前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇條件性基因敲除的基本原理范文，相信會為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

條件性基因敲除的基本原理范文第1篇

[關(guān)鍵詞]藥對；研究策略；相互作用；系統(tǒng)生物學(xué)；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

[收稿日期]2013-09-11

[基金項目]國家科技支撐計劃項目（2008BAI51B01）；國家自然科學(xué)基金項目（81274058）；江蘇省高校自然科學(xué)重大基礎(chǔ)研究項目（10KJA360039）

[通信作者]*唐于平，Tel： （025） 85811695，E-mail： 許多學(xué)者都有一個共同的認識：中醫(yī)藥學(xué)源遠流長，博大精深，是中華民族優(yōu)秀的文化瑰寶；作為炎黃子孫和中醫(yī)藥工作者，我們必須有重大歷史責(zé)任感和神圣使命感做好中醫(yī)藥研究，把中國幾千年的中醫(yī)藥經(jīng)驗進行分析，把的確經(jīng)得住考驗的部分、精華繼承下來，并發(fā)展到現(xiàn)代科學(xué)知識水平。藥對是歷代中醫(yī)藥學(xué)家在長期遣方用藥過程中積累起來的簡約而精妙的經(jīng)驗總結(jié)，其盡管只是兩藥相合，卻搭配巧妙、比例得當，能很好地詮釋中藥“合群妙用”的特點。藥對是單味中藥與若干方劑之間的橋梁，是許多方劑隱含的規(guī)律性特征與辯證施治內(nèi)涵的體現(xiàn)。因此，借助現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與手段，運用適宜于中醫(yī)藥特色的研究策略與方法，揭示藥對的配伍特點和臨床應(yīng)用規(guī)律，對于解析方劑的組成結(jié)構(gòu)，掌握遣藥組方規(guī)律，提高臨床治療水平，發(fā)展中醫(yī)藥配伍理論和創(chuàng)制現(xiàn)代中藥都具有十分重要的理論意義與實踐價值。

1通過比較研究藥對的配伍規(guī)律

比較法是一種應(yīng)用廣泛的，區(qū)別事物相同點和不同點最基本的邏輯思維方法，是認識世界不可缺少的一種思維方式。比較法在中醫(yī)藥教育和科學(xué)研究中均得到了有效的應(yīng)用[1]。藥對不同于單味中藥，但卻是中藥學(xué)應(yīng)用的升華；它也不同于方劑學(xué)，而又是方劑學(xué)的基礎(chǔ)，它是單味中藥與若干方劑之間的橋梁，所以比較法就非常適合應(yīng)用于藥對的研究。藥對的比較研究可分為2個方面：一方面是從橫向進行比較，主要包括藥對-單味藥、藥對-方劑、單味藥-藥對-方劑（制劑）、單體成分-單味藥-藥對-方劑、單體成分-成分群/部位-單味藥-藥對-方劑等的比較。如王雁梅等[2]采用RP-HPLC比較測定芎湯（當歸9 g、川芎9 g）、生化湯（當歸9 g、川芎9 g、桃仁6 g、炮姜2 g、制甘草2 g）、四物湯（當歸9 g、川芎9 g、白芍9 g、熟地黃12 g）中阿魏酸煎出量分別為（109.4±3.0），（95.3±1.9），（85.6±2.0） mg?L-1，說明當歸-川芎藥對配伍桃仁、炮姜、制甘草，以及配伍白芍、熟地黃后阿魏酸煎出量均降低。另一方面是從縱向進行比較，主要包括同一藥對不同配伍比例、不同提取方法、不同炮制品、不同部位/成分（群）配伍的比較，以及同一藥味不同系列藥對的比較等。如張朔等[3]通過比較黃連-吳茱萸不同配比（1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，6∶1，7∶1，8∶1，9∶1，10∶1）對大鼠胃酸分泌和胃潰瘍愈合治療作用的影響發(fā)現(xiàn)，黃連、吳茱萸6∶1具有顯著的抑制大鼠胃酸分泌及抗?jié)冏饔?，為最佳配伍比例。此外，藥對的比較研究中還存在橫向和縱向同時進行比較的情況。如于洋等[4]研究發(fā)現(xiàn)，不同比例的黃柏、蒼術(shù)配伍對二甲苯所致小鼠耳腫脹有協(xié)同抗炎作用、對小鼠腹腔毛細血管通透性有抑制作用，且尤以蒼柏1∶2組作用明顯，優(yōu)于單味藥組，同蒼柏1∶1（二妙散）組和蒼柏2∶1組相比也有增強趨勢；對蛋清所致大鼠足腫脹的抗炎作用與蒼術(shù)組比均有明顯增強趨勢，但各比例配伍組之間無明顯差異。蒼柏1∶1，1∶2組對正常小鼠炭粒廓清功能抑制作用明顯。蒼柏不同比例配伍均有抑制大鼠右后足趾腫脹的作用，且尤以蒼柏1∶1和2∶1組作用明顯，優(yōu)于黃柏、蒼術(shù)單用組。蒼柏1∶1組對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）的抗炎作用最優(yōu)。

通過橫向比較，既可觀察單體成分、成分群、部位、單味藥、藥對、方劑之間物質(zhì)基礎(chǔ)與功效的差異取向變化，亦可以藥對作為重要橋梁，實現(xiàn)方劑從點到面的系統(tǒng)研究，探討其內(nèi)在的關(guān)聯(lián)關(guān)系；通過縱向比較，既可篩選出藥對發(fā)揮療效的最佳配比，驗證藥對經(jīng)典配比的科學(xué)性，亦可尋求新的藥對的精當配比，拓寬藥對的臨床應(yīng)用等。比較法在藥對研究中具有重要的應(yīng)用價值，通過藥對各個方面的比較，根據(jù)其功效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理效應(yīng)與機制和臨床應(yīng)用表現(xiàn)，分析得出其配伍的規(guī)律性特點。并可根據(jù)其比較結(jié)果中的特殊性，推測藥對發(fā)展的趨勢，更好地把握藥對發(fā)生與發(fā)展的規(guī)律。比較法在藥對的研究中應(yīng)用極為廣泛，它不但可以獨立地被應(yīng)用于藥對的研究中，往往還貫穿于藥對的其他研究策略與方法中。

2在體實驗和離體實驗的整合效應(yīng)評價

在體實驗是對整體動物進行藥物作用的觀察，包括正常動物和病理模型動物實驗。在體實驗保持了機體本身的完整性，包括神經(jīng)反射、體液聯(lián)系、完整的內(nèi)臟功能、機體對藥物的代謝排泄等，特別是它可以采用符合臨床的給藥途徑，這些都是體外實驗所不如的。但在對藥對配伍效應(yīng)和作用機制進行研究時，僅在正常動物身上進行試驗是往往不夠的，還要制備相應(yīng)的病理模型。尤其是符合中醫(yī)“證”的模型。因為，有些作用在正常動物身上無法體現(xiàn)，如要觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用，就首先要制造疼痛的模型；要觀察藥物的抗炎作用，就要有炎癥動物模型等；病理模型模擬疾病，比正常機體更接近病人的機能狀態(tài)，而機體機能狀態(tài)不同對藥物的反應(yīng)產(chǎn)生量或質(zhì)的影響。如有些藥物對正常動物作用不明顯，而對病理模型動物卻表現(xiàn)出明顯的作用。因此，制備相應(yīng)的病理模型在藥對配伍效應(yīng)與機制研究中非常重要。

離體實驗是指在體外進行的實驗，包括各種動物的離體組織，如腦組織、肝組織等；離體器官，如離體心臟、離體子宮、離體腸管、離體氣管、離體主動脈條、離體神經(jīng)等；離體或體外培養(yǎng)的細胞，如血細胞、心肌細胞、腦細胞、膠原細胞等；試管內(nèi)或培養(yǎng)基內(nèi)的細菌、病毒等菌群代謝、病原體或癌細胞的實驗等。體外實驗可以按照要求嚴格控制實驗條件，有重復(fù)性較好、用藥量少、節(jié)省動物、所得結(jié)果較易分析等優(yōu)點。但因離體器官、細胞直接接觸藥物，在進行此類實驗時，應(yīng)充分估計到中藥提取物中的雜質(zhì)和理化特性的不同對實驗結(jié)果的影響，如藥液的酸堿度、各種電解質(zhì)和鞣質(zhì)等。如有些中藥在體外具有較強的抗菌作用，但在體內(nèi)不一定表現(xiàn)出相同的作用；某些中藥提取物含有大量的金屬離子，盡管在體外表現(xiàn)出對平滑肌或心肌細胞有明顯的藥理活性，但口服不一定再現(xiàn)相應(yīng)的藥效。

在體實驗有時得到的結(jié)論比較籠統(tǒng)，要深入分析作用機制時，往往需要結(jié)合離體實驗，兩者相輔相成，互為補充[5]。如靳康[6]分別從整體（急性心肌缺血再灌注損傷實驗）、器官（離體血管舒張實驗）、細胞（原代心肌細胞培養(yǎng)缺氧再復(fù)氧損傷實驗）和分子（Western blot實驗）水平上探討了丹參-丹皮藥對中2種化合物丹酚酸B（Sal B）-丹皮酚（Pae）不同配伍比例（4∶0，3.5∶0.5，3∶1，2.5∶1.5，2∶2，1.5∶2.5，1∶3，0.5∶3.5，0∶4）對急性心肌缺血再灌注損傷模型的影響。在體實驗和離體實驗結(jié)果均說明，Sal B和Pae兩者配比組合在心肌缺血再灌注損傷的保護作用方面與心肌血管的調(diào)節(jié)可能存在較為密切的聯(lián)系，且最佳配比（3∶1）與藥典記載的雙丹制劑所計算的組合配比也基本一致，其結(jié)果相互比較、相互印證，從而保證了實驗結(jié)論的可靠性。

整體性是中藥的基本屬性，其通過所包含的多組分、多成分發(fā)揮多途徑、多靶點的協(xié)同、有機整合藥效作用。因而，建立符合方藥自身特點、能夠客觀表征其整體療效的藥效評價體系，揭示其多組分、多靶點協(xié)同整合作用機制，是中藥現(xiàn)代基礎(chǔ)研究的重要組成部分。而在對藥對配伍效應(yīng)與機制研究過程中，同一實驗往往涉及多個檢測指標，對同一藥對的研究往往還涉及在體實驗和離體實驗等等，為了綜合評價藥對的整體藥效，往往需要將多個不同性質(zhì)、不同類別、不同水平、不同計量單位的指標轉(zhuǎn)化成一個無計量單位但能反映事物相對水平和整體變動的綜合指標，然后進行綜合比較、分析，優(yōu)選出整體效應(yīng)最佳的配比，該法即為多指標綜合指數(shù)法。目前在藥對的整體效應(yīng)評價中已有不少應(yīng)用。

依據(jù)多指標綜合指數(shù)法，首先分別對同一效應(yīng)的相關(guān)指標進行單一化處理即標化，當模型組相應(yīng)指標數(shù)值與正常組相比升高時，V標化=（V模型-V給藥）/V模型；當模型組相應(yīng)指標數(shù)值與正常組相比降低時，V標化=（V給藥-V模型）/V模型。標化后的指標權(quán)重采用專家評分法即同行專家依據(jù)模型中各指標在總效應(yīng)整體評價中的相對重要程度，獨立給出各指標的權(quán)重系數(shù)；然后與近10年來總效應(yīng)的相關(guān)文獻中對各個指標的檢測頻次統(tǒng)計相結(jié)合，綜合給出各個指標的權(quán)重系數(shù)?？傂?yīng)值即為各指標的標化值乘以權(quán)重系數(shù)后的加和值。本課題組[7]采用多指標綜合指數(shù)法評價了當歸-川芎藥對不同配伍比例（1∶0，1∶1，1.5∶1，0∶1）、不同提取方法（水提、醇提、先水提后醇提）樣品的活血化瘀作用。歸芎藥對所有樣品中，1∶1醇提物給藥組對血瘀大鼠的活血化瘀效果最好；提取方法相同的情況下，當歸-川芎配伍后的活血化瘀作用優(yōu)于當歸和川芎的單味藥，川芎對血瘀大鼠的活血化瘀作用在一定程度上優(yōu)于當歸；配比相同的情況下，醇提給藥組的活血化瘀作用優(yōu)于水提和先水提后醇提給藥組。該方法的特點是“先綜合，后對比”，是近年來在醫(yī)院管理、醫(yī)療質(zhì)量控制、藥理效應(yīng)比較等綜合評價中較為常用的分析方法。在藥理效應(yīng)中應(yīng)用此法，綜合指數(shù)越大，總效應(yīng)越強，從而準確地評價效應(yīng)的綜合水平。

3功效物質(zhì)與整合效應(yīng)關(guān)聯(lián)分析

中藥即使是單味藥就含有多種化學(xué)成分，更不用說藥對或方劑了，但只有其中一部分化學(xué)物質(zhì)對臨床療效有貢獻，這些有貢獻的成分才是要關(guān)注和挖掘的中藥有效物質(zhì)，其是否有效都必須與不同的效應(yīng)緊密關(guān)聯(lián)。尋找藥對有效物質(zhì)的方法通常都是通過分離分析藥對中所含成分（群）結(jié)合相應(yīng)的在體、離體實驗來實現(xiàn)的。如王平等[8]研究大黃-黃芩藥對水煎液和3個提取部位（氯仿部位、正丁醇部位、水溶性部位）的抗內(nèi)毒素活性發(fā)現(xiàn)，大黃-黃芩藥對的正丁醇部位在體內(nèi)外實驗中均顯示良好的抗內(nèi)毒素活性，其活性強于水溶性部位和氯仿部位。說明正丁醇部位為大黃-黃芩藥對抗內(nèi)毒素的有效部位。蔡寶祥等[9]采用正交設(shè)計考察丹參提取物（主要含丹參素、原兒茶醛等酚酸類物質(zhì)）、山楂丙酮提取物（主要含熊果酸等三萜類物質(zhì)）和山楂無水乙醇提取物（主要含金絲桃苷、蘆丁等黃酮類物質(zhì)）三者之間的交互作用。結(jié)果顯示，丹參提取物可降低TC，TG和LDL-C，升高HDL-C；山楂丙酮提取物可降低TC，TG和LDL-C；山楂無水乙醇提取物可明顯升高HDL-C；它們均是調(diào)脂的有效部位。其中，丹參提取物和山楂丙酮提取物可協(xié)同降低高脂血癥小鼠血清TC，LDL-C，丹參提取物和山楂無水乙醇提取物可協(xié)同升高高脂血癥小鼠血清HDL-C。表明各個部位之間存在著對調(diào)脂有益的交互作用。

通過分離分析與活性追蹤相結(jié)合是尋找有效物質(zhì)的主要方法。然而，孤立地考察各組分的生物活性雖然簡化了對象問題，但卻有可能忽略了組分配伍與藥效的相關(guān)性而導(dǎo)致活性物質(zhì)丟失的問題，很難全面說明組方成分對藥對整體活性發(fā)揮的具體貢獻。因此，需要發(fā)展一種適合于中醫(yī)藥整合調(diào)節(jié)配伍機制的有效組分發(fā)現(xiàn)的方法與策略。從20世紀80年代，基因敲除技術(shù)已成為現(xiàn)代生物學(xué)與醫(yī)學(xué)研究的重要工具，其基本原理是通過去除某一特定基因造成實驗動物整體功能的改變，從而辨析該基因?qū)ι矬w整體功能的貢獻。對于中藥有效組分的發(fā)現(xiàn)，也可以借鑒基因敲除方法的思想，即通過組分敲除、敲入判斷去除和加入某個組分對藥對整體藥效的影響，進而找出中藥的有效組分。俞凌燕[10]采用組分剔除法，以S180荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量作為活性評價指標，以此篩選人參配伍麥冬對腫瘤化療起增效作用的有效組分。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人參二醇型皂苷是參麥方對環(huán)磷酰胺化療S180荷瘤小鼠起作用的主要有效組分，而人參三醇型皂苷、麥冬多糖對全方配伍的貢獻不顯著，麥冬皂苷是無關(guān)組分。該實驗中參麥方的主要組分為人參二醇型皂苷、人參三醇型皂苷、麥冬多糖和麥冬皂苷。4種成分以原方比例配伍而成的即為全方配伍組，組分剔除組（標記為配伍Ⅰ～Ⅳ）分別為全方配伍組中依次缺失人參二醇型皂苷、人參三醇型皂苷、麥冬多糖和麥冬皂苷后的其他3種組分配伍而成。但此組分剔除法實則為組分配伍。與徐強等[11-13]采用的免疫親和色譜柱選擇性剔除四逆散中成分，證明甘草酸和芍藥苷是四逆散抗小鼠耳部炎癥的活性成分及朱敏等[14]采用制備液相色譜技術(shù)分別剔除四物湯方中的芍藥苷和洋川芎內(nèi)酯I，比較單體成分、方剔除單體成分和全方的抗血小板聚集和凝血活性，發(fā)現(xiàn)芍藥苷和洋川芎內(nèi)酯I在四物湯抗血小板聚集和抗凝血效應(yīng)上不僅直接發(fā)揮作用，也通過影響其他成分而間接發(fā)揮效應(yīng)的方法不同。后兩者的方法是從全方中直接剔除某成分，然后比較單體成分、全方剔除單體成分和全方的活性，通過活性比較來驗證被剔除成分對全方的貢獻。本實驗室以當歸-川芎藥對及其單味藥為對象，采用制備液相定向剔除目標化合物阿魏酸，結(jié)合抗氧化活性來評價阿魏酸在當歸、川芎及和當歸-川芎藥對中的作用。結(jié)果顯示阿魏酸在當歸、川芎與歸芎藥對的抗氧化活性方面都具有重要作用，其重要程度強弱依次為當歸>川芎>當歸-川芎藥對。目前有關(guān)藥對中的定向剔除還只涉及剔除藥對中的某一個成分后的比較，沒有涉及同時剔除2個成分或更多成分后的活性比較，進而評價多成分對全方的貢獻度以及和效應(yīng)之間的關(guān)系，這可能是今后研究的重點。

人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)具有大規(guī)模分布并行處理、非線性、自組織、自學(xué)習(xí)、聯(lián)想記憶等優(yōu)良特性，是一種非線性映射系統(tǒng)，不要求變量滿足正態(tài)性及獨立性等條件，是一種不同于常規(guī)統(tǒng)計方法的信息處理系統(tǒng)，它的這些特征非常符合方藥復(fù)雜作用體系的規(guī)律性探究。運用MATLAB軟件神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)工具箱，將研究對象制備所得到的各樣品總效應(yīng)分別與對應(yīng)樣品中各成分的含量測定結(jié)果進行擬合，即先選擇一個樣品，先進行效應(yīng)整合，然后將該樣品中成分的含量按照2%的比率進行變化，在各成分含量的左右分別得到2個值，然后依據(jù)這5個數(shù)值計算出該成分含量的變化率，再乘以該成分在此效應(yīng)中灌胃給藥的含量即得該成分對該效應(yīng)的貢獻率，其他樣品的效應(yīng)與各個成分含量的相關(guān)性同此法進行擬合分析，進而依據(jù)各擬合值分析各個成分對各效應(yīng)的影響大小。神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)處理后所得到的圖即為該樣品所對應(yīng)的效應(yīng)與效應(yīng)成分的關(guān)聯(lián)圖，其中顏色和數(shù)值表示各樣品中各成分分別對相應(yīng)效應(yīng)的影響程度，顏色越深數(shù)值越大，代表該成分的含量對效應(yīng)變化影響越大。本課題組[15]在基于多指標綜合指數(shù)法對歸芎藥對不同配比組方進行效應(yīng)整合的基礎(chǔ)上，采用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法將歸芎藥對中主要效應(yīng)物質(zhì)含量與其整合效應(yīng)值進行擬合與分析，以期揭示歸芎藥對中物質(zhì)與效應(yīng)的關(guān)聯(lián)性及其程度。通過擬合歸芎藥對7個配比（1∶0，2∶1，1.5∶1，1∶1，1∶1.5，1∶2，0∶1）和3種提取方法（水提液、50%醇提液、先水提后95%醇提液）所得樣品中主要物質(zhì)（綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、正丁烯基苯酞、總芳香酸、總苯酞內(nèi)酯）與養(yǎng)血補血、活血化瘀和調(diào)經(jīng)止痛整合效應(yīng)的關(guān)聯(lián)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)養(yǎng)血補血的效應(yīng)物質(zhì)主要為芳香酸，尤其是綠原酸和咖啡酸；芳香酸和苯酞內(nèi)酯都是活血效應(yīng)物質(zhì)，尤其是綠原酸、洋川芎內(nèi)酯I和H對活血效應(yīng)影響較大；調(diào)經(jīng)止痛的效應(yīng)物質(zhì)也為芳香酸和苯酞內(nèi)酯，尤其是藁本內(nèi)酯、咖啡酸、阿魏酸和洋川芎內(nèi)酯I對調(diào)經(jīng)止痛效應(yīng)的影響較大。說明歸芎藥對中芳香酸和苯酞內(nèi)酯均對養(yǎng)血補血、活血化瘀和調(diào)經(jīng)止痛功效具有貢獻，芳香酸更偏重于養(yǎng)血活血，苯酞內(nèi)酯更偏重于調(diào)經(jīng)止痛。通過這些研究闡釋了當歸-川芎藥對不同功效的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)及不同成分對藥對整方功效的貢獻大小，為中醫(yī)方藥復(fù)雜效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了探索性思路與方法。

4響應(yīng)曲面法在藥對相互作用研究中的應(yīng)用

不同藥物單獨作用于人體，可產(chǎn)生不同的藥理效應(yīng)。當多種藥物組合應(yīng)用時，由于它們的相互作用，藥物的理化性質(zhì)、體內(nèi)過程（吸收、分布、生物轉(zhuǎn)化和排泄）或組織對該藥物的敏感性可能發(fā)生變化，從而改變了藥物的藥理和毒理效應(yīng)，可使藥效加強或副作用減輕，也可使藥效減弱或副作用增加。與多數(shù)化學(xué)藥物相比，中藥及方劑的多組分、多靶點特性決定了藥物相互作用及其機制更為復(fù)雜。因此，我國學(xué)者鄭青山等[16]提出了復(fù)方藥效學(xué)模型和組分相互作用模型，對中藥及方劑之間的相互作用開展了探索性研究。常用的藥物相互作用研究方法有定性的輻射分析法、分數(shù)分析法、概率分析法、平行線分析法和定量的響應(yīng)曲面分析法等。每一種模型都有自身的特點和應(yīng)用范圍，定性的分析方法只能定性的分析藥物之間的相互作用。藥物藥效學(xué)的研究對于指導(dǎo)臨床用藥具有非常重要的作用，只有定量才能更加直觀地體現(xiàn)藥物之間的相互作用。響應(yīng)曲面法是一種新穎而有效的研究藥物相互作用的方法，它不僅可以定性和定量地研究藥物間的藥效學(xué)相互作用規(guī)律，而且還可以尋找到效果滿意、不良反應(yīng)最小的藥物間的最佳閾值反應(yīng)范圍。如史旭芹等[17]采用響應(yīng)曲面設(shè)計與分析法，定量研究當歸-黃芪不同配比（0∶1，1∶5，2∶5，2∶3，1∶1，3∶2，5∶2，5∶1，1∶0）提取物養(yǎng)血補血功效的相互作用。結(jié)果顯示，當歸-黃芪配伍接近一半?yún)^(qū)域呈現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)，在所測試的比例范圍（1∶5～5∶1）均有協(xié)同效應(yīng)表現(xiàn)，總體表現(xiàn)為高劑量組的協(xié)同作用強于低劑量組，尤其是當歸劑量在10～40 g、黃芪劑量在90～180 g以及當歸劑量在50～100 g、黃芪劑量在20～100 g表現(xiàn)出很強的協(xié)同效應(yīng)（相互作用值-1）。在藥典規(guī)定劑量范圍也均呈現(xiàn)出協(xié)同作用，其中當歸補血湯亦在這個范圍內(nèi)。通過建立數(shù)學(xué)模型來預(yù)測兩藥味之間的最佳配伍組合，可為藥對配伍相互作用研究提供新的思路與方法。

5系統(tǒng)生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的應(yīng)用

系統(tǒng)生物學(xué)是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的一門新興學(xué)科。它采用系統(tǒng)的方法，將研究對象看作一個整體，通過基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)等各種高通量的組學(xué)平臺全方位地獲取海量的數(shù)據(jù)信息，并利用生物信息學(xué)及各種數(shù)學(xué)方法對數(shù)據(jù)分析處理，從而尋找規(guī)律，揭示自然界生物體所蘊涵的奧秘。這與中醫(yī)學(xué)從整體的角度去看待個體和認識、診治疾病的理論殊途同歸。因此，在目前中醫(yī)藥的研究中，系統(tǒng)生物學(xué)研究的各種方法也在得到越來越多的重視和運用[18-24]。隨著系統(tǒng)生物學(xué)及多向藥理學(xué)的方法相互融合，形成了新藥發(fā)現(xiàn)、藥物靶標預(yù)測及藥理、毒理機制研究的新學(xué)科，即網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)。它從生物網(wǎng)絡(luò)的角度系統(tǒng)地揭示藥物和機體相互作用的規(guī)律和原理，是集整體、動態(tài)、分析于一體的全面系統(tǒng)的研究技術(shù)，與中醫(yī)整體觀與辨證論治的原則不謀而合。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為解析中藥復(fù)雜體系、闡述中醫(yī)藥理論的科學(xué)內(nèi)涵提供了新的思路和方法[25]。近年來，這個理念已被應(yīng)用于篩選具有協(xié)同作用的中藥組合、基于網(wǎng)絡(luò)的中醫(yī)藥藥理研究、中藥配伍規(guī)律揭示、藥物靶標或作用通路預(yù)測等等[26-29]。

隨著網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的發(fā)展，它逐步與更多其他方法聯(lián)合使用來解決更中醫(yī)藥復(fù)雜科學(xué)問題，如Pei L X等[30]將網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和藥代動力學(xué)聯(lián)合使用來研究中藥方劑復(fù)雜的物質(zhì)基礎(chǔ)，以補腎壯骨方為代表，首先明確該方劑的主要活性成分，然后通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法尋找到了和這些成分相關(guān)的基因。以此為引子，可以嘗試將系統(tǒng)生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)聯(lián)合使用來闡明藥對的作用機制，以期為藥對功效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制的研究提供新的策略與方法。

6基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用相結(jié)合

藥對配伍的研究自20世紀以來取得了不少突破性成果，成為了中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中的活躍領(lǐng)域之一，也是闡明方劑配伍機制的重要基礎(chǔ)。展望21世紀藥對的配伍研究，需更多著眼于結(jié)合藥對的功效物質(zhì)和配伍效應(yīng)與機制研究來全面探討兩藥味配伍后在人體內(nèi)發(fā)揮藥效的基礎(chǔ)條件、作用部位、作用物質(zhì)、如何作用、以及由此而可能引起的繼發(fā)效應(yīng)等，在基礎(chǔ)理論方面解答和認識藥對在人體生理、病理條件下通過什么途徑、如何起藥效作用，進而對藥對在方劑中的加減變化、使用指征、運用范圍乃至注意事項等作出科學(xué)的闡釋。使藥對的實驗研究結(jié)果成為闡明方劑配伍理論、指導(dǎo)藥對及其在方劑中臨床運用的科學(xué)依據(jù)，成為藥對和方劑乃至中醫(yī)藥理論的有機組成部分，成為促進藥對和方劑學(xué)科現(xiàn)代化的內(nèi)在動力[31]。隨著社會的發(fā)展，藥對配伍的研究還必須密切聯(lián)系臨床實際與新藥的研制開發(fā)。如芎芍膠囊是在傳統(tǒng)活血化瘀名方血府逐瘀湯的研究基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代藥理研究，采用其主要組成藥對川芎-赤芍的有效部位川芎總酚、赤芍總苷組成的II類中藥新藥復(fù)方制劑。川芎辛溫?zé)o毒，消瘀血，養(yǎng)新血，為血中氣藥，具有活血化瘀、通陽散結(jié)等功能?，F(xiàn)代研究表明，川芎總酚具有擴張冠狀動脈，改善心肌供血，抑制血栓素A2的生成與活性及抑制血管平滑肌細胞收縮等功能[32]。赤芍苦平無毒，疏通血脈，助川芎行血中氣滯，其赤芍總苷具有擴張血管，增加冠脈血流量及心肌營養(yǎng)性血流，保護缺血心肌，抑制血小板聚集及血栓形成等作用。兩藥合用，理氣活血、化瘀通脈。實驗研究發(fā)現(xiàn)，芎芍膠囊具有促進心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生、提高心肌梗死細胞VEGF，F(xiàn)GF，EGF蛋白的表達，具有保護心肌缺血性損傷的作用[33]。而臨床觀察研究發(fā)現(xiàn)，30例冠心病心絞痛經(jīng)芎芍膠囊治療4周后，顯效、有效、無效例數(shù)分別為16，11，3例，總有效率90.0%；且與服用西藥消心痛組比較有顯著性差異，芎芍膠囊組心絞痛的臨床療效明顯優(yōu)于西藥對照組。同時通過指標的觀察分析，發(fā)現(xiàn)芎芍膠囊可能是通過降低TC及LDL-C，降低紅細胞聚集指數(shù)及全血黏度，抑制血小板的黏附與聚集，擴張冠狀動脈，抑制血管平滑肌細胞增殖等多種途徑，而達到治療冠心病心絞痛的目的[34]。此外，在4周的療程中芎芍膠囊可以調(diào)控NO/ET的平衡，改善冠心病患者血管內(nèi)皮依賴性的舒張功能，未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)[35]。實驗研究和臨床研究有機的結(jié)合了起來，相互佐證，為臨床提供更為有效的藥物。有研究通過建立胃寒證和胃熱證胃黏膜損傷模型，從“方證對應(yīng)”角度比較左金丸和反左金的作用差異。損傷指數(shù)比較和病理檢測的結(jié)果都表明，左金丸藥性偏寒，能顯著防治胃熱型胃黏膜損傷，但用于胃寒型胃黏膜損傷則相對較差（左金丸表現(xiàn)出的較強抗胃損傷作用可能與黃連的藥理作用有關(guān)，研究表明黃連具有較強的抗?jié)冏饔茫?。而反左金性偏溫?zé)幔渌幮Х磻?yīng)與左金丸相反，只能防治胃寒型胃黏膜損傷。提示兩方的寒熱屬性隨配伍用量不同而發(fā)生變化，其對應(yīng)的證候也隨之發(fā)生改變。這種方證相應(yīng)的實驗研究，因證而論效，結(jié)果與左金丸、反左金的臨床證治規(guī)律相符，驗證了“寒者熱之，熱者寒之”和“有是證用是方”的中醫(yī)理論，同時也為中醫(yī)治療的辨證施治宗旨提供了科學(xué)依據(jù)[36]。

藥對的臨床研究多是個人經(jīng)驗總結(jié)，或是文獻研究總結(jié)，所以臨床研究應(yīng)尋找更多的相關(guān)現(xiàn)代研究為其提供實驗依據(jù)，從而進一步豐富理論來源。藥對功效物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍效應(yīng)與機制研究的最終目的都是服務(wù)于中醫(yī)臨床。但是，動物實驗并不能代替人體觀察，實驗研究結(jié)果最終要由臨床來驗證和進一步提供指引。藥效學(xué)試驗與臨床研究是新藥有效性評價不可分割的2個重要組成部分，前者是后者的基礎(chǔ)，后者是前者的繼續(xù)與最后判定，兩者相輔相成，綜合判斷，才能對新藥的有效性和安全性作出科學(xué)、準確、全面的評價。只有弄清藥對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，科學(xué)地闡明了藥對配伍規(guī)律，研究并開發(fā)出藥效明確與穩(wěn)定，臨床與藥效學(xué)試驗一致的新藥，才是進行藥對現(xiàn)代化研究的重要目標。

近年來，藥對的研究正逐漸深入，在理論總結(jié)、功效物質(zhì)分析、配伍效應(yīng)評價與作用機制研究、臨床應(yīng)用與產(chǎn)品開發(fā)等方面已取得了顯著成果。國家自然科學(xué)基金委員會2011年專門設(shè)置藥對研究重點項目，并且每年國家自然基金面上與青年項目有關(guān)藥對的研究資助項目逐年增加，說明藥對作為中醫(yī)藥發(fā)展的一個重要研究方向，逐漸被我國政府和廣大學(xué)者所認識并得到重視。筆者相信，基于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)知識與方法策略，現(xiàn)代中醫(yī)藥人對藥對的進一步系統(tǒng)與深入研究，必將有力地促進方劑配伍實質(zhì)這層神秘面紗的最終揭開，并加快提高現(xiàn)代中藥新藥創(chuàng)制的層次與水平。

[參考文獻]

[1]姜建萍.比較法在中醫(yī)藥教育和科研中的應(yīng)用[J]. 廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1999，16（3）：30.

[2]王雁梅，康紅鈺，劉春杰，等.高效液相色譜法測定當歸-川芎藥對配伍復(fù)方中阿魏酸的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志， 2010，16（7）：61.

[3]張朔，張廣財，焉巧娜，等.黃連、吳茱萸不同配比對大鼠胃酸分泌及胃潰瘍的影響[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009， 26（7）：535.

[4]于洋.二妙散配伍的實驗研究[D].哈爾濱： 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2004.

[5]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991.

[6]靳康.雙丹組分丹酚酸B與丹皮酚對心肌缺血再灌注損傷大鼠的機制研究[D].合肥： 安徽大學(xué)，2011.

[7]李偉霞，唐于平，郭建明，等.歸芎配伍對急性血瘀大鼠血液流變學(xué)及凝血功能的比較評價[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2012，32（6）： 806.

[8]王平，熊玉霞，孟憲麗，等.大黃-黃芩藥對抗內(nèi)毒素有效部位的篩選[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2006，29（3）：56.

[9]蔡寶祥，謝梅林，顧振綸.正交設(shè)計分析丹參和山楂不同提取物對血脂影響的交互作用[J].中草藥，2004，35（2）：192.

[10]俞凌燕.參麥方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D]. 杭州： 浙江大學(xué)，2010.

[11]Zhang L， Sun Y， Chen T， et al. Selective depletion of glycyrrhizin from Si-Ni-San， a traditional Chinese prescription， blocks its effect on contact sensitivity in mice and recovers adhesion and metalloproteinase production of T lymphocytes [J]. Int Immunopharmacol，2005，5（7/8）：1193.

[12]Sun Y， Dong Y， Jiang H J， et al. Dissection of the role of paeoniflorin in the traditional Chinese medicinal formula Si-Ni-San against contact dermatitis in mice[J]. Life Sci，2009，84 （11/12）：337.

[13]陳亮，陳婷，徐強. 免疫親和色譜特異性剔除中藥方劑四逆散中的柚皮苷[J]. 色譜，2006，24（3）：243.

[14]Zhu M， Tang Y P， Duan J A， et al. Roles of paeoniflorin and senkyunolide I in SiWu decoction on antiplatelet and anticoagulation activities [J]. J Sep Sci， 2010，33（21）：3335.

[15]李偉霞，唐于平，尚爾鑫，等.基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的歸芎藥對整體功效與化學(xué)物質(zhì)關(guān)聯(lián)性分析[J].中國中藥雜志，2012，37（19）： 2935.

[16]鄭青山，何迎春，楊娟，等. 藥物相互作用分析與復(fù)方藥效模擬：一個方法學(xué)研究[J].中國藥理學(xué)通報，2007，23（8）：1106.

[17]史旭芹，尚爾鑫，唐于平，等. 基于響應(yīng)曲面分析法對當歸-黃芪配伍養(yǎng)血補血功效相互作用研究[J].藥學(xué)學(xué)報，2010，47（10）：1375.

[18]李青雅，蘇式兵.系統(tǒng)生物學(xué)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[J]. 世界科學(xué)技術(shù)――中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008，10（4）：1.

[19]Song Y N， Zhang G B， Zhang Y Y， et al. Clinical applications of omics technologies on ZHENG differentiation research in traditional Chinese medicine [J]. Evid Based Complement Alternat Med， 2013， doi： 10.1155/2013/989618.

[20]Wang P， Chen Z. Traditional Chinese medicine ZHENG and OMICS convergence： a systems approach to post-genomics medicine in a global world [J]. Omics， 2013，17（9）：451.

[21]Wang Y， Liu L， Hu C C， Cheng Y Y， et al. Effects of Salviae mitiorrhizae and Cortex moutan extract on the rat heart after myocardial infarction： a proteomic study [J]. Biochem Pharmcol，2007，74（3）：415.

[22]Nicholson J K， Lindon J C. Systems biology： metabonomics[J]. Nature，2008，455（7216）：1054.

[23]Wang X J， Zhang A H， Han Y， et al. Urine metabolomics analysis for biomarker discovery and detection of jaundice syndrome in patients with liver disease [J]. Mol Cell Proteomics，2012，11（8）：370.

[24]Wang X J， Yang B， Sun H， et al. Pattern recognition approaches and computational systems tools for ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry-based comprehensive metabolomic profiling and pathways analysis of biological data sets [J]. Anal Chem，2012，84（1）：428.

[25]徐桃枝. 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，9（5）：74.

[26]Tao W Y， Xu X， Wang X， et al. Network pharmacology-based prediction of the active ingredients and potential targets of Chinese herbal Radix Curcumae formula for application to cardiovascular disease [J]. J Ethnopharmacol， 2013，145（1）：1.

[27]Li J， Lu C， Jiang M， et al. Traditional Chinese medicine-based network pharmacology could lead to new multicompound drug discovery [J]. Evid Based Complement Alternat Med， 2012， doi： 10.1155/2012/149762.

[28]Li S， Zhang B， Zhang N B. Network target for screening synergistic drug combinations with application to traditional Chinese medicine [J]. BMC Syst Biol， 2011，5（Suppl 1）： S10.

[29]Zhang B， Wang X， Li S. An integrative platform of TCM network pharmacology and its application on a herbal formula， Qing-Luo-Yin [J].Evid Based Complement Alternat Med， 2013， doi： 10.1155/2013/456747.

[30]Pei L X， Bao Y W， Liu S， et al. Material basis of Chinese herbal formulas explored by combining pharmacokinetics with network pharmacology [J]. Plos ONE， 2013，8（2）：e57414

[31]唐于平， 段金廒， 丁安偉， 等. 中醫(yī)方劑物質(zhì)基礎(chǔ)現(xiàn)代研究的策略[J]. 世界科學(xué)技術(shù)――中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2007，9（5）：20.

[32]陳可冀，張之南，梁子鈞，等.血瘀證與活血化瘀研究[M]. 上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990： 514.

[33]嚴萍，林久茂，陳宇寧，等. 芎芍膠囊對心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生作用[C].無錫：中華中醫(yī)藥學(xué)會心病分會第十二次學(xué)術(shù)年會， 2010.

[34]徐鳳芹，陳可遠，馬曉昌，等.芎芍膠囊治療冠心病心絞痛的臨床觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2003，23（1）：16.