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【摘要】目的探索黃芪提取影響因素的主要范圍。方法采用紫外分光光度法測(cè)定黃芪皂苷、多糖含量，比較不同乙醇濃度、溫度對(duì)水提和醇提黃芪的影響。結(jié)果60%～80%乙醇濃度范圍是醇提工藝優(yōu)化的主要考查范圍；60～100℃溫度范圍是水提、醇提工藝優(yōu)化的主要考查范圍。結(jié)論該研究結(jié)果可以為不同需要的提取工藝設(shè)計(jì)提供參考。

【關(guān)鍵詞】黃芪提取方乙醇濃溫度

Effectingfactorsofextractingastragalusroot

CAOYu-chao,SHAOChang-jiang,HEDian,etal.LanzhouTaibaoPharmaceuticalCo.Ltd,Lanzhou730050,China

【Abstract】ObjectiveToexplorethemaineffectingfactorsofextractingastragalusroot.MethodsThedifferentextractionsofastragalusrootunderdifferentconcentrationsofethanolandtemperatureswerecompared.ThecontentsoftotalastragalosideIVandpolysaccharideweredetectedbyUV.Results60%to80%ofethanoland60to100℃oftemperaturewasthemaineffectingfactorsofextractingastragalusroot.ConclusionThedifferentextractionmethodshouldselectthedifferentrangeofethanolconcentrationandtemperatureoptimizingextractionprocess.

【Keywords】Astragalusroot;extractionmethod;concentrationofethanol;temperature

黃芪（Radixastragali）為豆科植物蒙古黃芪［Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao］和膜莢黃芪（Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.）的干燥根。味甘,性微溫,具補(bǔ)氣升陽(yáng),益衛(wèi)固表、托瘡生肌等功效。其化學(xué)成分有多糖、皂苷、黃酮等?，F(xiàn)代藥理研究證明，黃芪多糖和黃芪皂苷為其中的主要成分,其中皂苷以黃芪甲苷為主，有著廣泛的藥理作用［1，2］。黃芪的有效成分提取報(bào)道較多，但文獻(xiàn)報(bào)道所取的研究材料黃芪產(chǎn)地、品種等都不同，難以進(jìn)行系統(tǒng)比較分析。本文采用同一研究材料，分別研究溶劑、溶劑濃度、提取溫度對(duì)黃芪皂苷、黃芪多糖的影響，從中優(yōu)選出黃芪皂苷、黃芪多糖提取率較高的影響因素范圍。

1儀器與試劑

1.1儀器UV-2450紫外分光光度計(jì)（日本導(dǎo)津）；FA2004B電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；電熱恒溫干燥箱（連云港醫(yī)療器械設(shè)備廠）；VP30型真空抽濾泵（北京萊伯泰科儀器有限公司）。

1.2試劑黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；葡萄糖（分析純，萊陽(yáng)化工實(shí)驗(yàn)廠，批號(hào)：20050615）；香草醛，無(wú)水乙醇，苯酚，硫酸，氫氧化鈉，均為分析純；蒙古黃芪藥材，隴西制藥廠提供，并經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥研究所馬志剛教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪［Astragalusmembranaceus（Fisch）Bge.Var.mongholicus（Bge）Hsiao］；95%乙醇；蒸餾水自制。

2方法與結(jié)果

2.1黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制［3］精密稱取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品5.1mg，置于干燥的10ml容量瓶中，加適量90%乙醇于62℃水浴振搖使溶解，放冷后以90%乙醇定容。精密吸取0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml分別注入具塞試管中,各加入90%乙醇至0.75ml,再分別加入0.75ml8%香草醛試劑,置于冰浴中緩緩加入7.5ml72%硫酸搖勻,放入62℃水浴中恒溫20min,取出冷卻搖勻,在30min內(nèi),于波長(zhǎng)544nm處測(cè)定吸光度（A）,隨行試劑空白。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：Y=0.0011X-0.0021,r2=0.9943（n=5），黃芪甲苷在102～510mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取105℃干燥恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品100.3mg,置于100ml容量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻。精密吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8ml分別置于50ml容量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻。精密吸取上述各種溶液2.0ml于具塞試管中,分別加入5%苯酚溶液1.0ml,搖勻,迅速加入5.0ml濃硫酸,振搖5min,置沸水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,隨行空白,在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［3］?；貧w方程為：Y=0.014X-0.0003,r2=0.9996（n=7），葡萄糖在8.024～56.168mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3提取乙醇濃度的選擇根據(jù)文獻(xiàn)資料［4］在70%左右的醇濃度時(shí)黃芪皂苷的提取率較高，因此選擇60%、70%、80%、95%的乙醇進(jìn)行黃芪皂苷及黃芪多糖的提取。

2.3.1提取方法稱取黃芪藥材約5g，4份，分別以60%、70%、80%、95%的乙醇水溶液煮沸提取，提取兩次：第一次溶劑用量為藥材量的10倍（質(zhì)量體積比），提取時(shí)間90min；第二次溶劑用量為8倍，提取時(shí)間60min。提取液過(guò)濾、合并、冷卻至室溫，精密吸取25.0ml濾液于編號(hào)的蒸發(fā)皿中置于沸水浴揮去乙醇后進(jìn)行皂苷測(cè)定；另精密吸取50.0ml濾液于編號(hào)并經(jīng)干燥稱定的蒸發(fā)皿中置于沸水浴將溶劑揮至近干，移至恒溫干燥箱中在100～105℃烘干后放入干燥器內(nèi)，進(jìn)行浸膏得率及黃芪多糖的測(cè)定。同法提取6組。

2.3.2黃芪皂苷的含量測(cè)定將揮去乙醇的提取液分別轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用蒸餾水清洗蒸發(fā)皿3次，洗液并入容量瓶，以蒸餾水定容，搖勻后，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液1.0ml于10ml容量瓶中，以無(wú)水乙醇定容，搖勻作為樣品液，精密吸取0.5ml樣品液于具塞試管中，加0.5ml8%香草醛試液,置于冰浴中緩緩加入5ml72%硫酸,搖勻,放入62℃水浴中,保溫20min,取出置于冷水浴中冷卻,搖勻,于波長(zhǎng)544nm處測(cè)定吸光度，隨行以90%乙醇為空白，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出樣品的黃芪皂苷含量。

2.3.3黃芪多糖及浸膏得率測(cè)定將干燥至恒重的盛有浸膏的蒸發(fā)皿進(jìn)行稱定，減去蒸發(fā)皿的重量即得浸膏量（總浸膏量進(jìn)行換算）；粉碎浸膏并混勻作為黃芪多糖樣品，精密稱取各多糖樣品50mg,以蒸餾水溶解并定容于50ml容量瓶，搖勻，精密吸取1.0ml此液置25ml容量瓶中，蒸餾水定容,搖勻。精密吸取2.0ml于具塞試管中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作。用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖的含量。

2.3.4不同濃度乙醇提取結(jié)果通過(guò)SPSS11.5的單因素方差分析得：四組皂苷占浸膏%、皂苷占藥材%、多糖占浸膏%及多糖占藥材%的方差均不齊，進(jìn)一步經(jīng)Tamhane分析得：60%、70%、80%乙醇組分別與95%組比較，差異有顯著性（P<0.05）。60%、70%、80%乙醇提取所得黃芪皂苷及黃芪多糖的收率之間的差異無(wú)顯著性，95%乙醇提取所得黃芪皂苷及黃芪多糖與其他濃度乙醇提取所得收率的差異具有顯著性，綜合圖1的結(jié)果，可以得出黃芪皂苷的含量、黃芪多糖的含量與純度均與醇的濃度有關(guān)，醇提濃度越高,黃芪多糖的純度越高,但含量下降，黃芪多糖、黃芪皂苷的含量在60%、70%、80%乙醇濃度時(shí)差異無(wú)顯著性，在95%乙醇濃度時(shí)含量明顯降低，說(shuō)明95%的乙醇不適用于提取黃芪甲苷及黃芪多糖，因此選擇60%、70%、80%乙醇作為提取工藝優(yōu)化中乙醇濃度考查的主要水平。

2.4提取溫度對(duì)醇提的影響

2.4.1提取方法分別稱取黃芪藥材約5g，在40、50、60、70、80、90℃水浴及100℃下以70%的乙醇水溶液進(jìn)行黃芪皂苷的提取，提取兩次：第一次溶劑用量為藥材量的10倍（質(zhì)量體積比），提取時(shí)間90min；第二次溶劑用量為8倍，提取時(shí)間60min。提取液過(guò)濾、合并、冷卻至室溫，精密吸取25.0ml濾液于編號(hào)的蒸發(fā)皿中置于沸水浴揮去乙醇后進(jìn)行皂苷測(cè)定；另精密吸取50.0ml濾液于編號(hào)并經(jīng)干燥稱定的蒸發(fā)皿中置于沸水浴將溶劑揮至近干，移至恒溫干燥箱中在100～105℃烘干后放入干燥器內(nèi)，進(jìn)行浸膏得率及黃芪多糖的測(cè)定。同法提取4組。

2.4.2測(cè)定黃芪皂苷、多糖的含量測(cè)定同“2.3”。

2.4.3不同溫度乙醇的提取結(jié)果通過(guò)SPSS11.5的單因素方差分析得：七組皂苷占浸膏%、皂苷占藥材%、多糖占浸膏%及多糖占藥材%的方差均不齊，進(jìn)一步經(jīng)Tamhane分析得：60、70、80、90、100℃組皂苷占藥材%分別與40、50℃組比較，差異有顯著性（P<0.05）；70、90℃組多糖占浸膏%分別與40、50℃組比較，以及60℃組多糖占浸膏%與90℃組比較，差異有顯著性（P<0.05）；多糖占藥材%各組之間差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

60、70、80、90、100℃時(shí)的皂苷得率與40、50℃時(shí)的得率比較差異具有顯著性；而60、70、80、90、100℃之間及40℃與50℃之間的差異無(wú)顯著性，即其差異不是由于溫度因素造成，而是由于操作的系統(tǒng)誤差或偶然誤差引起。由圖2可以得出黃芪皂苷的得率隨提取溫度升高而提高，而在60℃時(shí)皂苷得率也相對(duì)較高；由于70%的醇在90℃時(shí)已沸騰，說(shuō)明在沸騰情況對(duì)皂苷的提取率較高，而黃芪皂苷又有不耐熱的特性，溫度越高對(duì)其的破壞也多，因此100℃時(shí)的提取效率不如90℃。

70、90℃組的多糖占浸膏%分別與40℃、50℃組比較，以及60℃組多糖占浸膏%與90℃組比較，差異有顯著性，其余各組之間差異無(wú)顯著性；而各溫度組之間多糖占藥材%的差異均無(wú)顯著性。由圖2得出多糖純度隨溫度升高而降低，說(shuō)明提取溫度高時(shí)對(duì)于雜質(zhì)的提取也增多；與此同時(shí)多糖得率隨溫度升高亦有所升高，提示多糖提取應(yīng)同時(shí)考慮提高提取效率和減少雜質(zhì)提出兩方面的平衡。

多糖得率作為參考由于其組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與文獻(xiàn)［5，6］報(bào)道有一定的差異，所以主要考慮皂苷得率，因此選擇60、90、100℃三個(gè)溫度作為提取工藝優(yōu)化中溫度考查的主要水平。

3提取溫度對(duì)水提的影響

3.1提取方法分別稱取黃芪藥材約5g，以蒸餾水在50、60、70、80、90℃水浴以及煮沸條件下進(jìn)行黃芪多糖的提取，提取兩次：第一次溶劑用量為藥材量的8倍（質(zhì)量體積比），提取時(shí)間120min；第二次溶劑用量為6倍，提取時(shí)間60min。提取液過(guò)濾、合并于100ml容量瓶中冷卻至室溫，蒸餾水定容作為樣品提取液。同法提取4組。

3.2測(cè)定黃芪皂苷、多糖的含量測(cè)定同“2.3”。

3.3不同溫度水提取結(jié)果通過(guò)SPSS11.5的單因素方差分析得：6組皂苷占浸膏%、皂苷占藥材%、多糖占浸膏%及多糖占藥材%的方差均不齊，進(jìn)一步經(jīng)Tamhane分析得：多糖占藥材%70℃組與100℃組比較差異有顯著性（P<0.05）；6組皂苷占藥材%之間差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：70℃組與90℃組多糖占藥材%比較，差異有顯著性，其余各組之間差異均無(wú)顯著性；而各組之間皂苷占藥材%的差異均無(wú)顯著性。由圖3可以得出：在50～60℃、70～100℃時(shí)黃芪多糖提取率隨著提取溫度的升高而有所提高，而60℃時(shí)黃芪多糖提取率也較高，與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致。而皂苷占藥材%的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此只考慮多糖得率，選擇60、90、100℃三個(gè)溫度作為水提取工藝優(yōu)化中考查的主要水平。

4討論

本文采用同一研究材料，分別研究溶劑、溶劑濃度、提取溫度對(duì)黃芪皂苷、黃芪多糖的影響?？梢詾椴煌枰奶崛」に囋O(shè)計(jì)提供參考。

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