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【摘要】目的建立hplc法測定腦靈素膠囊中淫羊藿苷的含量。方法用DiamonsilC18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱，流動相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測波長：270nm。結(jié)果淫羊藿苷在0.0404～0.504μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系好，r=0.99998，平均回收率為98.8%，RSD為1.3%（n=6）。結(jié)論本法測定簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性和分離度好，可用于腦靈素膠囊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationoficariininNaolingsucapsules.MethodADiamonsilC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithamobilephaseofacetonitrile-water（26:74）.Theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangeoficariinwas0.0404～0.504μg（r=0.99998）.Theaveragerecoverywas98.8%withRSD1.3%（n=6）.ConclusionThedeterminationmethodissimple,accurateandcanbeusedforthequalitycontrolofNaolingsucapsules.

【Keywords】HPLC;icariin;Naolingsucapsule;determination

腦靈素膠囊為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第八冊》收載的品種［1］，由黃精、淫羊藿、五味子等十五味中藥組成，具有補(bǔ)氣血、健腦安神等功效。用于治療神經(jīng)衰弱，健忘失眠，頭暈心悸，身倦無力，體虛自汗，陽痿遺精等癥。原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定方法，方中淫羊藿為主要藥味,其有效成分為淫羊藿苷。為能有效地控制藥品質(zhì)量，本研究用HPLC測定淫羊藿苷，建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與試藥

ShimadzuHPLC色譜儀（LC-20ALiquidChromatograph,SIL-20AAutoSampler,SPD-M20ADiodeArrayDetector,CTO-10ASVPColumnOven）LCSolution色譜工作站。水為Ⅰ級純化水，乙腈為色譜純，其他為分析純。淫羊藿苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110737-200312）;腦靈素膠囊：吉林百姓堂藥業(yè)有限公司（批號：20050702，M平=0.3513g；批號：20060803，M平=0.3622g；批號：20061102，M平=0.3557g；規(guī)格：0.35g/粒）.

2試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），柱溫：35℃，流動相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測波長：270nm。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品10.09mg，加50%甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.18μg的溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備取本品10粒，混勻，取2g，精密稱定，置錐形瓶中，加50%甲醇50.00ml，稱重，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）40min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.2.3陰性對照溶液的制備取缺淫羊藿的處方，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液進(jìn)樣10μl，色譜圖見圖1。淫羊藿苷峰保留時間為21.333min，陰性對照色譜圖在淫羊藿苷峰位置無干擾峰，與其他組分分離完全，分離度為1.7，理論板數(shù)以淫羊藿苷峰計(jì)算為6239。

圖1HPLC色譜圖

2.4線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得方程：

Y=-4.95×103+2.23×106X，r=0.99998，線性范圍為0.0404～0.504μg。

2.5精密度試驗(yàn)取對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣7次，每次10μl，峰面積積分值RSD=0.3%

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號（20050702）樣品6份，按供試品液制備方法制備，依法測定，結(jié)果淫羊藿苷含量RSD=1.2%，表明本法重復(fù)性好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品溶液（20050702）在0、6、12、24h分別進(jìn)樣10μl，依法測定，淫羊藿苷峰面積RSD=1.3%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收試驗(yàn)取已知含量的樣品（20050702），精密加入淫羊藿苷對照品適量，按樣品測定方法測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測定取3批樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，依法測定淫羊藿苷的含量，結(jié)果見表2。表23批樣品含量測定結(jié)果

3討論

3.1考察流動相中乙腈對淫羊藿苷保留時間和分離度的影響。曾采用抗骨增生膠囊中測定淫羊藿苷的流動相乙腈-水（30：70）［2］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），結(jié)果表明乙腈量增大，保留時間提前，但分離效果差，與雜質(zhì)峰無法分離，以乙腈-水（26：74）較合適。

3.2在提取方法中，利用黃酮類化合物與聚酰胺柱有親和力，先水洗洗去雜質(zhì)，再醇洗得淫羊藿苷類的方法，可除去大部分雜質(zhì)峰，但某些保留時間與淫羊藿苷接近、影響分離度的關(guān)鍵峰不能除去；同樣，堿水提取后酸化，用正丁醇萃取，還是不能解決這個問題。而且操作步驟增加，影響含量的精確性［3］。

3.3在實(shí)驗(yàn)過程中，曾采用稀乙醇［2］、70%乙醇、50%甲醇、甲醇為提取溶劑，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min、40min、50min、60min［4］，濾過，取濾液，結(jié)果表明超聲40min、50min、60min含量幾乎無變化，且用50%甲醇測得含量最高，故選用50%甲醇超聲40min。

【參考文獻(xiàn)】

1衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑第八冊.144.

2國家藥典委員會.中國藥典一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，470.

3洪行球,黃燕芬.HPLC測定乳腺康顆粒劑中淫羊藿苷的含量.中成藥,2004,26（2）:165-167.

4劉蓮英，郭耀武.HPLC法測定益腎靈膠囊中淫羊藿苷的含量.中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2004,5（1）:42-43.