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本文作者：徐彩華吳晨陳亦江作者單位：南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院胸心外科

非小細胞肺癌組織中wt1mRNA的表達水平明顯高于癌旁組織

實時熒光定量PCR檢測結果顯示，在79例非小細胞肺癌組織中，WT1mRNA的相對表達量（4.5×10－3）是相應癌旁組織相對表達量（1.7×10－3）的2.6倍，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，圖1）。

成功構建重組質粒pLV-GFP-WT1

構建的重組質粒pLV-GFP-WT1經(jīng)PCR和0.8%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，獲得片段大小正確（1500bp）的克?。▓D2）。挑選PCR鑒定正確的克隆進行測序，測序結果證明與GenBank數(shù)據(jù)庫中WT1（NM_024426.4）比對正確，表明重組質粒pLV-GFP-WT1構建成功。

蛋白質印跡法檢測重組質粒pLV-GFP-WT1轉染后H1299細胞中WT1蛋白的表達

蛋白質印跡法檢測結果顯示，重組質粒pLV-GFP-WT1轉染后24、36、48和60h，pLV-GFP-WT1轉染組細胞中WT1蛋白表達水平明顯高于對照組和Lipo組（圖3），說明高表達WT1的肺癌H1299細胞構建成功。

WT1促進非小細胞肺癌H1299細胞的增殖

CCK-8檢測結果顯示，WT1過表達組在質粒轉染后24、36和48h時的D值高于對照組（P＜0.05），對照組和Lipo組細胞在每個時間點的D值之間無明顯差異（P＞0.05）。從質粒轉染后24h開始，WT1過表達組細胞的細胞增殖率開始增加（17.6%）；質粒轉染后36h，WT1過表達組細胞的細胞增殖率達到最高（28.3%）；質粒轉染后48h，WT1過表達組細胞的細胞增殖率有所下降（21.1%）；質粒轉染后60h，WT1過表達組細胞的增殖率（7.9%）進一步下降（表1）。

本研究發(fā)現(xiàn)，WT1在非小細胞肺癌組織中的表達量顯著高于相應癌旁組織，其高表達能顯著促進非小細胞肺癌的增殖，并在非小細胞肺癌中扮演癌基因的角色。

WT1基因定位于染色體11p13q上，是一個非常重要并有多種功能的基因[11,12]。它首先作為腫瘤的抑癌基因被發(fā)現(xiàn)，也是最為人熟知的抑癌基因之一。但很多證據(jù)證明，它在某些腫瘤中作為癌基因存在[13-15]。比如：WT1在白血病、乳腺癌和惡性間皮瘤等中高表達[14,16-18]。同時，Vicent等[9]發(fā)現(xiàn)，無論是在人肺癌細胞還是小鼠肺癌細胞中，WT1的缺失降低了細胞的增殖，但對細胞凋亡的影響非常小，他們認為WT1的缺失和WT1高表達可能帶來的是截然不同的結果。

本研究收集了79例非小細胞肺癌及其相應癌旁組織標本，并對其進行了實時熒光定量PCR檢測，結果發(fā)現(xiàn)WT1mRNA在非小細胞肺癌組織中的表達水平明顯高于相應的癌旁組織（P＜0.01），說明非小細胞肺癌的發(fā)生與WT1基因有著密切的關系，WT1基因高表達可能會促進肺癌組織的生長，與肺癌的發(fā)生、發(fā)展有關。這對肺癌患者的預后是不利的。

本研究將重組質粒pLV-GFP-WT1轉染至非小細胞肺癌H1299細胞中，對轉染后的細胞增殖情況進行檢測，結果發(fā)現(xiàn)轉染重組質粒pLV-GFP-WT1后24、36和48h的H1299細胞，其增殖率高于對照組，36h時細胞增殖率最高達28.3%，36h后細胞增殖率逐漸下降。筆者推測，這種現(xiàn)象可能是由于脂質體瞬時轉染的方法并沒有把目的基因融合到宿主基因組中，轉染剛開始WT1基因在細胞中的表達量逐漸增加，對細胞增殖的作用也相應增加，在轉染后36h達到頂峰；但隨著細胞分裂，WT1基因在細胞內逐漸丟失，細胞內表達量下降，導致細胞增殖率下降。

本研究通過臨床標本檢測和體外細胞實驗發(fā)現(xiàn)，WT1基因在非小細胞肺癌中表達水平較高，對非小細胞肺癌H1299細胞的生長起促進作用，WT1基因在非小細胞肺癌中扮演著癌基因的角色。本研究小組后續(xù)將進一步研究WT1基因對非小細胞肺癌是否存在抗凋亡作用以及WT1基因在裸鼠體內的成瘤情況。相信在不遠的將來，也許WT1基因將會像上皮生長因子一樣，成為非小細胞肺癌診斷和治療的一個新靶點。