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本文作者從實(shí)際工作出發(fā),對(duì)以下幾種食品微生物的快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了全面闡述。
關(guān)鍵詞:食品微生物檢測(cè)快速檢測(cè)技術(shù)
一、主要食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)
1 分子生物學(xué)技術(shù)
(1)PCR技術(shù)
通過(guò)大量復(fù)制目的菌的高度保守的一段或幾段特異性DNA并確認(rèn)這些DN段的大小來(lái)完成檢測(cè),如果樣品中存在目的菌,就能復(fù)制出有關(guān)特異性DN段,而復(fù)制特異性DN段靠聚合酶鏈反應(yīng)―PCR技術(shù)。
該技術(shù)已大量運(yùn)用到食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域,并形成標(biāo)準(zhǔn)化,如SN/T 1632.2-2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法 第3部分:熒光PCR方法》、DIN 10135:1999《沙門(mén)氏菌聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)方法、ISO 20837:2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)―聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)食源病原體―定性檢測(cè)用樣品的制備》
目前利用PCR技術(shù)檢測(cè)病原菌的商品化儀器有被AOAC、USDA-FSIS、Health Canada、AFNOR等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可的BAX@全自動(dòng)病原菌檢測(cè)系統(tǒng),可檢測(cè)沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌等致病菌,此外還有RiboPrinter@微生物鑒定系統(tǒng),可鑒定沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特菌和阪崎腸桿菌等致病菌在內(nèi)的1400多種細(xì)菌。
在1996年由美國(guó)AB公司推出的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,與常規(guī)PCR儀相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR產(chǎn)物污染、自動(dòng)化程度高,同時(shí)能對(duì)起始模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量等特點(diǎn)。
(2)核酸探針技術(shù)
核酸探針是指帶有標(biāo)記的特異DN段。根據(jù)堿基互補(bǔ)原則,核酸探針能特異性地與目的DNA雜交,最后用特定的方法測(cè)定標(biāo)記物。探針標(biāo)記方式為放射性標(biāo)記、非放射性標(biāo)記,具有直觀(guān)、準(zhǔn)確等特點(diǎn),基于核酸探針雜交的基因芯片技術(shù),雖然其靈敏度與PCR技術(shù)相當(dāng),但其具有高通量、多參數(shù)、高精確度和快速分析等特征,所以備受青睞。我國(guó)已將此技術(shù)引入到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中來(lái),如SN/T 1543-2005《食源性致病菌基因芯片鑒定方法》。
2 免疫學(xué)技術(shù)
(1)熒光抗體法
用熒光物質(zhì)標(biāo)記抗血清的抗體,即抗抗體。使用熒光顯微鏡觀(guān)察樣品中的目的菌-熒光標(biāo)記抗體結(jié)合物或目的菌-抗體-熒光標(biāo)記抗抗體結(jié)合物來(lái)判斷結(jié)果。在食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域內(nèi),國(guó)內(nèi)使用的較多是mini-VIDAS全自動(dòng)熒光酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng),該系統(tǒng)已被AOAC、AFNOR等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可,可檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌、單增李斯特氏菌、大腸桿菌O157、葡萄球菌腸毒素等。
(2)免疫酶技術(shù)
以酶標(biāo)記抗體或抗抗體,抗原與酶標(biāo)記抗體,或抗原-抗抗結(jié)合物與酶標(biāo)記抗抗體特異性結(jié)合。根據(jù)酶反應(yīng)有色反應(yīng)的有無(wú)及其濃度,即可間接推測(cè)被檢抗原或抗體是否存在及其數(shù)量。常用酶技術(shù)分為固相免疫酶測(cè)定技術(shù)、免疫酶定位技術(shù)和免疫酶沉淀技術(shù)。在食品微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域內(nèi),國(guó)內(nèi)使用比較多的有Reveal@大腸桿菌O157:H7檢測(cè)系統(tǒng)、Reveal@沙門(mén)氏菌檢測(cè)系統(tǒng)及GeneQuence@李斯特氏菌檢測(cè)試劑盒、金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒等。
(3)免疫磁珠技術(shù)
用連接抗體的磁珠捕捉增菌液中的目的菌,然后將捕捉到的抗原即目的菌劃線(xiàn)于選擇性平板,觀(guān)察菌落?;蛴脽晒饣蛎笜?biāo)記的抗抗體進(jìn)行檢測(cè)?;蛴镁酆厦告?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。此技術(shù)在ISO 166654:2001《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)―大腸桿菌O157基準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》上得到了應(yīng)用。目前可利用該技術(shù)對(duì)沙門(mén)氏菌、大腸桿菌0157、大腸桿菌0145、大腸桿菌O111等進(jìn)行測(cè)試。
(4)免疫層析技術(shù)
該技術(shù)是一種膜固相免疫測(cè)定技術(shù)。滴加在膜一端的樣品溶液受膜的毛細(xì)管作用向另一端移動(dòng),猶如層析一般。移動(dòng)過(guò)程中被分析物與固定于膜上某一區(qū)域的抗原或抗體結(jié)合而被固相化,無(wú)關(guān)物質(zhì)則越過(guò)該區(qū)域而被分離,然后通過(guò)標(biāo)記物的顯色來(lái)判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以膠體金為標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)稱(chēng)為膠體金免疫層析技術(shù),該技術(shù)具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),可對(duì)食品中大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、布氏桿菌、霍亂弧菌等進(jìn)行檢測(cè)。
(5)其它免疫技術(shù)
細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法主要包括流式細(xì)胞儀(flow cytometry,F(xiàn)CM)和固相細(xì)胞計(jì)數(shù)(solid phasecytometry,SPC)法。FCM通常以激光作為發(fā)光源,經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大??;熒光信號(hào)的強(qiáng)度則代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,由此可通過(guò)儀器檢測(cè)散射光信號(hào)和熒光信號(hào)來(lái)估計(jì)微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)具有高度的敏感性,可同時(shí)對(duì)目的菌進(jìn)行定性和定量鑒定。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)、致病性沙門(mén)氏菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗(yàn)方法。
3.其它技術(shù)
即用型紙片法
3M公司的perrifilmTMPlate@系列微生物測(cè)試片,可分別檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)。由RCP Scientific Inc公司開(kāi)發(fā)上市的Regdigel@系列,除上述項(xiàng)目外還有檢測(cè)乳桿菌、沙門(mén)氏菌、葡萄球菌的產(chǎn)品。3M公司生產(chǎn)的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色劑、顯色劑,增強(qiáng)了菌落的目視效果,而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細(xì)菌恢復(fù)的缺陷。霉菌快速檢驗(yàn)紙片,應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中的霉菌具有操作簡(jiǎn)便,僅需36℃培養(yǎng),不需要低溫設(shè)備;快速,僅需2d就可觀(guān)察結(jié)果,比現(xiàn)在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮短3~5d,大大提高了工作效率。紙片法與國(guó)標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且菌落典型,易判定。
二、食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)的局限性
快速檢測(cè)技術(shù)的評(píng)估結(jié)果表明,其對(duì)于某類(lèi)食品的性能優(yōu)于其他食品,很大程度上是由于食品成分干擾所致,有些食品成分對(duì)于快速檢測(cè)方法中所應(yīng)用的技術(shù)是比較麻煩的。例如在采用PCR技術(shù)時(shí),食物中的高蛋白、高脂肪對(duì)Taq酶具有抑制作用,可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陰性。同時(shí)PCR操作過(guò)程要求嚴(yán)格,微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無(wú)限放大產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。
三、結(jié)束語(yǔ)
食品病原微生物檢測(cè)是保障食品安全的重要組成部分,依靠采用培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)、分離、生化鑒定及革蘭染色鏡檢等傳統(tǒng)檢測(cè)方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的專(zhuān)業(yè)技術(shù)、操作技能以及工作經(jīng)驗(yàn)要求極高,操作步驟復(fù)雜繁瑣,檢測(cè)周期長(zhǎng),靈敏度低,準(zhǔn)確性差,容易出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。近年來(lái),微生物快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速,運(yùn)用分子生物學(xué)、電子技術(shù)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等技術(shù)對(duì)微生物進(jìn)行分離、鑒定和計(jì)數(shù),與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,更快、更方便、更靈敏、更準(zhǔn)確。
隨著某一快速檢測(cè)技術(shù)更加頻繁的使用,其好處與局限性同時(shí)變得更加明顯,使用者在選擇這些快速檢測(cè)技術(shù)時(shí),應(yīng)考慮此技術(shù)的準(zhǔn)確性、特異性、實(shí)用性、穩(wěn)定性、靈敏度以及采用此技術(shù)的供應(yīng)價(jià)格、認(rèn)可程度和售后服務(wù)等因素,綜合判別后進(jìn)行選擇。
參考文獻(xiàn):
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[關(guān)鍵詞]:生物檢測(cè)技術(shù) 食品檢驗(yàn) 應(yīng)用 檢測(cè)方法 分析
前言
生物檢測(cè)技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用是在現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步與國(guó)家對(duì)于食品安全以及質(zhì)量要求的不斷提高背景下,隨著傳統(tǒng)食品安全與質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用需求越來(lái)越難以實(shí)現(xiàn),就有了對(duì)于食品檢驗(yàn)的更加科學(xué)、快速并且檢驗(yàn)精確度更高的生物食品檢測(cè)方法。生物檢測(cè)方法被應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中不僅具有上述的檢測(cè)應(yīng)用發(fā)展契機(jī),更是因?yàn)槭称芳庸づc生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)用的食品材料的來(lái)源與生物有著很大的聯(lián)系,而生物檢測(cè)技術(shù)在對(duì)于食品進(jìn)行檢驗(yàn)中,就是通過(guò)生物的相關(guān)特性以及化學(xué)特征等進(jìn)行檢測(cè)與檢驗(yàn)應(yīng)用的,因此,使用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行食品檢驗(yàn)的應(yīng)用具有較大的優(yōu)勢(shì)。
1 生物檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用
1. 1 生物酶技術(shù)
在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中的生物酶技術(shù)主要是利用生物酶的相關(guān)特性進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)與應(yīng)用,生物酶檢測(cè)技術(shù)在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用相對(duì)比較廣泛,它主要用于對(duì)于食品中的殘留農(nóng)藥以及食品中的農(nóng)藥含量、食品的微生物污染情況進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)用。在對(duì)于食品的實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中,生物酶技術(shù)中的酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中應(yīng)用優(yōu)勢(shì)與特征比較明顯。酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)主要是將酶與免疫學(xué)的相關(guān)原理特征進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用的基礎(chǔ)上提出的生物酶檢測(cè)技術(shù),這種酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在進(jìn)行食品檢驗(yàn)應(yīng)用中不僅具有較高的檢測(cè)靈敏性,而且在進(jìn)行食品檢測(cè)應(yīng)用中的選擇性也相對(duì)比較高,因此在食品檢驗(yàn)中的受歡迎程度比較高。尤其是在進(jìn)行蔬菜以及水果中的殺菌農(nóng)藥殘留度檢測(cè)中,酶聯(lián)免疫生物酶檢測(cè)方法的檢測(cè)靈敏度與準(zhǔn)確度非常高。
1. 2 PCR技術(shù)
PCR技術(shù)也是一種通過(guò)生物酶的相關(guān)原理特性進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用的生物酶檢測(cè)技術(shù)。在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中,PCR技術(shù)也被稱(chēng)為是聚合酶檢測(cè)技術(shù),它是通過(guò)聚合酶的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)特征,對(duì)于生物中的酶變化進(jìn)行檢測(cè)分析與應(yīng)用。PCR技術(shù)在實(shí)際中檢測(cè)應(yīng)用中最早是進(jìn)行基因克隆與轉(zhuǎn)基因的相關(guān)檢測(cè)中,隨著PCR技術(shù)對(duì)于基因克隆以及轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的精確度與微量性特征,PCR技術(shù)在實(shí)際檢測(cè)中的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)展開(kāi)來(lái)。PCR技術(shù)在食品檢驗(yàn)中進(jìn)行應(yīng)用主要是隨著轉(zhuǎn)基因食品的出現(xiàn)以及食品微生物的研究發(fā)展。
1.3 生物傳感器
生物傳感器是一種利用生物技術(shù)以及相關(guān)生物特征應(yīng)用于傳感器的識(shí)別系統(tǒng)中,通過(guò)對(duì)于被檢測(cè)物體的信號(hào)識(shí)別與轉(zhuǎn)換,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于被檢測(cè)物體的實(shí)際應(yīng)用。生物傳感器作為一種生物檢測(cè)技術(shù),在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中,不僅具有檢測(cè)速度快、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高以及檢測(cè)應(yīng)用方便等特征,而且在進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用時(shí),由于生物傳感器的靈敏性以及特異性特征,使得生物傳感器在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中的應(yīng)用范圍也比較廣泛和普遍。
1.4 生物芯片
生物芯片技術(shù)是生物檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)中一種新型高新技術(shù),它在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中不僅具有最快速和一次性檢測(cè)數(shù)量最大的應(yīng)用特征,并且在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中的適用范圍也是最廣泛的。生物芯片檢測(cè)技術(shù)主要是利用生物芯片相關(guān)信息技術(shù),在檢測(cè)過(guò)程中通過(guò)光導(dǎo)原位合成技術(shù)以及微量點(diǎn)樣技術(shù)進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用,尤其是在對(duì)于一些用于進(jìn)出口貿(mào)易并且對(duì)于檢測(cè)要求較高的食品檢測(cè)中的應(yīng)用尤其方便適用。
2 在食品檢測(cè)中的具體應(yīng)用
利用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行食品檢驗(yàn)應(yīng)用,在對(duì)于食品的檢驗(yàn)中主要是針對(duì)食品中的有害微生物以及食品成分、品質(zhì)、殘留農(nóng)藥、轉(zhuǎn)基因等情況進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)用。
2 .1 有害微生物的檢測(cè)
生物檢測(cè)技術(shù)在對(duì)于食品中的有害微生物檢測(cè)中,主要是通過(guò)生物檢測(cè)技術(shù)中的生物特征對(duì)于食品中的有害微生物情況進(jìn)行檢測(cè)分析,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于食品有害微生物傳播等的控制,避免對(duì)于食品有害微生物對(duì)于人體健康的威脅。利用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行食品中有害微生物的檢測(cè)分析在實(shí)際中已經(jīng)具有較多的應(yīng)用實(shí)例,比如在對(duì)于奶制品中的沙門(mén)氏菌的檢測(cè)分析中,就是使用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)實(shí)現(xiàn)的。應(yīng)用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行食品有害微生物的有效檢測(cè)是進(jìn)行食品有害微生物擴(kuò)散控制的有效途徑。
2.2 食品中殘余農(nóng)藥的檢測(cè)
利用生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行食品中殘留農(nóng)藥的檢測(cè)在實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用中的應(yīng)用實(shí)例也非常多。通常情況下,食品中的農(nóng)藥殘留成分一旦超標(biāo)會(huì)對(duì)于人體健康甚至是生命造成很大威脅,因此應(yīng)用生物檢測(cè)技術(shù)對(duì)于食品中的農(nóng)藥殘留成分進(jìn)行檢測(cè)分析,對(duì)于保證食品安全有著很大的作用。進(jìn)行食品農(nóng)藥殘留成分檢測(cè)應(yīng)用的主要生物檢測(cè)技術(shù)以及方法為生物酶技術(shù)和生物傳感器儀器等,在實(shí)際中的應(yīng)用也較多,比如美國(guó)的基于生物檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)箱等。
2.3成分和品質(zhì)的檢測(cè)
利用生物檢測(cè)技術(shù)對(duì)于食品成分以及食品質(zhì)量檢測(cè),是保證食品生產(chǎn)質(zhì)量和對(duì)于食品變質(zhì)情況進(jìn)行判定的重要途徑方法,對(duì)于保證食品安全與人體健康有著重要的作用。在進(jìn)行食品生產(chǎn)成分以及食品品質(zhì)檢測(cè)中,應(yīng)用最多的生物檢測(cè)技術(shù)主要是生物傳感器檢測(cè)方法。生物傳感器在對(duì)于食品成分的檢測(cè)應(yīng)用中,最早是對(duì)于食品中的葡萄糖含量進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)用,如今生物傳感器還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于食品的氣味檢測(cè)與分析應(yīng)用。
2.4轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)
生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)是隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)以及生物技術(shù)的發(fā)展,食品中出現(xiàn)轉(zhuǎn)基因食品種類(lèi)。轉(zhuǎn)基因食品通常會(huì)對(duì)于人體健康以及生態(tài)環(huán)境造成一定的影響,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè),有利于對(duì)于轉(zhuǎn)基因食品的不利影響進(jìn)行控制。在使用生物檢測(cè)技術(shù)對(duì)于轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測(cè)中,主要的檢測(cè)方法有對(duì)于轉(zhuǎn)基因食品的酸檢測(cè)法以及蛋白質(zhì)和酶活性特征檢測(cè)等方法。
結(jié)語(yǔ)
總之,對(duì)于生物檢測(cè)技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用等進(jìn)行分析研究,不僅有利于提高生物檢測(cè)技術(shù)水平,推進(jìn)現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步,而且對(duì)于食品安全與質(zhì)量也有很大的保證,具有積極的意義。
參考文獻(xiàn):
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關(guān)鍵詞:微生物 檢測(cè) 食品安全 技術(shù) 應(yīng)用
中圖分類(lèi)號(hào):TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1672-3791(2015)03(a)-0082-02
近年來(lái)食品安全問(wèn)題已日漸深入人心,微生物行食品中毒事件的報(bào)告起數(shù)和中毒人數(shù)正逐年升高,隨著人們生活水平的提高,安全意識(shí)的增強(qiáng),對(duì)食品安全提出了更高的要求,食品安全已經(jīng)成為全球關(guān)注的焦點(diǎn),現(xiàn)代食品微生物檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用也越來(lái)越受到人們的重視。微生物檢測(cè)技術(shù)具有高靈敏度、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),能夠快速檢驗(yàn)出食品中的病原微生物,進(jìn)而幫助人們掌握食品質(zhì)量狀況,因此被廣泛應(yīng)用到食品安全檢測(cè)中。
1 微生物檢測(cè)技術(shù)及其重要性
1.1 食源性病原菌免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)
該種技術(shù)主要包括熒光抗體檢測(cè)技術(shù)(FAT)和免疫酶技術(shù)(EIA)兩類(lèi),其中FAT技術(shù)以抗原與抗體能夠發(fā)生反應(yīng)為理論基礎(chǔ),通過(guò)熒光素標(biāo)記法檢驗(yàn)的一種技術(shù),有直接和間接兩種方法。直接法指將帶有熒光素標(biāo)記的血清添加到待測(cè)樣品中,經(jīng)洗滌后在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察的一種方法,而間接法指將已知細(xì)菌的特異性抗體加入到待測(cè)樣品中,兩者充分反應(yīng)后洗滌,然后添加熒光標(biāo)記的第二、第三抗體的方法。使用該種方法檢測(cè)比較及時(shí)且操作方便,但是容易受到樣品中其他熒光的干擾,而且熒光顯微鏡價(jià)格成本較高。EIA技術(shù)使用酶標(biāo)記抗原和抗體進(jìn)行檢驗(yàn)的一種技術(shù)。檢測(cè)時(shí)加入底物和酶,兩者結(jié)合生成的產(chǎn)物與抗原發(fā)生反應(yīng),根據(jù)顏色深淺進(jìn)行定量檢測(cè),該種檢測(cè)技術(shù)具有檢測(cè)準(zhǔn)確性高、速速及時(shí)等優(yōu)點(diǎn)。
1.2 食源性病原菌分子生物學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)
1.2.1 基因探針技術(shù)
這里所說(shuō)的基因探針指使用能夠檢測(cè)的生物素、同位素等標(biāo)記序列已知的寡聚核苷酸,讓其與目的基因進(jìn)行雜交,利用雜交信號(hào)找出基因的一種檢測(cè)方法。標(biāo)記探針的方法分為非同位素和同位素兩種,其中同位素標(biāo)記具有檢測(cè)及時(shí)、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),但是其具有一定的放射性,會(huì)給危害人體健康。
1.2.2 多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)
PCR指利用體外酶促反應(yīng)合成特異性DN段而進(jìn)行的檢測(cè)技術(shù),其DN段能夠在短時(shí)間內(nèi)迅速擴(kuò)散,甚至用肉眼就能觀(guān)察,因此檢驗(yàn)效率較高,而且操作方便,被廣泛應(yīng)用到食品安全檢驗(yàn)中。
1.2.3 生物芯片技術(shù)
該種技術(shù)指在一定條件下使核酸分子與樣品中的核酸片段進(jìn)行雜交,通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)達(dá)到檢測(cè)目的的檢測(cè)技術(shù)。該種技術(shù)克服了傳統(tǒng)核酸印記雜交的諸多缺點(diǎn),但是制作芯片比較復(fù)雜,因此在食品檢測(cè)中的應(yīng)用需要進(jìn)一步推廣。
1.3 生理生化代謝產(chǎn)物檢測(cè)技術(shù)
該種方法包括接觸酶測(cè)定技術(shù)、放射測(cè)量法、微熱量計(jì)法以及電阻抗法,其中接觸酶測(cè)定技術(shù)利用H2O2和接觸酶放出氧氣,如陽(yáng)性細(xì)菌數(shù)量較多則放出氧氣的量就越多,從而接觸酶紙盤(pán)上浮時(shí)間越短,以此判斷食品中嗜冷性細(xì)菌;放射檢測(cè)法指將放射性元素融合到碳水化合物中,細(xì)菌分解碳水化合物放出CO2,通過(guò)檢測(cè)CO2的放射量,判定食品中細(xì)菌的含量;不同的細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的熱量存在著差別,通過(guò)檢測(cè)放出熱量的多少檢測(cè)細(xì)菌這就是微熱量計(jì)法;電阻抗法依據(jù)的原理是:細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)會(huì)一些大分子物質(zhì)分解成帶電的小分子物質(zhì),檢測(cè)阻抗變換,就能對(duì)細(xì)菌數(shù)量有個(gè)基本的判斷。
除此之外,微生物檢測(cè)技術(shù)還包括食源性治病均生物傳感器檢測(cè)技術(shù)。致病菌呼吸產(chǎn)生的電子生物傳感器,通過(guò)檢測(cè)電流的大小判定致病菌的濃度,檢測(cè)比較迅速。
1.4 食品微生物檢測(cè)技術(shù)的重要性
我國(guó)食品存在的安全隱患導(dǎo)致了我國(guó)食品生產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展非常不均衡,因此,要控制食品安全,運(yùn)用高科技實(shí)施高質(zhì)量的食品檢測(cè)工作對(duì)控制微生物引起的食源性疾病具有重要作用。微生物檢測(cè)技術(shù)是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,也是判定被檢食品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一,通過(guò)食品微生物檢驗(yàn),可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生環(huán)境,能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評(píng)價(jià),為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù),提供傳染病和人類(lèi),動(dòng)物和食物中毒的防治措施,同時(shí)食品微生物檢驗(yàn)是以貫徹“預(yù)防為主”的衛(wèi)生方針,可以有效地防止或者減少食物中毒人畜共患病的發(fā)生,保障人民的身體健康,同時(shí),它對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量、避免經(jīng)濟(jì)損失、保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟(jì)上的重要意義。
2 現(xiàn)代食品微生物檢測(cè)的內(nèi)容
現(xiàn)代食品類(lèi)生產(chǎn)企業(yè)實(shí)行的微生物檢測(cè)技術(shù)是以微生物學(xué)為基礎(chǔ),運(yùn)用現(xiàn)代免疫學(xué)、分子生物學(xué)、自動(dòng)化儀器、生物傳感器等方面的理論和技術(shù),研究食品中的微生物,特別是病原微生物的種類(lèi)、數(shù)量、性質(zhì)等,并建立的現(xiàn)代食品微生物檢測(cè)方法。具體的檢驗(yàn)可分為兩大類(lèi),一是食品污染程度類(lèi)指標(biāo)菌群檢驗(yàn),如菌落總數(shù)、腸道致病菌、大腸菌等,二是食品內(nèi)致病菌的檢測(cè)。
2.1 檢測(cè)食品污染程度指示菌
菌落總數(shù)、菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理,在一定條件下(即在需氧情況下,37℃培養(yǎng)四十八小時(shí))培養(yǎng)后所得1g或1mL檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù).,菌落總數(shù)與受有機(jī)污染的程度相關(guān),細(xì)菌總數(shù)越大,受污染的程度越嚴(yán)重。在日常生活中,我們每天都會(huì)接觸到由不同公司,不同地方生產(chǎn)的食品。所有食品中常見(jiàn)毒素有霉菌毒素,動(dòng)物性天然毒素和植物性天然毒素;常見(jiàn)的霉菌毒素有黃曲霉毒素,展青霉毒素,棉酚和毒蘑菇。
2.2 檢測(cè)食品樣品中的致病菌
現(xiàn)代食品行業(yè),有很多有害的微生物嚴(yán)重危害食品的品質(zhì)和人們的健康,甚至?xí)鹨恍﹪?yán)重的疾病。低水平的病原菌污染,食品加工后導(dǎo)致菌體的“致傷”及食品其他成分的干擾等因素,使得傳統(tǒng)的檢測(cè)方法受到了一定的限制。因此,需及時(shí)發(fā)現(xiàn)致病菌,控制污染及其可能對(duì)人體健康產(chǎn)生的危害。分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得許多食品工作者得以尋求更為快速有效的方法來(lái)檢測(cè)病原菌,以期增加敏感性和顯著地減少檢測(cè)時(shí)間。
3 微生物檢測(cè)技術(shù)在食品安全中的運(yùn)用
3.1 食源性病原菌免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
該種微生物檢測(cè)技術(shù)使用的檢測(cè)儀器成本較低,具有較強(qiáng)的使用性,目前在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用較為廣泛。食源性病原菌免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)常用在大腸桿菌、李斯特菌、沙門(mén)氏菌等病菌的檢驗(yàn)上。
3.2 核酸探針技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
利用核酸探針技術(shù)能夠檢測(cè)出食品中金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、李斯特菌等,其中檢驗(yàn)單增李斯特菌時(shí)不用考慮樣品的純度,但是利用該種技術(shù)檢驗(yàn)時(shí)成本開(kāi)支較大,技術(shù)要求較高,大部分需要在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢驗(yàn)。
3.3 PCR技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
PCR技術(shù)具有較高的靈敏度,而且特異性較強(qiáng),在檢驗(yàn)食品致病菌方面具有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。它可以檢驗(yàn)出食品中含有的金黃色葡萄球菌、肉毒梭狀芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等。例如,有關(guān)專(zhuān)家利用PCR技術(shù)在較短的時(shí)間內(nèi)就能檢測(cè)出食品中含有的大腸埃希氏菌。
3.4 生物芯片技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
利用生物芯片技術(shù)通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)就能檢測(cè)食品中多種潛在的病菌,檢測(cè)效率高,操作簡(jiǎn)單,通常在短短的幾小時(shí)就能獲得檢測(cè)結(jié)果。例如,相關(guān)專(zhuān)家曾在6h內(nèi)檢測(cè)出食品中含有的致病菌。不過(guò)生物芯片技術(shù)難度較高,需要進(jìn)一步的研究,所以目前尚未在食品安全檢測(cè)中大范圍推廣。
3.5 生物傳感器檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
很多種微生物均能給食品帶來(lái)污染,例如病毒、真菌、細(xì)菌等其中細(xì)菌較為常見(jiàn),分為病原菌和腐敗菌兩類(lèi),腐敗菌本身并不會(huì)給人體造成傷害,只不過(guò)在分解食品過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的有毒物質(zhì),這些物質(zhì)往往會(huì)導(dǎo)致人體患病。如利用生物傳感器檢測(cè)技術(shù)能夠檢測(cè)枯草芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等腐敗菌的數(shù)目,而利用該技術(shù)能夠檢測(cè)出的病原菌包括李斯特菌、沙門(mén)氏菌、大腸桿菌等,能夠檢測(cè)出的毒素有真菌毒素、藻類(lèi)毒素和一些細(xì)菌毒素,尤其是黃曲霉毒素是目前發(fā)現(xiàn)毒性最厲害的真菌毒素,利用光纖免疫傳感器能夠檢測(cè)出0.05μg/L的黃曲霉毒素,不過(guò)該種方法尚未在食品安全中應(yīng)用。
4 微生物檢測(cè)技術(shù)在食品安全中檢測(cè)中的應(yīng)用前景
當(dāng)前,利用微生物對(duì)食品安全性進(jìn)行檢測(cè)主要憑借先進(jìn)的檢測(cè)儀器和新技術(shù),并且人們?cè)絹?lái)越注重檢測(cè)的準(zhǔn)確性和技術(shù)性。其中檢測(cè)儀器是食品安全檢測(cè)的重要工具,在科技發(fā)展推動(dòng)下越來(lái)越趨向于一體化、專(zhuān)業(yè)化、低能化發(fā)展,為食品安全的檢驗(yàn)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。對(duì)于一些新的食品安全檢測(cè)技術(shù)發(fā)展來(lái)看,它比較注重與生物技術(shù)融合,例如PCR技術(shù)、核酸探針技術(shù)等,例如還有些新的檢測(cè)技術(shù)需要進(jìn)一步研究,例如,生物傳感器技術(shù)、生物芯片技術(shù)等,因此要想將微生物檢測(cè)技術(shù)完全應(yīng)用在食品安全領(lǐng)域還有很長(zhǎng)的一段路要走。
5 結(jié)語(yǔ)
食品安全關(guān)系著人們的身體健康,甚至給人們的生命帶來(lái)嚴(yán)重威脅,因此相關(guān)部門(mén)應(yīng)加強(qiáng)微生物檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)方面的應(yīng)用研究,提高食品安全檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性,保證食品安全。
參考文獻(xiàn)
[1] 李勤.微生物檢測(cè)技術(shù)及其在食品安全中的應(yīng)用[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2012(9).
一、目前我國(guó)食品微生物檢測(cè)技術(shù)分析
目前我國(guó)的食品微生物檢測(cè)的重點(diǎn)項(xiàng)目包括大腸菌群、細(xì)菌總數(shù)以及致病細(xì)菌等等,這些指標(biāo)都與人體的健康有著密切的關(guān)聯(lián),并且這些檢測(cè)指標(biāo)能夠有效的反映食品生產(chǎn)企業(yè)的衛(wèi)生管理水平,同時(shí)也能夠準(zhǔn)確的反映待檢食品樣品的衛(wèi)生狀況,是衡量食品健康安全質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)。在通常的食品微生物檢測(cè)過(guò)程中,對(duì)于上述指標(biāo),只要其中一項(xiàng)指標(biāo)不符合相關(guān)的要求,則待檢食品樣品就可以被認(rèn)定為不合格。這些指標(biāo)之中,大腸菌群指標(biāo)是檢測(cè)的重點(diǎn),因?yàn)榇竽c菌群能夠準(zhǔn)確的反映出食品樣品是否存在著變質(zhì)現(xiàn)象。目前我國(guó)食品微生物檢測(cè)手段主要包括微生物生理生化試驗(yàn)、血清學(xué)分型鑒定、微生物形態(tài)觀(guān)察、噬菌體分型、試管凝集試驗(yàn)以及急性病毒試驗(yàn)等等,通過(guò)這些手段能夠準(zhǔn)確的反映食品樣品中的大腸菌群數(shù)量、致病菌種類(lèi)和數(shù)量以及細(xì)菌總數(shù)量等等。檢測(cè)過(guò)程對(duì)于試驗(yàn)手段有著很高的要求,目前所采用的實(shí)驗(yàn)手段主要有三糖帖試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、Kovac試驗(yàn)、糖醇解試驗(yàn)、明膠試驗(yàn)等等。目前食品微生物檢測(cè)中所使用的試驗(yàn)手段雖然具有很高的準(zhǔn)確性,但是相對(duì)比較的傳統(tǒng),而且操作不論是在繁瑣程度還是在耗時(shí)方面都有著一定的劣勢(shì)。
二、食品微生物檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展分析
1.放射測(cè)量法
放射測(cè)量法所測(cè)量的主要指標(biāo)是細(xì)菌代謝物中的C14放射量,其基本原理是將含有微量放射性C14的碳水化合物加入到細(xì)菌培養(yǎng)液之中,讓細(xì)菌在代謝的過(guò)程中分解這些碳水化合物,因?yàn)榧?xì)菌在代謝和繁殖的過(guò)程中會(huì)將培養(yǎng)液中的碳水化合物吸收并分解成為二氧化碳和水。細(xì)菌代謝物中的二氧化碳就會(huì)含有微量的具有放射性的C14,然后再利用放射性檢測(cè)儀器檢測(cè)細(xì)菌代謝物中的C14放射量,從而斷定細(xì)菌的代謝狀況,并進(jìn)而推定細(xì)菌的總量。利用這種放射性元素的測(cè)量方法能夠準(zhǔn)確的推定出食品樣品中的微生物總量,并且整個(gè)過(guò)程所花費(fèi)的時(shí)間更少,操作也更加的簡(jiǎn)單。
2.PCR技術(shù)
PCR技術(shù)是目前食品微生物檢測(cè)中科技含量較高的一項(xiàng)技術(shù),該項(xiàng)技術(shù)的基本操作流程是將食品樣品至于人為制造的高溫環(huán)境之中,微生物在高溫的條件之下其內(nèi)部的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生變性,同時(shí)雙鏈DNA分子會(huì)解旋成為單鏈DNA,在這過(guò)程充分完成之后立即將溫度降低,在相對(duì)低溫的環(huán)境之中,微生物中的DNA分子會(huì)發(fā)生逆反應(yīng)再次結(jié)合成雙鏈DNA,同樣也是在這個(gè)過(guò)程充分完成的基礎(chǔ)之上進(jìn)行再次的升溫,將整個(gè)過(guò)程循環(huán)往復(fù),循環(huán)次數(shù)一般限定在20至30次之間,整個(gè)過(guò)程大概需要60分鐘左右,在整個(gè)過(guò)程中微生物中的DNA分子會(huì)擴(kuò)大到原來(lái)數(shù)量的100倍以上,然后利用PCR技術(shù)能夠在非常短的時(shí)間之內(nèi)準(zhǔn)確的將食品樣品中的病原菌數(shù)量進(jìn)行推定。該項(xiàng)技術(shù)不僅時(shí)耗短,而且靈敏度極高,即便是食品樣品之中僅有一分子病原菌DNA,PCR技術(shù)也能夠準(zhǔn)確的將其檢測(cè)出來(lái)。并且PCR檢測(cè)技術(shù)的成本很低,對(duì)于特異性較高的病原菌也能夠準(zhǔn)確的進(jìn)行檢測(cè)。但是目前PCR技術(shù)仍有明顯的缺陷有待克服,就是對(duì)于操作的規(guī)范性要求很高,要求操作人員具有很高的熟練程度以保證PCR產(chǎn)品在檢測(cè)過(guò)程中能夠不被污染。目前我國(guó)食品微生物檢測(cè)過(guò)程中所使用的PCR技術(shù)已經(jīng)能夠涵蓋大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃葡萄球菌以及沙門(mén)氏菌等多種病原微生物。針對(duì)于PCR技術(shù)產(chǎn)品易污染的問(wèn)題,我國(guó)在PCR傳統(tǒng)理論的基礎(chǔ)之上延伸出了熒光定量PCR技術(shù),該技術(shù)應(yīng)用了熒光染料和探針技術(shù),利用熒光信號(hào)強(qiáng)度與新增產(chǎn)物數(shù)量成等比關(guān)系的原理,能夠更為準(zhǔn)確的推定食品樣品之中微生物的數(shù)量,并且將產(chǎn)品污染對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響大幅度的降低。
3.電阻抗技術(shù)
電阻抗技術(shù)主要是根據(jù)培養(yǎng)基在細(xì)菌培養(yǎng)前后的導(dǎo)電能力改變來(lái)推斷食品樣品之中細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖狀況,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中,細(xì)菌不斷的繁殖和代謝活動(dòng)會(huì)對(duì)培養(yǎng)基內(nèi)的物質(zhì)成分產(chǎn)生一定的影響,從而改變培養(yǎng)基的導(dǎo)電能力,細(xì)菌的繁殖和代謝能夠?qū)⒃九囵B(yǎng)基中導(dǎo)電能力較差的大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化成為導(dǎo)電能力較強(qiáng)的小分子物質(zhì),這就會(huì)改變整個(gè)培養(yǎng)基的導(dǎo)電性能,電阻抗技術(shù)正是利用了細(xì)菌繁殖代謝的這個(gè)特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行微生物生長(zhǎng)繁殖狀況的推定。該項(xiàng)技術(shù)的操作更為簡(jiǎn)便,耗時(shí)更短,具有很強(qiáng)的重復(fù)性,而且精確度也絲毫沒(méi)有受到影響,目前我國(guó)電阻抗技術(shù)已經(jīng)在食品微生物的檢測(cè)之中得到了非常廣泛的應(yīng)用,檢測(cè)細(xì)菌種類(lèi)包括沙氏門(mén)菌、支原體、菌落總數(shù)以及大腸桿菌等多種微生物。
三、結(jié)語(yǔ)
1、教學(xué)中出現(xiàn)的問(wèn)題
(1)基礎(chǔ)差,學(xué)習(xí)能力不足。由于2009年以來(lái)全國(guó)本科院校大量擴(kuò)招,本科院校規(guī)模加大,再加上2009年開(kāi)始高考人數(shù)下降,本科院校為了滿(mǎn)足生源數(shù)量,分?jǐn)?shù)線(xiàn)逐年下降,隨之而來(lái)的高職院校也為了生源數(shù)量逐年降低分?jǐn)?shù)線(xiàn)[1],學(xué)生的學(xué)習(xí)能力明顯不足,而且文理科學(xué)生基礎(chǔ)知識(shí)掌握的程度差別很大。在完成教師下達(dá)工作任務(wù)后,工作效率比較低,能夠獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)的學(xué)生比較少。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題,我們充分考慮文理科學(xué)生的差別,以及學(xué)生基礎(chǔ)知識(shí)掌握的差別,適當(dāng)精減原理性知識(shí)的介紹,并將基礎(chǔ)性的必須掌握的知識(shí)融入動(dòng)手實(shí)踐中,先進(jìn)行實(shí)操練習(xí),再補(bǔ)充理論知識(shí)。很多以往聽(tīng)過(guò)的知識(shí)沒(méi)學(xué)會(huì),而現(xiàn)在理論與實(shí)踐相結(jié)合后反而加深了記憶和理解,教學(xué)效果較好。而且我們嘗試采取“拉動(dòng)式”教學(xué)方法,讓學(xué)習(xí)能力較強(qiáng)的,知識(shí)掌握比較好的學(xué)生來(lái)帶動(dòng)基礎(chǔ)差的學(xué)生,形成“一對(duì)一”或“一對(duì)多”的學(xué)習(xí)小組,組長(zhǎng)和組員分開(kāi)考核,組員的進(jìn)步可以同時(shí)為組長(zhǎng)加分,從而實(shí)現(xiàn)共同學(xué)習(xí),共同進(jìn)步。教師轉(zhuǎn)變角色,以師傅帶徒弟的形式開(kāi)展深入性的教學(xué),融入學(xué)生當(dāng)中,及時(shí)發(fā)現(xiàn)學(xué)生的問(wèn)題,做學(xué)生隨身的“知識(shí)顧問(wèn)”。
(2)對(duì)職業(yè)素養(yǎng)的養(yǎng)成不夠重視?,F(xiàn)在的學(xué)生由于成長(zhǎng)環(huán)境比以往大大改善,即使來(lái)自由農(nóng)村的學(xué)生,吃苦耐勞的精神也比以往大大減少,很多學(xué)生拈輕怕重,思想懶惰,學(xué)習(xí)積極性不高,不注重養(yǎng)成學(xué)習(xí)習(xí)慣、職業(yè)精神,遇到問(wèn)題不會(huì)主動(dòng)解決,這跟學(xué)生們以往的學(xué)習(xí)習(xí)慣和生活習(xí)慣有很大關(guān)系,其實(shí)學(xué)生分?jǐn)?shù)差并不代表一切,而這部分學(xué)生往往缺乏信心、決心、恒心,如果這樣的學(xué)生進(jìn)入企業(yè)也不會(huì)有很好的發(fā)展,所以我們將學(xué)生的平時(shí)表現(xiàn)引入考核機(jī)制,并且經(jīng)常進(jìn)行技能比賽,這很大程度上刺激了學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情,調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性。
2、教學(xué)方法改革
2.1四步教學(xué)法
四步教學(xué)法由講解、示范、模仿、練習(xí)四個(gè)環(huán)節(jié)組成,主要教學(xué)目的是使學(xué)生理解和掌握某個(gè)知識(shí)點(diǎn)的理論與動(dòng)手操作。
第一步,講解。這里的講解要打破以往的教學(xué)方式,多以提問(wèn)、啟發(fā)、引導(dǎo)的方式,使學(xué)生對(duì)某個(gè)知識(shí)點(diǎn)產(chǎn)生興趣,進(jìn)行思考,完成問(wèn)題的解答,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)理論知識(shí)的充分理解和掌握。
第二步,示范。教師要圍繞“做什么、怎么做、為什么這樣做”三個(gè)方面來(lái)組織教學(xué),這一環(huán)節(jié)突出教師的示范作用,在示范過(guò)程中,教師對(duì)重點(diǎn)和難點(diǎn)應(yīng)該反復(fù)多次講解并操作,使學(xué)生們印象深刻,對(duì)重點(diǎn)難點(diǎn)內(nèi)容提起充分的重視,教師的示范對(duì)于規(guī)范學(xué)生的動(dòng)手操作起到了很好的教學(xué)效果。
第三步,模仿。在這一環(huán)節(jié)中,我們可以先讓幾個(gè)接受能力強(qiáng)的學(xué)生來(lái)模仿教師的操作,在模仿過(guò)程中其他學(xué)生也可以在同學(xué)的模仿中發(fā)現(xiàn)問(wèn)題,并進(jìn)一步加深印象,對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)起到激勵(lì)和鞏固的作用。
第四步,練習(xí)。在這一環(huán)節(jié)中,充分體現(xiàn)了學(xué)生的學(xué)習(xí)主動(dòng)性,練習(xí)中教師應(yīng)該活動(dòng)于學(xué)生中間,做學(xué)生隨身的指導(dǎo)和顧問(wèn),這便于學(xué)生與教師的溝通與交流,也便于教師及時(shí)發(fā)現(xiàn)學(xué)生的問(wèn)題,并對(duì)于學(xué)生中突出出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行總結(jié)并講解,從而實(shí)現(xiàn)理論與實(shí)踐的充分結(jié)合。也提高學(xué)生學(xué)習(xí)效率。
四步法對(duì)于初學(xué)《微生物檢測(cè)技術(shù)》學(xué)生來(lái)說(shuō)非常實(shí)用,教學(xué)效果較好。在學(xué)生初步掌握了微生物檢測(cè)的基礎(chǔ)知識(shí)和基本技能后,我們可以采用引導(dǎo)提示法進(jìn)一步提高學(xué)生們思考問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力。
2.2引導(dǎo)提示法
引導(dǎo)提示法是一種能力本位的教學(xué)法, 以培養(yǎng)學(xué)生的“關(guān)鍵能力” 為教學(xué)的最終目標(biāo)[2] 。從典型工作任務(wù)中總結(jié)學(xué)習(xí)內(nèi)容,設(shè)置不同學(xué)習(xí)情境訓(xùn)練職業(yè)技能,在情境中將知識(shí)點(diǎn)項(xiàng)目化,任務(wù)化。整個(gè)教學(xué)過(guò)程以技能培養(yǎng)為明顯,理論知識(shí)為暗線(xiàn),把理論知識(shí)點(diǎn)的教學(xué)融合到基本技能的訓(xùn)練之中[3]。
具體教學(xué)步驟如下:下達(dá)任務(wù)收集信息設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案統(tǒng)一方案實(shí)施檢查與考核
(1)下達(dá)任務(wù)。將項(xiàng)目任務(wù)書(shū)發(fā)給學(xué)生,并對(duì)任務(wù)做簡(jiǎn)單陳述。
(2)收集信息。學(xué)生利用書(shū)籍、網(wǎng)絡(luò)等資源自己收集相關(guān)信息資料。培養(yǎng)學(xué)習(xí)能力、理解能力和歸納總結(jié)能力。調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)主動(dòng)性。
(3)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。通過(guò)小組討論的方法制定實(shí)驗(yàn)方案。
(4)統(tǒng)一方案。小組發(fā)言闡述,在老師的指導(dǎo)下確定最終的試驗(yàn)方案
(5)實(shí)施。以統(tǒng)一的試驗(yàn)方案為標(biāo)準(zhǔn),獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問(wèn)題、實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行記錄。對(duì)出現(xiàn)的問(wèn)題和實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論和分析。由教師解答和點(diǎn)評(píng)。
(6)檢查與考核。分為階段性項(xiàng)目考核和終期考核,每次考核都包括理論和技能兩部分。
①在教學(xué)中要求學(xué)生嚴(yán)格考勤,通過(guò)任務(wù)分配、效果點(diǎn)評(píng)和整理實(shí)訓(xùn)室等形式培養(yǎng)學(xué)生的敬業(yè)精神。
②對(duì)學(xué)生進(jìn)行安全教育,在實(shí)驗(yàn)操作和報(bào)告填寫(xiě)等教學(xué)環(huán)節(jié)中,督導(dǎo)學(xué)生嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)范,培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)、細(xì)致、認(rèn)真的職業(yè)道德。
③在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,學(xué)生合作完成檢驗(yàn)項(xiàng)目,以培養(yǎng)學(xué)生的團(tuán)隊(duì)合作精神。
關(guān)于教學(xué)評(píng)價(jià),包括階段性項(xiàng)目考核與終期考核。階段性項(xiàng)目考核占50%,終期考核占50%。終期考核采用理論考試+實(shí)踐考試的方式進(jìn)行考核。其中理論考試與實(shí)踐考試的比例為4:6。
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