,成本高,來源非常稀少,因此相關的研究報道相對較少,中醫(yī)藥對其作用機制的了解受到很大的局限[5-6]。而去勢大鼠也是公認的圍絕經(jīng)期綜合征模型,其陰道脫落細胞涂片及血清性激素水平均和圍絕經(jīng)期發(fā)生的改變相似[7-8]。因此本研究擬用去勢大鼠模型,聯(lián)合慢性束縛應激與孤養(yǎng)法進行造模,從外觀特征及行為學水平來探討該模型的有效性,為進一步探討中醫(yī)藥治療圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的科學內(nèi)涵提供基礎。
1 資料與方法
1.1 一般資料 健康雌性SD大鼠24只,體質(zhì)量(220±20)g,
清潔級,動物許可證號為SCXK (京) 2002-2009,由福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。光/暗周期為12 h/12 h(光照時間6:00-18:00),室溫(22±2)℃,相對濕度保持為30%~40%,喂常規(guī)顆粒飼料及飲用水。適應性飼養(yǎng)兩周后,利用敞箱實驗對每只大鼠進行行為學評分,水平運動和垂直運動總得分低于40分和高于160分的動物予以剔除,選擇各項行為學指標得分相近的24只大鼠,按體質(zhì)量分層采用隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為假手術組、去勢空白組、去勢模型組,每組各8只,組間體質(zhì)量及曠場評分比較差異無統(tǒng)計學意義(P
1.2 模型的建立 (1)去勢:動物分組后行去卵巢手術。手術前,兩組大鼠均禁食12 h,按體質(zhì)量腹腔注射2%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉,模型組從腹部正中線切口,切除雙側(cè)卵巢,假手術組不切除卵巢,只將卵巢旁與卵巢等大的一塊脂肪組織切除。動物手術后自然修復兩周,在慢性束縛應激前進行連續(xù)5 d陰道涂片檢測,觀察無成熟脫落細胞,證明卵巢切除完整,造模成功。假手術組動物的陰道脫落細胞依然呈典型的周期性變化。(2)慢性束縛:用慢性束縛應激結(jié)合孤養(yǎng)法建立肝郁證大鼠模型,將去勢模型組大鼠置于束縛筒內(nèi),管壁有若干通風口,通風良好,大鼠能夠自由呼吸,束縛應激時間為6 h(9:00-15:00),連續(xù)束縛21 d,束縛應激期間禁食禁水。假手術組和去勢空白組在同一時段內(nèi)也是禁食禁水。(3)孤養(yǎng):去勢模型組單籠飼養(yǎng),假手術組和去勢空白組群養(yǎng),4只/籠。
1.3 體質(zhì)量與行為學檢測
1.3.1 外部特征及體質(zhì)量 每天造模前觀察并記錄各組大鼠的飲食、二便、毛發(fā)色澤、情緒行為等外觀方面的變化。分別于手術前1天,應激前1天,應激第7、14、21天上午8:00-9:00記錄各組大鼠體質(zhì)量。
1.3.2 曠場實驗 于動物分組前、應激前1天和應激第21天8:00-12:00進行測試。采用自制長×寬×高
=75 cm×75 cm×40 cm的敞箱,底面劃分成25個面積相等的方格。曠場的中央放一彩色瓶子激發(fā)大鼠的好奇心。拍攝并記錄5 min內(nèi)大鼠的水平運動格數(shù)(四爪皆進入記為1分)和垂直豎立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附箱壁記為1分)。每只大鼠均從同一角落放入,測評結(jié)束后,及時記錄糞便顆粒數(shù),并用75%酒精擦拭以消除氣味的影響,待酒精晾干后再進行下一次實驗。
1.3.3 糖水偏好實驗 分別在分組前、造模前和造模結(jié)束后檢測各組大鼠的糖水消耗率。按照文獻[9]的方法進行部分修改,實驗進行時,每只大鼠單籠喂養(yǎng),實驗前,訓練實驗大鼠適應含糖飲水12 h(20:00-次日8:00),10 h禁食禁水后,同時給予1%蔗糖水和純水各1瓶,1 h后調(diào)換蔗糖水和純水的位置,2 h后分別稱量純水消耗量及蔗糖水消耗量,計算糖水消耗率(糖水消耗率=糖水消耗量/總液體消耗量×100%)。
1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 19.0軟件,計量資料采用(x±s)表示,對所得一般性數(shù)據(jù)做正態(tài)分布檢驗和組間方差齊性檢驗,其中體質(zhì)量、糖水消耗率、曠場實驗的水平得分及垂直得分符合正態(tài)分布和方差齊性,用單因素方差分析,組間比較采用LSD檢驗進行分析;曠場實驗中的修飾得分、糞便數(shù)目不符合正態(tài)分布則采用采用非參數(shù)檢驗進行分析,以P
2 結(jié)果
2.1 三組外部特征及體質(zhì)量變化比較 造模前,各組大鼠活潑好動,皮毛光澤好、糞便呈球形。造模結(jié)束后,大鼠毛發(fā)變得干枯、胡須下搭、行動遲緩、精神倦怠、嗜臥、進食進水量減少、大便稀軟。各組大鼠在行去勢手術前體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。去勢后兩周即應激前1天,與假手術組相比,兩個去勢組的大鼠體質(zhì)量均顯著增加,差異有統(tǒng)計學意義(P
2.2 三組對曠場行為的影響比較 手術前,各組大鼠在基線水平的水平得分和垂直得分差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05);手術后兩周,即應激造模前1天,和假手術組比較,去勢空白組和去勢模型組大鼠的水平活動得分均有顯著下降(P
2.3 各組對糖水偏好的影響比較 手術前,各組大鼠在基線水平的糖水消耗率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);手術兩周后,即應激造模前,和假手術組比較,去勢空白組和去勢模型組的糖水消耗率均明顯下降,差異均有統(tǒng)計學意義(P
3 討論
課題組前期研究結(jié)果表明,肝郁是圍絕經(jīng)期綜合征的重要病理因素[4]。圍絕經(jīng)期女性常面臨家庭及事業(yè)等多種問題,精神壓力較大,多感所愿不遂、抑郁于內(nèi),易形成心理應激。因此,建立圍絕經(jīng)期綜合征肝郁動物模型對于本病機理的深入研究具有一定的現(xiàn)實意義。本文通過手術摘除卵巢人為地造成雌激素突然下降模擬圍絕經(jīng)期綜合征的狀態(tài),該方法周期短、簡單易行,是常用的一種圍絕經(jīng)期綜合征造模方法[8]。目前普遍認為,肝郁多表現(xiàn)為認知、人格等心境障礙,病理反應涉及植物神經(jīng)功能紊亂,神經(jīng)內(nèi)分泌免疫等調(diào)節(jié)網(wǎng)絡的失衡[10]。多數(shù)學者認為,肝主疏泄的功能與心理―應激反應有關,從心理―應激反應來研究肝郁是近幾年的研究熱點[11-12]。慢性束縛應激使動物自由行動受限,情緒受抑,比較接近中醫(yī)“情志不遂”致郁的發(fā)病學說;孤養(yǎng)則模擬了人類遠離社會、家庭的生存狀態(tài),運用束縛制動聯(lián)合孤養(yǎng)法建立肝郁大鼠模型,可以制造較為純粹的挫折應激和孤獨感受,是較好的負性心理應激動物模型[13-14]。另外,因其軀體應激因素較小,對機體無損傷性刺激,與人類身心性疾病的致病過程類似,近年來在肝郁相關研究中已被廣泛采用[15-16]。本研究表明,去勢模型組大鼠體重增加緩慢,探究行為減少,表現(xiàn)出情緒低落、興趣減退等癥狀,與圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證的形成過程相似。
圍絕經(jīng)期女性由于卵巢萎縮,雌激素分泌下降,糖和脂肪代謝發(fā)生紊亂,體脂分布異常,特別是腹內(nèi)脂肪積聚[14]。在本研究中大鼠在去勢手術后兩周體質(zhì)量顯著增加,該現(xiàn)象與女性在圍絕經(jīng)期的體質(zhì)量變化相吻合。在束縛應激條件下,腎上腺皮質(zhì)醇顯著升高,機體對胰島素的敏感性增加,皮質(zhì)醇還可以促進蛋白質(zhì)分解,抑制其合成,同時影響糖和脂類的代謝[17]。因此本研究中去勢模型組在應激開始后,體質(zhì)量幾乎沒有增長,甚至有下降的趨勢。
在行為學研究中,曠場實驗可以用來檢測動物在新奇環(huán)境中的活動度、探究行為、恐懼緊張狀態(tài)及警覺性,其中水平活動反映動物的活動度,垂直活動反映動物對新鮮環(huán)境的好奇程度,糞便粒數(shù)是大鼠緊張程度的表現(xiàn)[18]。肝氣郁結(jié)證核心癥狀之一是“缺失”,糖水偏好實驗則是用來檢驗動物對幸福事件反應能力的變化,糖水消耗量及偏嗜度降低,表明動物對獎勵敏感度低,常作為一項反映動物愉悅體驗能力的指標[19-20]。本研究表明,大鼠在去勢后,水平運動得分及糖水消耗率明顯下降,在慢性束縛應激結(jié)合孤養(yǎng)的作用下,去勢模型組大鼠的行為活動進一步減少、糖水消耗率進一步降低,提示僅僅去勢即會使大鼠活動度、好奇程度及獎賞反應的敏感度下降,但是肝郁造模后大鼠的各癥狀加劇,缺乏,興趣喪失,可能是由于大鼠卵巢切除后,生殖內(nèi)分泌功能開始衰退,對抗應激損傷的能力降低,腦內(nèi)獎賞系統(tǒng)的一些神經(jīng)元發(fā)生結(jié)構性損傷所致。
綜上所述,采用去勢及慢性束縛應激聯(lián)合孤養(yǎng)三步法復合制作圍絕經(jīng)期綜合征肝郁大鼠模型,可以有效地模仿女性圍絕經(jīng)期由于卵巢功能衰退引起的情感障礙、情緒低落的臨床表現(xiàn)。但是值得注意的是,在研究過程中發(fā)現(xiàn),慢性應激誘導行為改變的易感性存在較大的個體差異,該方法并不能實現(xiàn)百分之百的成功率,因此研究過程中,必須適當增加樣本例數(shù)[21]。另外,圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的病理機制涉及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫等調(diào)節(jié)網(wǎng)絡,運用現(xiàn)代分子生物學技術進一步闡明其發(fā)生發(fā)展機制,將為圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的臨床治療提供理論基礎。
參考文獻
[1]孫雪艷,傅萍,李芳,等.中醫(yī)藥治療圍絕經(jīng)期綜合征的實驗研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊,2010,29(9):1930-1932.
[2]李日蘭.圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病機制及雌激素替代治療研究進展[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2011,8(26):194-195.
[3]喬明琦,徐旭杰.經(jīng)前期綜合征證候分布規(guī)律的流行病學調(diào)查研究[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,1997,3(3):31-33.
[4]張凌媛,康潔,丁珊珊,等.圍絕經(jīng)期綜合征患者舌苔脫落細胞EGFR表達與中醫(yī)肝郁分級相關性的研究[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2014,11(6):14-16.
[5] Chen S J,Asakawa T,Ding S S,et al.Chaihu-Shugan-San administration ameliorates perimenopausal anxiety and depression in rats[J].Plos One,2013,8(8):724 28.
[6]李生強,李亞嬋,梁文娜,等.柴胡疏肝散對圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證大鼠模型海馬ERK1/2的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2014,29(10):3201-3204.
[7]孫靜汾,趙燁,吳素慧.圍絕經(jīng)期綜合征實驗動物模型的比較分析[J].山西醫(yī)科大學學報,2007,38(1):43-45.
[8]辛明蔚,劉雁峰.大鼠模型在更年期綜合征中西醫(yī)實驗研究中的應用概述[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2013,6(10):764-769.
[9] D'Aquila P S,Brain P,Willner P.Effects of chronic mild stress on performance in behavioural tests relevant to anxiety and depression[J].Physiol Behav,1994,56(5):861-867.
[10]王愛成,王玉來,陳錦鋒,等.肝氣郁結(jié)證的理論與實驗研究概述[J].遼寧中醫(yī)學院學報,2005,7(1):74-75.
[11]嚴燦,徐志偉,吳麗麗,等.建立中醫(yī)情志致病動物模型的思考[J].中國臨床康復,2006,10(3):155-157.
[12]李曉紅,李晶晶,劉明蕓,等.從慢性應激探討肝郁脾虛證的中樞神經(jīng)生物學機制[J].中西醫(yī)結(jié)合學報,2012,10(1):1-6.
[13]謝興振,遲曉麗,周文霞,等.應激動物模型研究進展[J].中國新藥雜志,2008,17(16):1375-1380.
[14] McInnes K J,Corbould A,Simpson E R,et al. Regulation of adenosine 5',monophosphate-activated protein kinase and lipogenesis by androgens contributes to visceral obesity in an estrogen-deficient state[J].Endocrinology,2006,147(12):5907-5913.
[15]宋春紅,高杰,陳志恒,等.經(jīng)前期綜合征肝氣郁證大鼠下丘腦ERβ的表達及配體受體結(jié)合活性的研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2013,24(2):125-129.
[16]魏盛,張惠云.經(jīng)前期綜合征肝氣逆、郁兩證大鼠模型建立及宏觀評價方法初探[J].實驗動物與比較醫(yī)學,2009,29(3):142-146.
[17]遲強,許鵬,盧山,等.慢性束縛應激動物模型生物學特性及相關機制研究進展[J].臨床軍醫(yī)雜志,2013,41(12):1299-1301.
[18] Roy M,David N,Cueva M,et al.A study of the involvement of melanin-concentrating hormone receptor 1 (MCHR1) in murine models of depression[J].Biol Psychiatry,2007,61(2):174-80.
[19]趙海濱,劉子旺,張秀靜.電針肝俞、期門對肝氣郁結(jié)模型大鼠行為學的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學學報,2012,29(1):30-33.
[20] Green A D,Barr A M,Galea L A.Role of estradiol withdrawal in 'anhedonic' sucrose consumption:a model of postpartum depression[J].Physiol Behav,2009,97(2):259-265.
關鍵詞:慢性疲勞綜合征 慢性束縛
Chronicity weary synthesis drafts the big mouse to make mold two method comparison
Mei Rongjun Wei Xiaoli
Abstract:Objective:Discusses the barrel fetter law to send the big mouse chronicity with the fetter law to make the mold wearily the comparison. Methods:30 male Wistar big mice divide into the barrel fetter group stochastically,puts up the fetter group and the control group,each group of each 10,use the chronic fetter the way to establish the big mouse chronicity weary synthesis to draft the model,observes each group of big mouses strength to use up the swimming experiment. Results:The barrel fetter group compares the fetter group big mouses behavior study target closer chronicity state of fatigue,also the death quantity are few. Conclusion :Establishes the more ideal chronic weary animal model support fetter law to surpass the barrel fetter law.
Keywords:The chronic weary synthesis drafts The chronic fetter
【中圖分類號】R-3 【文獻標識碼】A 【文章編號】1008-1879(2010)12-0002-01
本課題組[1]確立較為理想的動物模型是研究CFS的基礎,本觀察通過對兩種常見慢性束縛造模方法的比較,尋找更合理的造模方法。
1 材料與方法
1.1 材料。
1.1.1 動物。健康雄性Wistar大鼠30只,清潔級,體重160g~200g,由黑龍江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。動物飼養(yǎng)環(huán)境:清潔級實驗室飼養(yǎng),溫度20℃~28℃,濕度35%~70%,噪聲
1.1.2 主要儀器及造模用具。儀器:水迷宮(研究室設備)。桶束縛法:用硬塑料瓶特制束縛筒,管狀,長18 cm直徑5.2 cm,其瓶口為通氣口。大鼠頭向通氣口置入后,調(diào)節(jié)封口束縛大鼠活動空間。大鼠束縛架:為木制,底座寬10cm、長20cm、厚1cm,四角鐵釘、大鼠四肢捆綁彈力帶。
1.2 方法。
大鼠適應性飼養(yǎng)3d后,隨機分為桶束縛組、架束縛組與正常組,每組10只,10只/籠,自由進食飲水。造模期間,桶束縛組與架束縛組每天各束縛1次,晚上六點開始。束縛時,使桶束縛組大鼠鉆進束縛筒內(nèi),調(diào)節(jié)到其不產(chǎn)生強烈反抗的緊張程度,平放在大鐵臺上。將架束縛組大鼠束縛于特制的鼠束縛架上。桶束縛時間為4小時,架束縛時間為3小時。束縛過程中,正常組動物在同一環(huán)境,不予以進食水。造模2周,桶束縛組死亡2只。結(jié)束后,立即開始行為學的測定。
2 力竭游泳實驗觀察
3組動物均于造模前一天及造模的第14天(造模最后1d)進行,記錄大鼠從入水到游泳至力竭的時間(2次游泳法,取均值)。力竭游泳時水深為50cm、水溫(28±1)℃,將事先標記好的大鼠同時置入游泳池,記錄大鼠從入水到游泳至力竭(頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標準)的時間。
3 結(jié)果
本觀察選擇力竭游泳實驗評定動物模型,造模后架束縛組大鼠力竭游泳時間時間明顯減少,與正常組對比有明顯統(tǒng)計學意義(*P