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【摘要】目的建立腦脈通中大黃總蒽醌含量測(cè)定方法。方法利用大黃蒽醌類(lèi)化合物能與質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂反應(yīng)顯色,在波長(zhǎng)512nm處產(chǎn)生吸收，采用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定腦脈通復(fù)方中的以游離型蒽醌計(jì)的總蒽醌的含量。結(jié)果以1,8二羥基蒽醌為對(duì)照品，測(cè)得腦脈通有效部位中總蒽醌的含量在10%以上，平均回收率為102.91％，RSD=0.97％。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為腦脈通有效部位中大黃總蒽醌的含量測(cè)定方法。

【關(guān)鍵詞】比色法；腦脈通；總蒽醌

腦脈通由大黃﹑川芎﹑葛根等組成，具有解毒降濁﹑益氣活血﹑滌痰開(kāi)竅﹑瀉下之功。該方治療腦梗死效果明顯，可明顯改善生活質(zhì)量，對(duì)腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用［1，2］。

我們采用大孔吸附樹(shù)脂純化工藝并結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)純化腦脈通，并得到有效成分含量高，雜質(zhì)含量少的有效部位［3，4］。根據(jù)復(fù)方有效部位及其主要化學(xué)成分的研究分析,確定腦脈通有效部位中的蒽醌類(lèi)成分為其有效成分之一。目前總蒽醌的含量測(cè)定方法主要是比色法。本研究建立一個(gè)簡(jiǎn)便可靠的腦脈通總蒽醌的含量測(cè)定方法，可有效控制腦脈通有效部位的質(zhì)量。

1儀器與試藥

儀器：METTLERAE240型1/100000電子分析天平（瑞士梅特勒公司），RE52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），KQ100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，UV2201SHIMADZU型分光光度計(jì)（日本島津）。

材料：大黃、人參、葛根、川芎藥材均購(gòu)自河南鄭州藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)科的陳隨清教授鑒定分別為蓼科植物掌葉大黃RheumpalamatumL.的干燥根及根莖，五加科植物人參RadixginsengC.A.Mey.的干燥根及根莖，豆科植物野葛Puerarialobata(Wild.)Ohwi的干燥根，傘形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.干燥根莖。1，8二羥基蒽醌對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。醋酸鎂、甲醇等均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取1，8二羥基蒽醌0.01009g，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻即得。

2.1.2供試品溶液的制備精密稱(chēng)取有效部位樣品10mg至圓底燒瓶中，加冰醋酸25%鹽酸（體積比18∶2）20mL［3］,溫水浴水解45min，冷卻，移入分液漏斗中，三氯甲烷萃取至三氯甲烷層近無(wú)色，棄去水層。合并三氯甲烷液，用蒸餾水洗至水層近無(wú)色，三氯甲烷層移入蒸發(fā)皿中水浴蒸干，甲醇定容至10mL容量瓶中，即得。

2.1.3陰性樣品溶液的制備按全方比例分別稱(chēng)取除大黃外其他藥材適量,按有效部位制備工藝制得缺大黃的陰性樣品,按“2.2”項(xiàng)方法制得陰性樣品溶液。

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

精密吸取對(duì)照品溶液2mL，置25mL容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液1mL置10mL的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。按供試品顯色方法制得陰性對(duì)照溶液。將上述溶液置于紫外分光光度計(jì)中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白參比溶液，400～800nm范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸收光譜。1，8二羥基蒽醌對(duì)照品溶液加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇顯色后的最大吸收波長(zhǎng)為512nm，供試品溶液在相同波長(zhǎng)處有最大吸收，陰性供試品無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.3顯色穩(wěn)定性的考察

取顯色后的對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別放置0、0.5、1、2、4h后，于512nm處測(cè)定其吸光度。結(jié)果吸光度的RSD值分別為0.75%和0.47%，表明對(duì)照品和供試品溶液顯色后4h內(nèi)基本穩(wěn)定

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備

精密吸取對(duì)照品溶液(0.1009mg·mL-1)0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL置25mL容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇稀釋至刻度，分別于512nm處測(cè)定吸光度。以1，8二羥基蒽醌對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到回歸方程：ρ=0.176+18.992A（r=0.9992）。結(jié)果表明，1，8二羥基蒽醌在2.018～16.144μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

A.1,8二羥基蒽醌；B.供試品溶液;C.陰性樣品

圖1紫外吸收光譜圖（略）

Fig.1UVspectrogram

2.5精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液(0.1009mg·mL-1)2mL置25mL容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇稀釋至刻度，于512nm處連續(xù)測(cè)定6次，記錄其吸光度，結(jié)果表明，該方法的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取有效部位樣品10mg，精密稱(chēng)定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于配制溶液后0、1、2、3、4、6h顯色測(cè)定其吸光度，計(jì)算含量的RSD值為1.01%，表明樣品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7回收率試驗(yàn)

取同一批有效部位樣品5份，每份約5mg，精密稱(chēng)定，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.55mg·mL-1的對(duì)照品溶液1mL，蒸干后按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，最后定容至10mL的容量瓶中。精密吸取供試品溶液1mL置10mL的容量瓶中，搖勻，即得。5份樣品分別顯色后于512nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，總蒽醌的平均回收率為102.91%，RSD=0.97%。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批有效部位樣品5份，每份約10mg，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，分別顯色后于512nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果表明,該方法的重復(fù)性良好。

2.9樣品含量測(cè)定

取3批有效部位樣品各5份，每份約10mg，精密稱(chēng)定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，最后定容至10mL的容量瓶中。精密吸取供試品溶液1mL置10mL的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。分別于512nm處測(cè)定其吸光度，計(jì)算樣品的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

3討論

3.1《中國(guó)藥典》2005年版一部中，大黃樣品的制備采用的是8%的鹽酸水解［5］，而在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)采用此方法測(cè)定含量有些偏低，因此我們對(duì)酸水解條件進(jìn)行了篩選，選擇了鹽酸、硫酸、鹽酸與冰醋酸的混合酸進(jìn)行對(duì)比研究，由測(cè)定結(jié)果可知，采用鹽酸與硫酸水解方法所測(cè)定的含量偏低，故選擇鹽酸與冰醋酸混合酸作為水解的方法。

表1樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.1Resultsofsamplesdetermination(n=5)

3.2本文建立了腦脈通有效部位中總蒽醌的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察試驗(yàn)研究，結(jié)果表明符合定量分析要求。該方法重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性良好，而且操作簡(jiǎn)便，分析快速，可作為腦脈通有效部位質(zhì)量控制方法之一。3批樣品含量測(cè)定結(jié)果，固化物中總蒽醌的含量均高于10%。

【參考文獻(xiàn)】

［1］任小巧,李建生,封銀曼,等.腦脈通對(duì)老齡大鼠腦缺血/再灌注損傷腦保護(hù)作用的研究［J］.中國(guó)中藥雜志,2004，29(1):66-68.

［2］李建生,鄧西方,任小巧.腦脈通對(duì)老齡大鼠腦缺血再灌注細(xì)胞因子的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004,19(8)：471.

［3］王淑美，馮素香，梁生旺，等.高效液相色譜法測(cè)定腦脈通有效部位中蒽醌類(lèi)成分的含量［J］.中國(guó)新藥與臨床雜志，2007，26（3）：171-174.

［4］王淑美，馮素香.腦脈通有效部位中總生物堿的含量測(cè)定［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（1）：1-3.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：17.