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分析方法的驗(yàn)證，就是對(duì)藥品分析實(shí)驗(yàn)所采用的分析方法是否完全達(dá)到了預(yù)期目的，或證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。

分析方法的驗(yàn)證以驗(yàn)證參數(shù)表示。在制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可通過(guò)這些參數(shù)證明所建立的分析方法是否適當(dāng)。本文所述分析方法驗(yàn)證是指下述情況：藥局方新收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立；藥局方已收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂；根據(jù)藥局方的通則建立替代方法。

1日本藥局方收載分析方法所需資料

1.1概要對(duì)分析方法作簡(jiǎn)要說(shuō)明，包括所采用分析方法的必要性，特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)及有關(guān)驗(yàn)證的要點(diǎn)。如系分析方法的修訂，則需闡明新方法與原方法的區(qū)別以及新方法的優(yōu)勢(shì)。

1.2分析方法本項(xiàng)記載的有關(guān)分析方法的內(nèi)容要足以能對(duì)分析方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，并且必要時(shí)可用復(fù)核試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。分析方法主要記載內(nèi)容包括：分析的步驟、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的制備方法、試劑與試藥的調(diào)配、注意事項(xiàng)、分析系統(tǒng)是否正常運(yùn)轉(zhuǎn)的檢驗(yàn)證明方法(例如高效液相色譜法中的分離效率的研究)、分析結(jié)果的計(jì)算公式、測(cè)定次數(shù)等。并且，如果使用了藥局方以外的裝置，還需詳述有關(guān)內(nèi)容；如果使用了新的標(biāo)準(zhǔn)品，則必須提供其物理、化學(xué)及生物學(xué)特征數(shù)據(jù)，并提供其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3有關(guān)分析方法驗(yàn)證的資料本項(xiàng)應(yīng)包括求導(dǎo)各驗(yàn)證參數(shù)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、計(jì)算結(jié)果及檢定結(jié)果等。

2驗(yàn)證參數(shù)(validationcharacterisitics)

分析方法適當(dāng)與否可通過(guò)驗(yàn)證參數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，下面列舉了最典型的分析方法驗(yàn)證參數(shù)的定義及其評(píng)價(jià)方法。

驗(yàn)證參數(shù)的有關(guān)術(shù)語(yǔ)及定義因分析方法的應(yīng)用領(lǐng)域不同而不同，本文所使用的術(shù)語(yǔ)及定義僅限于日本藥局方。評(píng)價(jià)方法項(xiàng)下所述內(nèi)容也僅為簡(jiǎn)要概述。確定驗(yàn)證參數(shù)的方法很多，采用何種方法沒(méi)有具體限制。但是，驗(yàn)證參數(shù)的限值常因確定方法的不同而發(fā)生變化。故此，確定驗(yàn)證參數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、計(jì)算方法等應(yīng)盡可能詳細(xì)地記述。

本文分析方法驗(yàn)證中未包括驗(yàn)證參數(shù)適應(yīng)性/牢固性(Robustness)的討論，這是由于牢固性的研究主要在分析方法的開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)階段進(jìn)行，其研究結(jié)果可以在方法的分析條件或注意事項(xiàng)中得到體現(xiàn)。

2.1真度/準(zhǔn)確度(Accuracy/Trueness)

2.1.1定義：所謂準(zhǔn)確度，指分析方法所得測(cè)定值的偏離程度，通常以測(cè)定值的總平均值與真值之間的差來(lái)表示。

2.1.2評(píng)價(jià)方法：準(zhǔn)確度一般以測(cè)定室內(nèi)重現(xiàn)精度或室間再現(xiàn)精度時(shí)所得總平均值與真值的差表示。真值一般使用理論值(如滴定法)，如果理論值不存在或即使存在但很難求出的情況下，可采用經(jīng)過(guò)確證或認(rèn)可的數(shù)值來(lái)代替(如制劑分析常以原料藥的測(cè)定值作為真值)。分析方法的專屬性強(qiáng)，可以推斷其分析方法的誤差就小。由推出的真值與室內(nèi)(室間)再現(xiàn)精度的標(biāo)準(zhǔn)偏差即可計(jì)算出真值的95%置信區(qū)間，并可判斷這個(gè)區(qū)間是否包括0點(diǎn)，或區(qū)間的上下限值是否在分析方法所要求的精度范圍之內(nèi)。

2.2精密度(Precision)

2.2.1定義：精密度是指從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測(cè)定時(shí)，所得到的一系列測(cè)定數(shù)據(jù)彼此之間的一致程度。測(cè)定值的誤差以偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示。精度根據(jù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的條件不同以三個(gè)水平表示，分別稱為：并行精度、室內(nèi)再現(xiàn)精度、室間再現(xiàn)精度。

并行精度(Repeatability/Intra-assayprecision)：指實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、裝置、器具以及試藥的批號(hào)等實(shí)驗(yàn)條件均未改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行重復(fù)分析測(cè)定時(shí)(并行條件)的精度。

室內(nèi)再現(xiàn)精度(Intermediateprecision)：指同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、裝置、器具以及試藥的批號(hào)等實(shí)驗(yàn)條件一部分或全部改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測(cè)定時(shí)(室內(nèi)再現(xiàn)條件)的精度。

室間再現(xiàn)精度(Reproducibility)：指在不同實(shí)驗(yàn)室間，從均勻樣品中抽取的多個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測(cè)定時(shí)(室間再現(xiàn)條件)的精度。

2.2.2評(píng)價(jià)方法：首先，要保證精度研究所用樣品的數(shù)量和均勻性。溶液應(yīng)為均勻性樣品，在得不到均勻性樣品時(shí)，通常將大量制劑粉碎混合至認(rèn)為均勻或制劑的各組分混合至認(rèn)為均勻的樣品作為均勻性樣品使用。如果同時(shí)做兩個(gè)水平以上的精度評(píng)價(jià)時(shí)，可以采用諸如單因素方差分析等實(shí)驗(yàn)方法，但為了正確得出分析方法的精度，必須有足夠的實(shí)驗(yàn)次數(shù)、分析條件的水平數(shù)及實(shí)驗(yàn)室數(shù)。并且要對(duì)可預(yù)想到的致使分析發(fā)生變化的要因進(jìn)行研究。各水平的精度以偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、偏差的90%置信區(qū)間以及與其相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的區(qū)間來(lái)表示。將其與分析方法所要求精度的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行對(duì)照，以確定分析方法是否可行。通常是以室內(nèi)(間)的再現(xiàn)精度作為方法取舍的依據(jù)。

2.3專屬性/特異性(Specificity)

2.3.1定義：專屬性指分析樣品中有共存物質(zhì)的情況下，對(duì)被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行正確測(cè)定的能力，即表示分析方法的識(shí)別能力。如果分析方法的專屬性有個(gè)別缺陷，可以用其他方法加以補(bǔ)充。

2.3.2評(píng)價(jià)方法：確證分析方法是否達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康模_實(shí)能夠?qū)Ρ粶y(cè)物質(zhì)進(jìn)行鑒別或定量。例如，分析方法的專屬性可以通過(guò)比較A為僅含被測(cè)物質(zhì)樣品(陽(yáng)性對(duì)照)；B為含有制劑的其他各組成成分及不純物或分解產(chǎn)物中添加被測(cè)物質(zhì)的樣品；C為不含被測(cè)物質(zhì)，僅含制劑的其他組分、不純物及分解產(chǎn)物的樣品(陰性對(duì)照)，根據(jù)A、B、C三種樣品的分析結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。如果不純物不易得到時(shí)，可以用含有不純物的樣品(如經(jīng)時(shí)發(fā)生變化的樣品)替代。

2.4檢出限界(DetectionLimit)

2.4.1定義：檢出限界是指樣品中所含的被測(cè)物質(zhì)可被檢出的最低量或濃度。在檢出限界內(nèi)并不意味著一定就能夠進(jìn)行定量。

2.4.2評(píng)價(jià)方法：通常以消費(fèi)者危險(xiǎn)率及生產(chǎn)者危險(xiǎn)率在5%以下來(lái)規(guī)定檢出限界。檢出限界可以通過(guò)空白樣品或檢出限界附近的樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及檢出限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)檢出限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出檢出限界。

DL=3.3σ/slope

DL：檢出限界

σ：空白樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：檢出限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時(shí)，測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的檢出限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。

2.5定量限界(QuantitationLimit)

2.5.1定義：定量限界是指樣品中所含的被測(cè)物質(zhì)可被進(jìn)行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測(cè)定值的精度，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，一般為10%。

2.5.2評(píng)價(jià)方法：通常定量限界可以通過(guò)空白樣品或被測(cè)物定量限界附近的樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：定量限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時(shí)，測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。

2.6線性關(guān)系

2.6.1定義：線性關(guān)系是指分析方法能夠得到與被測(cè)物質(zhì)的量或濃度具有直線關(guān)系的測(cè)定值的能力，必要時(shí)，被測(cè)物質(zhì)的量或濃度的測(cè)定值也可以是從數(shù)學(xué)公式中得到的變換值。

2.6.2評(píng)價(jià)方法：準(zhǔn)備一系列不同濃度(量)的被測(cè)樣品，按照分析方法的操作步驟進(jìn)行測(cè)定，用測(cè)定值得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)對(duì)線性關(guān)系進(jìn)行評(píng)價(jià)。必要時(shí)，將測(cè)定值由回歸方程算出的殘差對(duì)被測(cè)物質(zhì)的量(濃度)作圖，不應(yīng)具有某種特定的趨勢(shì)。通常，采用5個(gè)不同量(濃度)的樣品作線性關(guān)系的研究。

2.7范圍(Range)

2.7.1定義：分析方法驗(yàn)證中所述范圍是指具有一定精度和準(zhǔn)確度的被測(cè)物質(zhì)上限及下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。對(duì)于上述具有線性關(guān)系的分析方法則指：具有一定精度和準(zhǔn)確度，并且使線性關(guān)系成立的被測(cè)物質(zhì)上下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。

2.7.2評(píng)價(jià)方法：分析方法驗(yàn)證的范圍一般為標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值的±20%左右，對(duì)范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進(jìn)行精度、真度及線性的研究討論。

3試驗(yàn)分析方法的分類

根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，試?yàn)方法主要可以分為以下3種類型，各類型分析試驗(yàn)方法的驗(yàn)證所要求的驗(yàn)證參數(shù)見(jiàn)表1。應(yīng)該指出，這僅是一個(gè)原則，評(píng)價(jià)分析方法所必需的驗(yàn)證參數(shù)將隨分析方法的特點(diǎn)及試驗(yàn)?zāi)康亩淖儭?/p>

表1試驗(yàn)類型與所要求的驗(yàn)證參數(shù)驗(yàn)證參數(shù)類型Ⅰ類型Ⅱ類型Ⅲ定量試驗(yàn)限度試驗(yàn)準(zhǔn)確度-+-+精密度并行精度-+-+室內(nèi)再現(xiàn)精度--*--*室間再現(xiàn)精度-+*-+*專屬性++++檢出限界--+-定量限界-+--直線性-+-+范圍-+-+注：-：一般不需要；+：需要；*：視情況而定。室內(nèi)或室間再現(xiàn)精度選擇其一進(jìn)行評(píng)價(jià)，日本藥局方通常選擇后者進(jìn)行評(píng)價(jià)。類型Ⅰ需做鑒別試驗(yàn)，即對(duì)藥品中的主要成分及其特征進(jìn)行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗(yàn)，即對(duì)藥品中的雜質(zhì)或不純物的量進(jìn)行測(cè)定。類型Ⅲ需做含量測(cè)定和溶出度試驗(yàn)，即對(duì)藥品中的成分進(jìn)行測(cè)定(成分包括穩(wěn)定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗(yàn)。4分析方法驗(yàn)證用語(yǔ)4.1適應(yīng)性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內(nèi)變化時(shí)，測(cè)定值不受影響的能力。例如，反應(yīng)的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)改變時(shí)，對(duì)測(cè)定值的穩(wěn)定性進(jìn)行研究討論。測(cè)定值對(duì)于分析條件不穩(wěn)定時(shí)，應(yīng)對(duì)方法加以改進(jìn)。適應(yīng)性的研究結(jié)果在分析方法中以表示分析條件的有效數(shù)字或注意事項(xiàng)的形式得以體現(xiàn)。

4.2實(shí)驗(yàn)室指試驗(yàn)進(jìn)行的場(chǎng)所、設(shè)施。分析方法驗(yàn)證中所述改變實(shí)驗(yàn)室是指試驗(yàn)者、裝置以及試藥的批號(hào)等試驗(yàn)條件發(fā)生變化。

4.3試驗(yàn)法指藥局方中的試驗(yàn)方法，例如鑒別試驗(yàn)、檢查試驗(yàn)等。試驗(yàn)方法應(yīng)包括樣品的制備、規(guī)定值、分析方法等。

4.4生產(chǎn)者危險(xiǎn)率指合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為不合格制品的發(fā)生概率。一般以α表示，也叫第一過(guò)失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說(shuō)的假陽(yáng)性率。

4.5消費(fèi)者危險(xiǎn)率指不合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為合格制品的發(fā)生概率。一般以β表示，也叫第二過(guò)失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說(shuō)的假陰性率。

4.6測(cè)定次數(shù)指分析方法操作程序中規(guī)定的次數(shù)，為了提高分析方法的精度，有些試驗(yàn)明確規(guī)定試驗(yàn)次數(shù)在2次以上，分析方法驗(yàn)證是對(duì)包括分析方法所規(guī)定的測(cè)定次數(shù)在內(nèi)的分析方法的評(píng)價(jià)。它與為了提高分析方法的精度進(jìn)行重復(fù)分析時(shí)的重復(fù)次數(shù)不同。

4.7測(cè)定值一次分析所得到的一個(gè)數(shù)值。本文譯自第13版日本藥局方附錄參考資料3所載內(nèi)容。