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1資料與方法

1.1一般資料

搜集本院2014年3月~2015年3月健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組；另選同期6例健康志愿者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均對本研究知情；均身體健康。研究組女3例,年齡21~37歲,平均年齡(28.46±3.36)歲；男3例,年齡20~38歲,平均年齡(29.65±3.34)歲。對照組女3例,年齡22~38歲,平均年齡(28.51±3.29)歲；男3例,年齡21~38歲,平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g,將其放在離心管中,后轉(zhuǎn)為培養(yǎng)皿中,準(zhǔn)備處理,離心管與培養(yǎng)皿均為無菌；剔除組織中筋膜及血管,使用無菌溶液反復(fù)進(jìn)行沖洗；處理后,用眼科剪對其進(jìn)行分割,大小約為1.5mm3,直至分割成糊狀,在37℃環(huán)境下,選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進(jìn)行消化處理,速度為120r/min；采用LG-DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清(10%)終止消化,并離心10min,后獲得高濃度的間質(zhì)組織細(xì)胞團(tuán),對其進(jìn)行處理,選擇紅細(xì)胞裂解液,并去除紅細(xì)胞,采用篩網(wǎng)(100μm)進(jìn)行過濾；將過濾液取出,使用鏈霉素100g/L、青霉素100U/ml、LG-DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清進(jìn)行重懸處理；處理后,將其置于培養(yǎng)皿中,直徑為100mm,接種,設(shè)定濃度4×104/cm2；接種后,在體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),溫度設(shè)定為37℃,且每隔2d更換一次培養(yǎng)液；待細(xì)胞生長檢測80%~90%時(shí),按照比例1∶2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),方法選擇流式細(xì)胞術(shù)。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對脂肪干細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行洗滌,離心10min,1000r/min,獲取單細(xì)胞懸液,轉(zhuǎn)變細(xì)胞濃度1×109/L；其次對組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進(jìn)行熒光標(biāo)記,將標(biāo)記后物質(zhì)加入懸液,將其和熒光標(biāo)記的非特異性IgG同型進(jìn)行對比分析,在37℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng),30min后,反復(fù)使用PBS進(jìn)行處理,使用多聚甲醛予以固定,用量30g/L,最后實(shí)施檢測,儀器選擇流式細(xì)胞儀。

1.3觀察指標(biāo)

觀察細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),同時(shí)對異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)

采用流式細(xì)胞術(shù)檢測脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),陰性表達(dá)抗原：CD31(2.81±1.04)%,CD34(17.12±0.54)%,CD45(1.39±0.27)%。陽性表達(dá)抗原：CD29(91.22±1.03)%,CD44(90.83±2.37)%,CD90(94.02±0.69)%。由此得知,脂肪干細(xì)胞無造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題。

2.2淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)情況

對照組與研究組CPM比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表示脂肪干細(xì)胞對異體移植的排斥作用較小。

3討論

脂肪的組織基質(zhì)內(nèi)存在大量ADSCs,作為成體干細(xì)胞,具有多向分化潛質(zhì),在誘導(dǎo)條件適宜的情況下可分化成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等,且增殖能力較強(qiáng)。研究顯示,ADSCs不僅具有細(xì)胞多分化功能,如軟骨、肌肉、成骨、神經(jīng)、脂肪等,而且其表面標(biāo)志表達(dá)同BMSs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)一致,包括CD166、CD106、CD105、CD29等。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達(dá),體外BMSc能對淋巴細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行抑制,而體內(nèi)應(yīng)用BMSc可使異體移植皮片成活時(shí)間延長,故同種異體BMSc是目前組織工程主要細(xì)胞來源。體外培養(yǎng)時(shí)ADSCs對淋巴細(xì)胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學(xué)性質(zhì),試驗(yàn)包括單向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、雙向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),前者主要用以檢測刺激細(xì)胞ADSCs所致淋巴細(xì)胞的增殖程度,數(shù)值用增殖后的數(shù)量表達(dá),且數(shù)值和ADSCs免疫原性之間呈正相關(guān)；后者主要用來檢測雙方抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用,不對兩種細(xì)胞進(jìn)行滅活,互相作為反應(yīng)細(xì)胞及刺激細(xì)胞,數(shù)值用增殖后兩種細(xì)胞的總數(shù)量表達(dá)。ADSCs體外試驗(yàn)與多種可控因素相關(guān),在體內(nèi)試驗(yàn)中,ADSCs免疫學(xué)性質(zhì)為復(fù)雜性免疫反應(yīng)綜合作用的結(jié)果,異基因抗原免疫反應(yīng)與細(xì)胞因子、補(bǔ)體系統(tǒng)等密切相關(guān)。脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題,對異體移植的排斥作用較小,臨床應(yīng)加強(qiáng)對細(xì)胞分離及培養(yǎng)的深入研究。

作者：韋慧玲 單位：河南省鄭州市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科