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本文作者：魏華1,2沙曉姣1陳阿琴1唐建清3夏愛軍3作者單位：1上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命科學(xué)學(xué)院2上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院3江蘇省淡水水產(chǎn)研究所

結(jié)果

1克氏原螯蝦卵巢和肝胰腺5-ht與da陽性物質(zhì)分布

Ⅰ期卵巢5-HT陽性物質(zhì)主要集中在卵母細(xì)胞胞質(zhì)(陽性細(xì)胞呈棕色)，胞核未出現(xiàn)陽性反應(yīng)。Ⅱ～Ⅳ期5-HT陽性物質(zhì)主要集中在卵母細(xì)胞胞質(zhì)以及胞核(圖1)。Ⅰ～Ⅱ期卵巢中DA陽性物質(zhì)均分布于卵母細(xì)胞的胞質(zhì)與胞核，Ⅲ～Ⅳ期陽性物質(zhì)只在胞核(圖2)。克氏原螯蝦的肝胰腺由許多具有盲端的肝小管組成，肝小管主要由胚細(xì)胞(E)、泡狀細(xì)胞(B)、吸收細(xì)胞(R)和纖維細(xì)胞(F)4種上皮細(xì)胞構(gòu)成［17］。在各個(gè)發(fā)育時(shí)期，肝胰腺中5-HT的免疫陽性物質(zhì)主要分布在胚細(xì)胞(E)、泡狀細(xì)胞(B)、吸收細(xì)胞(R)和纖維細(xì)胞(F)四類細(xì)胞的胞核和胞質(zhì)，且胞核與胞質(zhì)的陽性強(qiáng)度相當(dāng)(圖3)。在各個(gè)發(fā)育時(shí)期，肝胰腺中DA陽性物質(zhì)主要分布在胚細(xì)胞(E)、泡狀細(xì)胞(B)、吸收細(xì)胞(R)和纖維細(xì)胞(F)四類細(xì)胞的胞核和胞質(zhì)，強(qiáng)度有遞減趨勢(圖4)。設(shè)計(jì)的陰性對照未見免疫陽性反應(yīng)(圖5)。

2卵巢與肝胰腺中5-HT與DA的陽性強(qiáng)度

對各期克氏原螯蝦卵巢和肝胰腺進(jìn)行5-HT與DA免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，5-HT與DA在不同卵巢發(fā)育期的卵巢和肝胰腺細(xì)胞陽性表達(dá)強(qiáng)度不同。根據(jù)DAB染色的深淺，分為強(qiáng)陽性、中等陽性、弱陽性、陰性，分別表示為“+++”、“++”、“+”、“－”［18］。Ⅰ期卵巢5-HT陽性物質(zhì)主要在卵細(xì)胞胞核、卵原細(xì)胞胞核以及濾泡細(xì)胞，且均為強(qiáng)陽性，卵細(xì)胞胞質(zhì)、卵原細(xì)胞胞質(zhì)未見陽性分布。Ⅱ期、Ⅲ期卵巢卵細(xì)胞胞核與濾泡細(xì)胞均有陽性物質(zhì)分布且為強(qiáng)陽性。Ⅳ期卵巢卵細(xì)胞胞核與濾泡細(xì)胞均呈強(qiáng)陽性，陽性位點(diǎn)減少。5-HT在各期肝胰腺細(xì)胞R細(xì)胞與B細(xì)胞中均有分布，且均為強(qiáng)陽性，Ⅲ～Ⅳ期肝胰腺F細(xì)胞5-HT呈強(qiáng)陽性表達(dá)(表1)。DA在卵巢與肝胰腺中的陽性強(qiáng)度與5-HT略有差別，Ⅰ期卵巢DA陽性位點(diǎn)分布在卵細(xì)胞胞質(zhì)與胞核、濾泡細(xì)胞，強(qiáng)陽性，Ⅱ期卵巢陽性部位主要在卵細(xì)胞胞質(zhì)與胞核、濾泡細(xì)胞，為強(qiáng)陽性，卵細(xì)胞胞質(zhì)中的陽性位點(diǎn)數(shù)較Ⅰ期相對減少。Ⅲ期卵巢陽性位點(diǎn)分布在卵細(xì)胞胞核以及濾泡細(xì)胞，且均呈強(qiáng)陽性。Ⅳ期卵巢陽性位點(diǎn)分布在卵細(xì)胞胞核以及濾泡細(xì)胞，也為強(qiáng)陽性，陽性位點(diǎn)有減少的趨勢。各期肝胰腺細(xì)胞均有DA的陽性物質(zhì)分布，強(qiáng)度遞減(表2)。

討論

15-HT與DA在卵巢組織中的分布

本研究通過免疫組化技術(shù)研究了5-HT與DA在卵巢和肝胰腺中的分布。目前有關(guān)5-HT與DA在甲殼動(dòng)物卵巢中的分布已有報(bào)道，但是在不同動(dòng)物之間存在諸多差異，比如，5-HT在日本新糠蝦Ⅰ～Ⅲ期卵巢中分布于濾泡細(xì)胞、卵母細(xì)胞胞質(zhì)和卵母細(xì)胞核，Ⅳ期卵巢中未出現(xiàn)5-HT陽性細(xì)胞［18］。5-HT在斑節(jié)對蝦Ⅰ～Ⅳ期卵巢中分布于濾泡細(xì)胞、卵母細(xì)胞和皮質(zhì)棒［10］。本研究發(fā)現(xiàn)5-HT在克氏原螯蝦卵巢主要分布于卵細(xì)胞胞質(zhì)與胞核，且在胞核中總體呈遞增趨勢，與5-HT在斑節(jié)對蝦卵巢發(fā)育中變化趨勢相同，而與5-HT在日本新糠蝦［19］發(fā)育卵巢中變化趨勢相反。5-HT在克氏原螯蝦卵細(xì)胞胞質(zhì)強(qiáng)度亦呈遞增趨勢，與5-HT在日本新糠蝦發(fā)育卵巢中變化趨勢相反。Yotsawan等［19］使用免疫熒光法發(fā)現(xiàn)南美白對蝦除卵巢組織外，在中央神經(jīng)系統(tǒng)也有5-HT分布。Garnerot等［20］研究結(jié)果表明在雙殼類的性腺與消化腺組織均有5-HT陽性物質(zhì)的分布。南美白對蝦Ⅰ期卵巢的DA陽性物質(zhì)主要分布在早期卵黃合成期的卵母細(xì)胞胞質(zhì)，而卵原細(xì)胞以及濾泡細(xì)胞中則無陽性細(xì)胞，Ⅱ～Ⅳ期卵巢僅在卵母細(xì)胞胞質(zhì)有陽性細(xì)胞分布［9］。這與本研究結(jié)果DA在克氏原螯蝦卵巢發(fā)育各時(shí)期的卵細(xì)胞中的陽性表達(dá)相似。羅氏沼蝦［9］與南美白對蝦［19］卵巢內(nèi)5-HT含量隨著卵巢發(fā)育呈上升趨勢，DA含量隨著卵巢發(fā)育呈下降趨勢，且不同發(fā)育期間存在顯著差異。本研究發(fā)現(xiàn)DA在克氏原螯蝦卵母細(xì)胞呈遞減趨勢，與羅氏沼蝦、南美白對蝦發(fā)育卵巢中的DA含量變化趨勢相同。綜上所述，隨著卵巢的發(fā)育，5-HT在卵母細(xì)胞中的分布呈遞增趨勢，DA呈遞減趨勢。這可能與所選材料的種類不同有關(guān)，也可能是因?yàn)槁殉步M織除卵母細(xì)胞外，還有間質(zhì)以及結(jié)締組織等的存在［21］，本研究只是對克氏原螯蝦卵巢組織卵母細(xì)胞做5-HT與DA的定量研究，關(guān)于這方面的研究還需完善。

25-HT與DA對卵巢發(fā)育的調(diào)節(jié)作用

利用高效液相色譜和免疫組化法已經(jīng)從神經(jīng)系統(tǒng)、卵巢和血淋巴中檢測出5-HT和DA的分布，并且在鋸緣青蟹腦、胸神經(jīng)團(tuán)和視神經(jīng)節(jié)已檢測出5-HT神經(jīng)細(xì)胞［12］。本研究證實(shí)5-HT與DA陽性細(xì)胞在卵母細(xì)胞的分布隨卵巢發(fā)育變化而變化，在卵巢與肝胰腺中，5-HT含量總體呈現(xiàn)遞增趨勢，DA含量變化正相反。提示5-HT與DA可能和卵巢發(fā)育之間的關(guān)系密切，證實(shí)5-HT對卵巢發(fā)育的促進(jìn)作用，DA對卵巢發(fā)育的抑制作用。卵巢Ⅰ期，卵巢與肝胰腺組織中DA陽性強(qiáng)度基本相當(dāng)，Ⅱ～Ⅳ期5-HT陽性強(qiáng)度稍高于DA。從Ⅱ期開始，卵巢、肝胰腺中5-HT在量上逐漸積累，DA含量降低。5-HT的促進(jìn)作用占主導(dǎo)作用，卵巢逐漸趨于成熟。本研究結(jié)果中，卵母細(xì)胞和肝胰腺細(xì)胞DA陽性強(qiáng)度變化極其相似，均隨卵巢的發(fā)育呈遞減趨勢。表明甲殼動(dòng)物卵母細(xì)胞的發(fā)育與肝胰腺可能也有密切關(guān)系［17］，其調(diào)節(jié)機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。此外，一些其他激素也參與5-HT與DA對甲殼動(dòng)物卵巢發(fā)育的調(diào)節(jié)，如Homola等［22］等在蜘蛛蟹大顎器的解聚細(xì)胞培養(yǎng)液中添加5-HT，結(jié)果顯示10－8mol/L5-HT抑制了20%～30%甲基法尼酯(MF)的合成，表明5-HT作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)調(diào)控MF的合成。Santhoshi等［23］發(fā)現(xiàn)，注射5-HT能顯著提高印度明對蝦體內(nèi)卵黃蛋白原水平，Yotsawan等［9］認(rèn)為注射DA顯著降低了羅氏沼蝦血淋巴內(nèi)卵黃蛋白原的含量。表明卵巢中5-HT與DA含量波動(dòng)與卵巢發(fā)育成熟相關(guān)，這可能也是克氏原螯蝦卵巢成熟的調(diào)節(jié)機(jī)制之一。5-HT與DA是克氏原螯蝦卵巢發(fā)育過程中的兩種重要的胺類，它們與各種激素之間的相互作用有待于更進(jìn)一步的研究證實(shí)。