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懶惰蟲范文第1篇

撐不住成本壓力

先說航空業(yè)。

6月30日，紐約市場原油期價再創(chuàng)新高，突破每桶143美元。而油價變動對航空業(yè)來說最為敏感，國際航空運輸協(xié)會數(shù)據(jù)顯示，燃油開支在航空公司總成本所占比重也由原來的13%飆至35%。

國內(nèi)第一家貨運航空公司揚子江快運甚至停止普貨業(yè)務(wù)。揚子江快運新任總裁孫洪祥說，“今年的航空貨運的價格比去年同期降低了4%到5%，而此次油價又大幅上漲，貨運的利潤也就是3%到5%，以目前的價格不大可能賺錢了?！?/p>

在當前情況下，油價每上漲1%航空企業(yè)利潤將減少4%。

在國際貨運市場，中國籍航空公司的市場份額不足30%，利潤更高的國際航線還主要被外資航空公司壟斷。

專門從事航空貨運的翡翠航空執(zhí)行副總裁蘇總介紹，其國內(nèi)航線貨運價格調(diào)整申請已經(jīng)提交，正等待批復(fù)之中。因為國際航線貨運價格調(diào)整權(quán)在貨運航空公司自身，在油價大幅度上漲后，他們已經(jīng)調(diào)整了國際航線貨運價格。至于國內(nèi)航線貨運價格很多年來都沒有任何變化。

另一方面，隨著國際商品出口的益增放緩，國內(nèi)的航空運輸市場還面臨運力過剩的問題。目前國內(nèi)已有130個機場在運營，而據(jù)國際空運市場預(yù)計，未來10年內(nèi)中國還將建設(shè)48個新機場。運力已經(jīng)開始飽和過剩。競爭日益激烈，使到航空公司的利潤率越來越低，甚至開始虧損。

深航相關(guān)負責人表示，7月1日調(diào)整的燃油附加費雖然在一定程度上緩解了航空企業(yè)運營成本壓力，但航空公司的成本壓力“還有很大距離”，只能說部分抵消，絕對不是全部抵消，航空公司運營的成本壓力現(xiàn)在依舊很大，僅目前的上調(diào)，遠遠沒有緩解油價帶來的沖擊。

鐵路或首現(xiàn)虧損

再說鐵路運輸。

盡管市場大部分焦點在高油價對航空業(yè)的影響，但能源成本對鐵路運輸業(yè)影響更大，而柴油價格上漲對鐵路運營的影響更大，因為中國的鐵路電氣化率截至去年底僅32.7%，意味著多數(shù)鐵路線仍在使用柴油機車。

對此，中國鐵路運輸業(yè)終于打破了沉默。鐵道部發(fā)言人王永平指出，由于燃油成本上升，加上雪災(zāi)和四川地震導(dǎo)致鐵路運輸受阻，中國鐵路業(yè)可能十年來首次報告虧損。

隨即，國家發(fā)展和改革委員會、鐵道部宣布，從今年7月1日起，調(diào)整國家鐵路貨物統(tǒng)一運價。整車貨物運價每噸公里上調(diào)3分至7分，集裝箱1噸箱上調(diào)3.69分，20英尺箱和40英尺箱分別上調(diào)1.0374元和1.6374元。

市場人士認為，從運輸收費情況來看，運營價格收費只是其中一個部分，雜費的支出也占據(jù)重要比例，因此此次調(diào)整對部分上市公司運輸成本支出并不大。而且從市場的實際運作經(jīng)驗來講，通過稍微提高消費產(chǎn)品價格，很容易就能夠化解貨運成本支出增加的壓力。

廣深鐵路和大秦鐵路的燃料成本占銷售成本的20%左右。廣深鐵路約40%的火車使用柴油發(fā)動機。對此，瑞銀預(yù)計，廣深鐵路今年單位成本將增8%左右。

到了生死邊緣

最后說公路運輸。

國內(nèi)長途運輸企業(yè)面臨著更高的運輸成本。據(jù)一位交通運輸行業(yè)分析師介紹，長途汽車貨運企業(yè)除了面臨用油成本上漲的壓力，宏觀經(jīng)濟帶來貨量減少，也使得貨運企業(yè)的經(jīng)營環(huán)境面臨著嚴峻考驗。

河南知名的長通運輸有限公司董事長楊志萍直言將“帶頭漲價”。

面對油價上漲的成本壓力，有實力的企業(yè)可以利用市場優(yōu)勢地位強行漲價，而更多的小企業(yè)是在咬緊牙關(guān)，拼命死扛。

“我們快跑不起了，利潤幾乎為零了?！北本┛v橫經(jīng)緯物流公司總經(jīng)理黃金偉苦笑著說，“這次漲價是近幾年壓力最大的一次。對于我們這些小企業(yè)來說幾乎是不可能完成的任務(wù)。”一升油多漲了1元，從北京到石家莊一個來回就要多出200多元。物流運輸成本主要是耗油費用、過路費、管理費、司機工資等，這些成本已經(jīng)占到整個物流成本的80%以上，而油費則直接占到1/3~1/2左右，油價的上漲直接提高了經(jīng)營成本，生存壓力劇增。“再漲一分錢也可能成為壓垮我們的最后一根稻草。”

懶惰蟲范文第2篇

為什么美國縮減QE規(guī)模就導(dǎo)致A股大漲呢？美國實行緊縮貨幣政策之后，美元就升值，這樣其他國家熱錢就會回籠到美國，這樣導(dǎo)致中國的熱錢回流到美國，如果熱錢大肆回流到美國，那么，中國經(jīng)濟目前面臨的兩大問題：一是經(jīng)濟結(jié)構(gòu)的調(diào)整，二是地方債務(wù)的問題就會爆發(fā)，這樣，中國經(jīng)濟的“軟著陸”很難實現(xiàn)，那么，中國經(jīng)濟將要出現(xiàn)新的問題，因此當美國縮減QE規(guī)模，在這三天時間里我們看到了市場大肆上漲，而且上漲的大多數(shù)是我們上周分析的高鐵等運輸設(shè)備板塊以及港口等交通設(shè)施板塊，以藍籌股居多。

反觀深市的主板和中小板以及創(chuàng)業(yè)板指數(shù)就沒有滬市的大盤指數(shù)上漲力度大，并且創(chuàng)業(yè)板指數(shù)和中小板指數(shù)出現(xiàn)縮量調(diào)整跡象，種種跡象表明在目前“滬港通”還不能開通的情況下，美國QE縮減也會重現(xiàn)點燃藍籌股行情。在所有的藍籌股當中，有很多藍籌股還沒有大幅啟動，我們看看哪些藍籌股在未來機會明顯？

新華保險（601336）：公司歷史悠久并且為中國最大的個人壽險產(chǎn)品提供商之一。根據(jù)中國保監(jiān)會的數(shù)據(jù)，以保險保費數(shù)據(jù)收入計算，在2014年上半年，壽險收入668億元，同比增長30%，市場占有率8.7%，位列中國保險市場第三位。自2013年12月底，匯金公司增持該公司約占總股本的31.34%。

應(yīng)該說，整個保險類板塊，之前都沒有大幅啟動，但是，新華保險公司在最近7個交易日當中，迅速拉出新的上升通道，建議積極關(guān)注，止損價：24元。

大唐發(fā)電（601991）：公司是京津唐電網(wǎng)最大的獨立發(fā)電公司，并且在山東、甘肅、云南等地擁有運營電廠，已經(jīng)發(fā)展成為一家全國性的發(fā)電公司。截止2014年6月30日，公司管理裝機容量中水電為4934兆瓦，占12.44%。2014年7月，公司與國新公司就煤氣化項目進行了重組，公司控股的多倫煤化工是年產(chǎn)46萬噸的煤化工項目已經(jīng)達到使用狀態(tài)，該項目總投資162億元。

從該公司技術(shù)形態(tài)來分析，該股從今年7月大盤上漲以來，并沒有大幅上漲，一直處于橫盤情況，建議積極關(guān)注這樣橫盤整理的個股，止損價：3.90元。

懶惰蟲范文第3篇

有一次要考試了，在考試的前一天晚上，小明把不會的內(nèi)容多看一遍，不會的字抄十遍，等覺得自己可以考100了才去睡覺，而小亮呢，他跑到樓下打鬧去了。

到了考試的那一天，數(shù)學下課，小明又把考試的內(nèi)容復(fù)習了一遍。

上課鈴響了，同學們興沖沖的跑進教室。開始考試了小亮一道題都不會做，全是亂猜的，同桌小明為了不讓小亮抄答案就用書擋住了。下課了，老師讓組長收試卷送到辦公室。小明又看了一遍語文書，看她寫的對不對。

懶惰蟲范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 多重耐藥性；革蘭氏陰性桿菌；Ⅰ類整合子；基因擴增

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-7210（2013）04（c）-0091-04

抗生素作為治療人類感染性疾病的主要藥物，其臨床有效性是人類健康的重要保障。但是目前因抗生素的濫用和使用不當導(dǎo)致出現(xiàn)大量的耐藥細菌，細菌耐藥性的存在大大降低了抗生素的臨床治療效果并大幅增加了疾病治療的成本[1]。但是，因抗生素的研發(fā)周期較長，抗生素更新的速度遠低于細菌耐藥性產(chǎn)生的速度。目前，我國已成為當今世界抗生素濫用程度和使用量最大的國家[2]，并且每年都在大幅增加。在感染性疾病中，因革蘭陰性桿菌[3]所致的疾病占主要比例，抑制革蘭陰性桿菌耐藥性的產(chǎn)生對于感染性疾病的治療具有重要的臨床意義。國外早在20世紀80年代末即對細菌耐藥基因的水平傳播進行了研究，并通過實驗證細菌耐藥基因的傳播與一種稱為整合子的移動基因原件有著密切的關(guān)系[4]。關(guān)于整合子，目前研究證實其為一類可特異性識別并捕獲移動基因盒的基因重組系統(tǒng)，能夠通過整合耐藥性相關(guān)的基因盒而使細菌的耐藥性在細菌間水平傳播[5]。研究發(fā)現(xiàn)，在細菌中目前主要存在Ⅰ類、Ⅱ類、Ⅲ類這3種整合子[6]，且以Ⅰ類整合子的存在比例最大，該類整合子與細菌特別是革蘭陰性桿菌的多重耐藥性的產(chǎn)生有密切關(guān)系。探明Ⅰ類整合子在革蘭陰性桿菌中的功能和其結(jié)構(gòu)對于抑制細菌耐藥性的產(chǎn)生、提高抗生素的治療效果而言是一項重要的工作。本研究以多重耐藥銅綠假單胞菌和多耐藥的鮑曼不動桿菌為研究對象，對其體內(nèi)的Ⅰ類整合子的功能和結(jié)構(gòu)進行了研究分析，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 菌株來源

選擇溫嶺市婦幼保健院2009年7月～2011年10月的多重耐藥革蘭陰性桿菌80株，其中銅綠假單胞菌40株，鮑曼不動桿菌40株。分離自呼吸科病房15株（銅綠假單胞菌7株，鮑曼不動桿菌8株），腎內(nèi)科病房12株（銅綠假單胞菌5株，鮑曼不動桿菌7株），消化科病房12株（銅綠假單胞菌9株，鮑曼不動桿菌3株），腫瘤科病房14株（銅綠假單胞菌6株，鮑曼不動桿菌8株），泌尿外科病房13株（銅綠假單胞菌5株，鮑曼不動桿菌8株），血液科病房14株（銅綠假單胞菌5株，鮑曼不動桿菌9株）。40株銅綠假單胞菌中，分離于血液標本5株，痰標本17株，尿標本9株，膿標本6株、其他3株；40株鮑曼不動桿菌中，分離于尿標本11株、痰標本7株、血液標本12株、膿標本7株，其他3株。細菌的篩選與純化均由全自動微生物鑒定系統(tǒng)完成（法國梅里埃公司，VITEC-2 COMPACT），細菌純度一致，無其他雜菌，對實驗結(jié)果無影響。

1.2 試劑與儀器

主要試劑：瓊脂（天跟生化公司），溴化乙錠（天跟生化公司），限制性內(nèi)切酶 HinfⅠ（大連寶生物工程有限公司），瓊脂糖（杭州天和微生物試劑有限公司），無菌蒸餾水（屈臣氏蒸餾水，經(jīng)滅菌自制），2×Taq PCR Master Mix（大連寶生物工程有限公司），10×H buffer（大連寶生物工程有限公司），dNTP（杭州天和微生物試劑有限公司），DNA聚合酶（上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司）、藥敏紙片（OXOID公司生產(chǎn)，分別含有阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢哌酮-舒巴坦、環(huán)丙沙星、亞胺培南、氨曲南、頭孢克定、復(fù)方新諾明、鏈霉素、氯霉素、阿米卡星、頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢克肟、頭孢西丁、鏈霉素、頭孢他定等藥物）。

主要儀器：無菌操作臺（蘇州凈化設(shè)備廠生產(chǎn)），恒溫水浴箱（天津大學精密儀器廠），ZF-302型紫外分析儀（梅特勒公司生產(chǎn)），M1706700PCR擴增儀（Thermo 公司生產(chǎn)），臺式高速離心機（BECKMAN公司生產(chǎn)），恒溫培養(yǎng)箱（永生生物儀器公司生產(chǎn)），電泳儀（北京六一儀器廠生產(chǎn)），凝膠成像分析系統(tǒng)（GIS-2010，上海天能科技有限公司）

1.3 研究方法

為闡明Ⅰ類整合子在革蘭氏耐藥桿菌中的功能與其結(jié)構(gòu)，在本次研究中，首先對細菌的耐藥性、耐壓細菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ELSBs）的情況進行了考察。篩選出耐藥且產(chǎn)ELSBs的菌株后，通過PCR技術(shù)對Ⅰ類整合子的存在情況進行了考察，并通過電泳和基因測序以及Sourthen雜交實驗對Ⅰ類整合子的基因結(jié)構(gòu)、基因定位等方面進行了考察，具體方法如下所示：

1.3.1 實驗試劑的配制

溴化乙錠（10 mg/mL）的配制方法為，精密稱量溴化乙錠1 g，使用100 mL去離子水進行溶解，充分震蕩直至其完全溶解，隨后轉(zhuǎn)入棕色容量瓶中，避光低溫下保存，備用。瓊脂糖凝膠的配制方法，精密稱取理論量的瓊脂糖，使用l×TAE緩沖液對其進行潤濕，隨后放入微波爐中使之融化，融化后待其冷卻至60℃時，加入適量溴化乙錠溶液，充分震蕩使之均勻，使制備的濃度為0.5 μg/mL。

1.3.2 藥敏實驗

在本次研究中，使用藥敏實驗對銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的耐藥性進行了評價。實驗方法為紙片法，主要分為K-B紙片法藥敏檢測實驗和雙紙片協(xié)同實驗[7]，前者測定受試菌株的藥物敏感性，后者測定菌株體內(nèi)ELSBs的存在情況。

1.3.2.1 K-B紙片法 將瓊脂加熱融化，制備無菌瓊脂培養(yǎng)平板，板厚約1 cm，備用。將銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌用麥氏比濁管進行濃度校正，配制0.5麥氏濁度的細菌溶液，并將多余菌群濾去，使菌液均勻。隨后，于無菌操作臺內(nèi)使用無菌棉簽沾取標準濃度的細菌溶液，以涂布的方法將細菌接種于瓊脂培養(yǎng)平板之中。平板接種后，將其置于室溫下自然干燥3～5 min，隨后將含有一定量抗生素藥物的紙片緊貼于平板表明。圓形紙片中心距離約24 mm，紙片與平板內(nèi)緣的距離保持在15 mm左右。紙片貼在培養(yǎng)平板以后，其中所含的藥物在吸收瓊脂內(nèi)水平的情況下逐漸向四周擴散，形成具有遞減特點的藥物部分平板。紙片于瓊脂平板上覆蓋完全后，將其置于37℃溫度下培養(yǎng)18 h。培養(yǎng)結(jié)束后根據(jù)最低抑菌濃度法（MIC）的原理并參照美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）標準[8]測量抑菌圈的大小，對銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的耐藥性進行評價。

1.3.2.2 雙紙片協(xié)同實驗 ELSBS是革蘭陰性細菌中的耐藥機制產(chǎn)生的一個重要因素，該酶的與Ⅰ類整合子的存在有著密切關(guān)系，對于闡述Ⅰ整合子陽性細菌多重耐藥產(chǎn)生的原因有重要意義。在本次實驗中，其操作為：使用麥氏比濁管制備0.5麥氏濁度的細菌混懸液，使用無菌操作方法將其均勻涂布于瓊脂平板上，將含有阿莫西林-克拉維酸的含藥紙片緊貼在平板中央，以該紙片為中心，于其周圍25 mm處分別貼上含有頭孢拉定、頭孢曲松、頭孢呋辛、氨曲南的藥敏紙片作為ELSBS的指示劑，在35℃下對其進行培養(yǎng)18 h。平板培養(yǎng)完畢后，觀察抑菌圈的變化，若抑菌圈朝著阿莫西林-克拉維酸方向有擴大現(xiàn)象，則說明該類菌株體內(nèi)產(chǎn)生ELSBS。

1.3.3 Ⅰ類整合子基因PCR擴增

基因的擴增原理[9]為以目的基因的單鏈DNA為模版，在DNA聚合酶的作用下與含有3'、5'末端的互補DNA引物結(jié)合，按照半保留復(fù)制的擴增法則進行。在擴增過程中，DNA分子依次經(jīng)歷了變性、退火、延伸三個過程，并依次循環(huán)重復(fù)上述過程而逐漸實現(xiàn)DNA的擴增。在本次實驗中，從耐藥和產(chǎn)生ELSBs的兩類耐藥菌株中分別隨機選取25株，共計50株，其進行PCR擴增時，分別對針對Ⅰ類整合子的保守區(qū)和可變區(qū)進行了相應(yīng)的擴增，旨在實現(xiàn)對Ⅰ類整合子結(jié)構(gòu)的分析。

1.3.3.1 基因模版的制備與擴增引物的設(shè)計 DNA的模版制備即為基因擴增的倒序行為，其過程則為延伸、退火、變性。本次研究中，使用煮沸法對DNA擴增模版進行了制備。具體操作為：將銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌于無菌條件下接種于瓊脂培養(yǎng)平板上，37℃的溫度下培養(yǎng)24 h。精密量取1 mL生理鹽水加入麥氏比濁管中，隨后使用無菌針挑取瓊脂平板中的菌落，按照麥氏比濁法的操作方法制備5個麥氏濁度的細菌混懸液。所制備的菌液倒入離心管中，5000 r/min離心5 min，取上清液，隨后加入300 μL無菌蒸餾水并置于水浴鍋中煮沸10 min，煮沸后轉(zhuǎn)入冰箱進行快速冷卻3 min。菌液冷卻后進行10 000 r/min離心10 min，將上清液除去，所制備的沉淀物即為DNA模版，轉(zhuǎn)入-20℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

引物設(shè)計方面，參照GeneBank上所公布的基因序列和Ⅰ類整合子的整合酶結(jié)構(gòu)特點，使用Primer Prernier 5.0軟件分別對Ⅰ類整合子的保守區(qū)和可變區(qū)的引物進行了設(shè)計?？勺儏^(qū)的上游引物結(jié)構(gòu)為5'-GGCATCCAGGACGCAAGT-3'，下游引物結(jié)構(gòu)為5'-AAGCAGATTGACCTGAG-3'，引物片段設(shè)計長度為800～3200 bp。保守區(qū)的上游引物結(jié)構(gòu)為5'-ATCGCAArAGTTGGCGAAGT-3'（qaeE1-F），下游引物結(jié)構(gòu)為5'-GCAAGGCGGAAACCCGCGC-3'（sul 1-B），理論設(shè)計長度為800 bp。

1.3.3.2 Ⅰ類整合子保守區(qū)的PCR擴增 在DNA擴增時，其體系包括聚合引物、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、基因模版、DNA聚合酶以及含有Mg2+的緩沖溶液?；诖朔磻?yīng)體系，在50 μL的PCR擴增反應(yīng)室，分別加入0.5 μL Ex Taq溶液、5 μL的10×Ex Taq緩沖溶液、dNTP混合物5 μL，含有理論量上游引物溶液1 μL，DNA模版溶液4 μL，無菌蒸餾水33.5 μL。擴增條件為：95℃溫度下預(yù)變性5 min，隨后94℃溫度下反應(yīng)30 s，60℃保持30 s，72℃ 1 min，共計循環(huán)30次，最后在72℃的情況下使所擴增的DNA延伸10 min。

1.3.3.3 Ⅰ類整合子可變區(qū)的PCR擴增 對Ⅰ類整合子的保守區(qū)進行PCR擴增后，通過測定含有標志性基因片段qaeE1-F和sul 1-B的陽性出現(xiàn)率篩選出Ⅰ類整合子陽性的多重耐藥菌株。在Ⅰ類整合子陽性的銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌中隨機抽取40株，每類細菌20株。根據(jù)“1.3.3.1”中的底物設(shè)計方法和模版制作方法設(shè)計底物，隨后在可變區(qū)擴增反應(yīng)體系中對Ⅰ類整合子的可變區(qū)進行PCR擴增。反應(yīng)體系為（50 μL）：依次加入0.5 μL Ex Taq溶液、5 μL dNTP混合物溶液，5 μL 10×Ex Taq buffer、可變區(qū)上下游擴增引物各1 μL、隨后加入4 μL DNA模板標準溶液并用無菌蒸餾水33.5 μL稀釋至反應(yīng)體積。循環(huán)參數(shù)為：95℃預(yù)變性3 min，94℃、62℃各30 s，72℃ 30 s，組后再72℃ 6 min，使擴增產(chǎn)物充分延伸，循環(huán)次數(shù)為30次。

1.4 擴增產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)分析

1.4.1 Ⅰ類整合子保守區(qū)的基因序列測定與分析

Ⅰ類整合子保守區(qū)PCR擴增后，取產(chǎn)物7 μL，使用Ph 8.0且含有0.50 μg/mL溴化乙錠的2%瓊脂糖凝膠對產(chǎn)物進行電泳分析，電壓100V，電泳時間30 min，確定Ⅰ類整合子的典型擴增帶，電泳后的PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)回收后送往專業(yè)測序機構(gòu)進行純化與測序。

1.4.2 Ⅰ類整合子可變區(qū)的基因測序與分析

Ⅰ類整合子可變區(qū)擴增產(chǎn)物經(jīng)純化后，取PCR產(chǎn)物8 μL、10×H buffer溶液2 μL、HinfI溶液1 μL（5 μg/μL）置于反應(yīng)體系中，隨后使用可變區(qū)基因限制性內(nèi)切酶HinfⅠ對擴增產(chǎn)物進行酶切分析，于37℃下水浴處理4 h。酶切處理完成后，對其基因片段進行電泳分析，篩選出出現(xiàn)頻率最高的片段，并將其送至專業(yè)測序公司進行純化與測序分析。序列測定后，通過登錄GeneBank進行基因比對，確定可變區(qū)內(nèi)的基因盒種類。

1.5 整合子定位分析

為明確Ⅰ類整合子的具置，對所有Ⅰ類整合子陽性的菌株的整合子基因進行了Sourthen雜交實驗。按照Sourthen雜交實驗的操作方法和所用試劑盒的操作指南，對Ⅰ類整合子的基因定位進行了評價。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

藥敏實驗結(jié)果顯示，40株銅綠假單胞菌中出現(xiàn)多重耐藥性的菌株為36株，40株鮑曼不動桿菌中出現(xiàn)多重耐藥性的菌株為37株。ELSBs測定實驗顯示，36株多重耐藥的銅綠假單胞菌中有27株產(chǎn)生ELSBs，占總菌株的百分比為67.5%（27/40），37株多耐藥的鮑曼不動桿菌中28株產(chǎn)生了ELSBs，占總菌株的百分比為70.0%（28/40）。對耐藥且產(chǎn)生ELSBs的細菌進行基因PCR擴增和測序的結(jié)果顯示，25株多重耐藥銅綠假單胞菌中同時出現(xiàn)基因片段qaeE1-F和sul 1-B陽性的菌株23株，25株多重耐藥的鮑曼不動桿菌中同時出現(xiàn)基因片段qaeE1-F和sul 1-B陽性的菌株22株。保守區(qū)作為基因的非可變區(qū)域，其基因片段具有特異性的特點，qaeE1-F和sul 1-B作為Ⅰ類整合子保守區(qū)的基因片段，當這兩種片段同時出現(xiàn)時，即表示該類細菌體內(nèi)含有Ⅰ類整合子。換言之，通過對Ⅰ類整合子的保守區(qū)基因的擴增和測序，最終結(jié)果顯示，40株銅綠假單胞菌中Ⅰ類整合子陽性的菌株數(shù)為23株，陽性率為57.5%（23/40）；40株鮑曼不動桿菌中Ⅰ類整合子陽性的菌株數(shù)為22株，陽性率為55.0%（22/40）。此外，對保守區(qū)進行電泳實驗結(jié)果顯示，位于324 bp擴增帶附近的基因序列可能為Ⅰ類整合子的基因區(qū)域。在Ⅰ類整合子可變區(qū)的擴增與測序方面，使用限制性內(nèi)切酶對可變區(qū)基因擴增產(chǎn)物進行分酶切分析和電泳實驗結(jié)果顯示，長度為0.15、1.00、2.00、2.30 kb的基因片段出現(xiàn)的頻率較高，經(jīng)測序證實，0.15 kb含有Ⅰ類整合子保守區(qū)的基因結(jié)構(gòu)qaeE1-F和sul 1-B。1.00、2.00、2.30 kb長度的基因分別為aadA、aaeA4、catB8基因盒。Sourthen雜交實驗結(jié)果顯示，在所有Ⅰ類整合子陽性的菌株中，銅綠假單胞菌23株中Ⅰ類整合子位于質(zhì)粒上的菌株共18株，比例為78.3%（18/23），22株鮑曼不動桿菌中Ⅰ類整合子位于質(zhì)粒上的菌株共17株，比例為73.9%（17/23）。通過上述結(jié)果可以看出，革蘭陰性細菌的耐藥性、ELSBs的產(chǎn)生與Ⅰ類整合子的存在有著密切的關(guān)系。

3 討論

細菌多重耐藥性的產(chǎn)生，不僅大大增加了疾病治療的成本，同時給抗生素的研發(fā)與使用也帶來了巨大的壓力。Ⅰ類整合子作為多重藥性細菌體內(nèi)的一個重要基因部件[10]，目前越來越多的研究證實其與細菌耐藥性的遺傳和變異有著密切的關(guān)系。在Ⅰ類整合子的檢測方面，目前已PCR擴增技術(shù)為主，通過對Ⅰ類整合子基因保守區(qū)和可變區(qū)的基因結(jié)構(gòu)的分析實現(xiàn)對Ⅰ類整合子功能和結(jié)構(gòu)的研究。通過大量的研究證實，Ⅰ類整合子在胃腸疾病的致病菌中存在的比例較高，且以銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌較多[11]。在本次研究中，以銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌為研究對象，對Ⅰ類整合子在多耐藥革蘭陰性桿菌中的功能和其基因結(jié)構(gòu)特點進行了研究與分析，使用藥敏實驗篩選出了多重耐藥且產(chǎn)ELSBS的銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌，以篩選出的菌株為研究對象，通過PCR擴增和基因測序發(fā)現(xiàn)，qaeE1-F和sul 1-B這兩個基因序列為Ⅰ類整合子的保守區(qū)的特征基因序列，兩種序列的同時出現(xiàn)即可判定該株細菌體內(nèi)攜帶有Ⅰ類整合子。通過對比可發(fā)現(xiàn)，Ⅰ類整合盒子的陽性率與細菌的耐藥性的出現(xiàn)有著較好的一致性。雖然有研究稱，qaeE1-F和sul 1-B兩者出現(xiàn)一個即可判定細菌攜帶有Ⅰ類整合子，但有研究證實，qaeE1-F和sul1-B的單一出現(xiàn)與整合子陽性檢出之間并不具有相關(guān)性，說明細菌在耐藥性產(chǎn)生的同時存在著變異的現(xiàn)象[12-13]。因此，在本次研究中，將保守區(qū)兩種特征基因片段的同時出現(xiàn)作為Ⅰ類整合子的陽性檢出憑證更為合理。保守區(qū)的基因測序和分析結(jié)果不僅證實了，qaeE1-F和sul 1-B兩種基因片段的存在，也從側(cè)面證實了這兩種基因片段為Ⅰ類整合子所必備的基因結(jié)構(gòu)，是細菌多重耐壓性產(chǎn)生的必要條件。

保守區(qū)的PCR擴增和測序結(jié)果顯示，Ⅰ類整合子在324 kb擴增帶處集中出現(xiàn)，且以0.15、1.00、2.00和2.30kb長度的基因片段的出現(xiàn)頻率最高，通過測序證實0.15 kb基因片度還有Ⅰ類整合子保守區(qū)的結(jié)構(gòu)，其他三種片度則對應(yīng)著aadA、aaeA4、catB8這兩種基因盒。該結(jié)果表明，可變區(qū)雖然為Ⅰ類整合子的基因可改變區(qū)域，但其所含的特征基因盒和攜帶的保守區(qū)的基因片段并不會出現(xiàn)大幅度改變，該性能也是保持Ⅰ類整合子基因傳播功能的基礎(chǔ)保障。Sourthen雜交實驗發(fā)現(xiàn)大部分的Ⅰ類整合子位于細菌質(zhì)粒上，這種基因定位方式為Ⅰ類整合子的完整傳播特性也提供了結(jié)構(gòu)保障[14-16]。

目前關(guān)于Ⅰ類整合子的研究還處于起步階段，Ⅰ類整合子的結(jié)構(gòu)和功能的研究依然無法滿足抑制細菌耐藥性產(chǎn)生的需要。在整合子的研究中，除了Ⅰ類整合子以外，也發(fā)現(xiàn)了Ⅱ類和Ⅲ類整合子，僅僅研究其中的一種對于完全闡釋細菌耐藥機制的產(chǎn)生是遠遠不夠的。在將來的研究中，更為綜合地研究細菌整合子的功能與結(jié)構(gòu)以及探索新型的耐藥機制相關(guān)的基因部件依然是當前細菌耐藥研究領(lǐng)域中的一項重要任務(wù)。

[參考文獻]

[1] 陳民鈞，王輝.中國重癥監(jiān)護病房革蘭陰性細菌耐藥性連續(xù)7年監(jiān)測研究[J].中華醫(yī)學雜志，2003，83（5）：375-381.

[2] 糜祖煌，黃支密，秦玲.鮑氏不動桿菌耐藥性和氨基糖曹類修飾酶、內(nèi)酞胺酶基因研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2008，14（9）：968-971.

[3] Zavascki AP，Carvalhaes CG，Picao RC，et al. Multidrug-resistant Pseu-domonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii：resistance mechanisms and implications for therapy [J]. Expert Rev Anti Infect Ther，2010，8（1）：71-93.

[4] 凌華志，徐元宏，李濤，等.739株革蘭陰性桿菌中Ⅰ類整合子的分布及其基因盒結(jié)構(gòu)分析[J].臨床檢驗雜志，2010，28（4）：312-314.

[5] 李超，周鐵麗，劉慶中，等.細菌整合子及其介導(dǎo)的耐藥研究進展[J].中華醫(yī)學檢驗雜志，2007，30（2）：227-230.

[6] 林麗，凌保東，張翔，等.鮑曼不動桿菌Ⅰ類整合子與多重耐藥相關(guān)性研究[J].中國抗生素雜志，2010，1（35）：54-58.

[7] Hall RM，Collis CM. Mobile gene cassettes and integrons：capture and spread of genes bysite-specific recombination [J]. Mol Microbiol，1995，15（4）：593-596.

[8] Ramirez MS，Bello H，Gonzalez RG，et al. Tn7：In2-8 dispersion in multidrug-resistant isolates of Acinetobacter baumannii from Chile [J]. Rev Argent Microbiol，2010，42（2）：138-140.

[9] 郭慶蘭.耐藥性播散機制進展-整合子-基因匣子系統(tǒng)[J].國外醫(yī)學：分子生物學分冊，2002，12（10）：24-30.

[10] Jones ME，Peters E，Weersink AM，et al. Widespread occurrence of integrons causing multiple antibiotic resistance inbacteria [J]. Lancet，1997，349（9067）：1742-1743.

[11] 黃支密，陳榆，毛培華，等.鮑曼不動桿菌耐藥性及日內(nèi)酞胺酶基因型研究[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2003，26（11）：683-685.

[12] 凌華志，李濤，徐元宏，等.假單胞菌屬細菌中整合子的分布及其可轉(zhuǎn)移耐藥性研究[J].臨床檢驗雜志，2007，25（1）：10-12.

[13] 呂春梅，莫韶妹，馬潔葵，等.綜合重癥監(jiān)護室多重耐藥鮑曼不動桿菌的控制[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2012，12（4）：98-100.

[14] 牟成泉.不動桿菌分離與鑒定的研究進展[J].成都醫(yī)學院學報，2012， 7（4）：655-657.

[15] 羅必蓉，劉蓉，劉繼芬，等.陰溝腸桿菌耐藥性及氨基糖苷類抗生素耐藥基因分析[J].成都醫(yī)學院學報，2011，6（3）：248-250.

懶惰蟲范文第5篇

1 音樂教育影響著幼兒的審美能力

在當前幼兒教育階段，音樂教育包括了唱歌、韻律活動、音樂游戲和打擊樂以及音樂欣賞，這些內(nèi)容都是美育的內(nèi)容，也是美育的主要手段。通過這些音樂活動能夠培養(yǎng)幼兒對音樂的興趣和愛好，提高他們對音樂的感受力。同時，在音樂的感染下提高了幼兒的審美能力，激發(fā)了幼兒感受美、表現(xiàn)美的情趣，豐富了他們的審美經(jīng)驗，促進了幼兒對美好事物的喜愛和對美好生活的向往，建立起了健康的審美觀點，使每個幼兒都真正獲得了美的體驗，進而達到美育的教育目的。

1.1 培養(yǎng)幼兒感受音樂美的能力。音樂中優(yōu)美動聽的旋律，會撥動幼兒心靈中的琴弦，使之產(chǎn)生豐富的美感體驗。由于幼兒的知識、經(jīng)驗思維發(fā)展水平有限，這種體驗往往很膚淺、不穩(wěn)定，需要精心指導(dǎo)，因而在引導(dǎo)幼兒感受音樂美時，必須做到以下兩點：一是要選好音樂。幼兒的審美具有直觀性和形象性等特點，他們只對生動形象、具體直觀的審美對象產(chǎn)生興趣、萌生美感。應(yīng)選擇一些符合幼兒審美特點的優(yōu)秀音樂作品；二是要引導(dǎo)幼兒對構(gòu)成音樂美的諸要素有充分的感受力。我們分以下幾個步驟進行：首先讓幼兒安靜地傾聽音樂，幫助幼兒熟悉音樂，仔細體會優(yōu)美的旋律、明快的節(jié)奏、飽滿的和聲等，初步產(chǎn)生印象美；其次讓幼兒邊聽邊打節(jié)奏，培養(yǎng)幼兒對音樂速度、力度和節(jié)奏的感受力；最后讓幼兒邊聽邊想，使幼兒在愉快的音樂氛圍中對音樂所表現(xiàn)的不同形象和情節(jié)進行想象，提高幼兒的興趣，為幼兒感受、表現(xiàn)和創(chuàng)造音樂美提供表象依據(jù)。

1.2 培養(yǎng)幼兒表現(xiàn)音樂美的能力。幼兒在反復(fù)聆聽、充分感受音樂的過程中逐步對音樂產(chǎn)生興趣后，隨即會產(chǎn)生強烈的表演欲望，這是由于幼兒的審美情感強烈、外露所致。我們要因勢利導(dǎo)，啟發(fā)幼兒將自己對音樂美的感受進行思維加工，用語言和動作充分展示出來，培養(yǎng)幼兒對音樂美的表達能力。有一次，幼兒在充分感受了《懶惰蟲》音樂之后，我啟發(fā)他們說一說聽了音樂后有什么感覺，孩子們紛紛舉手。有的說：“懶惰蟲的做法不對?！边@是對音樂性質(zhì)（進行曲）的感受，有的說“我不想做懶惰蟲”……孩子們盡情地述說著他們對音樂美的理解和感受。

1.3 培養(yǎng)幼兒創(chuàng)造音樂美的能力。隨著幼兒音樂知識、經(jīng)驗的積累及情感的發(fā)展，他們渴望用自己特有的方式來表現(xiàn)對美的感受和理解，萌生音樂的創(chuàng)造力。這時，我們應(yīng)有意識地加以引導(dǎo)和培育。我在讓幼兒表演《小雨沙沙》之后，繼續(xù)鼓勵他們聯(lián)想：小雨還可以做什么？啟發(fā)幼兒創(chuàng)編歌詞和動作，引導(dǎo)幼兒創(chuàng)編音樂節(jié)奏型、配樂器演奏……通過這些創(chuàng)編活動，讓每個幼兒都有充分展示自己創(chuàng)編音樂美的機會，使幼兒逐漸從感知音樂表面形式美過渡到理解音樂作品的內(nèi)在美。同時，當幼兒對音樂作品的興趣越來越濃時，要抓住時機，設(shè)法將幼兒頭腦中豐富的美感體驗引入表現(xiàn)階段，發(fā)展幼兒的形象思維能力，并通過啟發(fā)和引導(dǎo)，培養(yǎng)幼兒對音樂美的創(chuàng)造能力。

2 音樂教育影響著幼兒情感的發(fā)展

音樂能夠觸動人的情感，美好的音樂作品能夠使人振奮，能夠使人感染。隨著幼兒社會交往不斷擴大，情感體驗社會越來越豐富。通過音樂教育就能大大促進幼兒情感的健康發(fā)展，使其懂得對美好的喜愛和對丑惡的憎恨，產(chǎn)生同情心和自豪感。我們在班中設(shè)立了“音樂區(qū)”，其中放置了一些頭飾、彩帶、節(jié)奏樂器等，通過播放音樂，讓孩子們自由表演、自由創(chuàng)作，孩子們可開心了，當響起輕快的音樂時，學生都會做自己喜歡的動作，很多人都說：“女孩比較喜歡音樂，男孩就喜歡玩。”其實不然，我發(fā)現(xiàn)我班的很多男孩也很喜歡音樂，但是由于平時主動參與的不多，看到女孩跳的那么好自己也就不好意思唱唱跳跳了。發(fā)現(xiàn)了男孩的這一特點后，我們就多為班中的男孩子創(chuàng)造機會，多鼓勵他們，多讓他們大膽表現(xiàn)自己，現(xiàn)在有很多男孩子很喜歡跟著音樂唱唱跳跳，有時還能自編許多優(yōu)美的動作。我們還給幼兒提供一些廢舊材料，如：易拉罐、玻璃瓶、盒子等，通過孩子自己動手制作各種打擊樂器、頭飾等，讓孩子們在做中學、做中玩。

3 音樂教育影響著幼兒聽覺、記憶的發(fā)展

幼兒學習音樂，首先是靠他的聽覺得到，然后在多次視聽中學會欣賞音樂，鑒別音樂，感受音樂，表達音樂。在不斷的學習過程中，幼兒聽覺能力得到加強與提高。當然，在此過程中，幼兒不僅靠聽覺學習，而且更要靠記憶來鞏固。只有幼兒在記住歌詞、旋律、舞蹈動作的前提下，才能學會唱歌、跳舞，才能使幼兒的記憶力得到不斷發(fā)展。同時，幼兒在集體的音樂活動中，他們之間的相互影響、相互交流也會促進記憶力的發(fā)展。培養(yǎng)孩子的音樂記憶力是智力發(fā)展的重要構(gòu)成部分，它是創(chuàng)造音樂活動的基礎(chǔ)。

4 音樂教育影響著幼兒想象力、創(chuàng)造力以及語言的發(fā)展

幼兒時期正是形象思維占主要地位的時期，是由再造想象逐步向創(chuàng)造想象發(fā)展的時期。幼兒在進行內(nèi)容豐富的音樂活動中，可運用想象進行創(chuàng)造。如：一段悠揚的旋律，幼兒可以想象成小魚游水，鴨子嬉戲，還可以在此基礎(chǔ)上，創(chuàng)造性地想象自我在大?；蛱炜罩邪坑?、飛翔。幼兒在想象音樂、創(chuàng)造音樂的同時，為了表達內(nèi)心世界，他就要積極地運用語言來展現(xiàn)，把自己的想法體驗與周圍的人進行交流，在交流中加強了語言能力的發(fā)展。