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【摘要】目的優(yōu)化丹酚酸的提取工藝，提高丹酚酸B的提取率。方法以噴霧干燥法獲得的丹酚酸固體粉末的收率和丹酚酸B含量為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化丹酚酸的乙醇浸提工藝，考察乙醇濃度、提取時(shí)間和提取溫度對(duì)丹酚酸B提取率的影響。結(jié)果最佳提取工藝為：45％(體積分?jǐn)?shù))乙醇，提取時(shí)間為1h，提取次數(shù)為2次，提取溫度為70℃。結(jié)論提取物中丹酚酸B純度達(dá)到70%以上，優(yōu)化工藝合理、可行。

【關(guān)鍵詞】丹酚酸B;提取工藝;均勻設(shè)計(jì);大孔吸附樹(shù)脂

Abstract:ObjectiveToOptimizetheextractionprocessofSalviaacidfromSalviamiltiorrhiza.MethodsSalviaacidofthespraydryingpowderandsalviaacidBwereusedasusethestandard.Uniformdesignwasusedtooptimizetheextractionprocedure.Theeffectofethanolconcentration,extractiontimeandtemperatureontheextractionefficiencyofsalviaacidBwereoptimized.ResultsTheoptimalconditionswereasfollowings:45%ofethanol,1hofextractiontimeand2cyclesofextractionat70℃.ConclusionTheextractionyieldcouldreach70%undertheoptimalextractionprocedure.

Keywords:salviaacidB;extractionprocess;uniformdesign;macroporousresin

丹參水溶性有效成分多具有酚酸性結(jié)構(gòu),丹參素（化學(xué)名為β3,4二羥苯乳酸，β3,4dihydroxybenyllacticacid)是各種丹酚酸的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)：丹酚酸A是一分子丹參素與兩分子咖啡酸縮合而成；丹酚酸B為三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成；丹酚酸C則為二分子丹參素縮合而成；其他丹酚酸亦有類似結(jié)構(gòu)。丹參水溶性成分中的迷迭香酸(rosmarinicacidA,Ros)也是由一分子丹參素和一分子咖啡酸縮合而成。此外,還有四甲基丹酚酸(tetramethylsalvianolicacidA,SalM)等等［1］。

目前,工業(yè)上提取丹參有效成分主要以熱回流法為主,而酚酸類性質(zhì)不穩(wěn)定、易氧化水解,因而提取工藝的研究應(yīng)多指標(biāo)綜合考慮。選擇不穩(wěn)定成分作為提取工藝篩選的指標(biāo)性成分,有利于篩選出合理的工藝條件,防止成分在提取工藝中損失過(guò)大［2-3］。本研究以提取物得率和丹酚酸B含量為指標(biāo),進(jìn)行丹酚酸提取工藝研究,以確定最佳的提取工藝，探索適合工業(yè)化提取的工藝條件。

1儀器與試劑

1.1儀器

FA1004N型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），JZ8002天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），RE5298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），LXJII型離心沉淀機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠)，YL015型實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī)（上海雅程儀器設(shè)備有限公司），QT330型柱溫箱（QM,旗美），LC10ATVP型泵（日本島津），SPD10AVP型紫外檢測(cè)器（日本島津），高效液相色譜柱（Diamonsil鉆石），電子天平（SHIMADZUAY120），KQ100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），pHS25型pH計(jì)（上海智光儀器儀表有限公司）。

1.2試藥與試劑

丹參藥材系唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖（購(gòu)自廣州市天河寶潤(rùn)堂中藥飲片廠），經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)高英主任藥師檢驗(yàn)，符合《中國(guó)藥典》2005版一部丹參項(xiàng)下規(guī)定。乙醇（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），甲醇、乙腈（色譜純,迪馬科技有限公司），甲酸（分析純,廣州化學(xué)試劑廠），D101大孔吸附樹(shù)脂（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），鹽酸（分析純，廣州市白云區(qū)良田光明化工廠），F(xiàn)eCl3（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠），丹酚酸B對(duì)照品（批號(hào)：200504，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

2方法

2.1丹酚酸提取工藝

2.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用均勻設(shè)計(jì)法，選擇影響醇提的3個(gè)主要因素：乙醇濃度(A)、提取時(shí)間(B)、提取溫度(C)為考察指標(biāo),乙醇濃度選擇9個(gè)水平，提取時(shí)間及提取溫度各選擇3水平、各水平循環(huán)3次，采用U9(96)表安排試驗(yàn)，見(jiàn)表1。表1因素水平表

2.1.2樣品溶液的制備取丹參藥材100g，加入3000mL的圓底燒瓶中，按表1實(shí)驗(yàn)列號(hào)各條件操作，于恒溫水浴鍋中加熱浸提，趁熱抽濾,濾渣再按原條件進(jìn)行第2次乙醇浸提，趁熱抽濾，合并2次濾液。將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮至乙醇除盡，將濃縮液用配制好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的鹽酸溶液調(diào)至pH=3,用離心機(jī)（2000r/min,5min）離心濃縮液，用布氏漏斗抽濾，作為樣品溶液備用

2.2大孔吸附樹(shù)脂分離純化

2.2.1樹(shù)脂的預(yù)處理D101樹(shù)脂用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡24h，除去上層漂浮物，濕法裝柱，用乙醇流動(dòng)清洗，應(yīng)不時(shí)檢查流出的乙醇液，至乙醇液與水混合（1∶5）不呈白色渾濁為止，然后用水沖洗至無(wú)醇味止。

2.2.2丹參提取液分離純化離心后的樣品溶液通過(guò)D101大孔樹(shù)脂(藥材與樹(shù)脂用量比為1∶4;流速為2.0～3.0BV/h)，用水進(jìn)行沖洗,除去水溶性雜質(zhì)。采用FeCl3檢測(cè)法,判斷洗脫液中有無(wú)丹酚酸B成分被洗脫，用水6倍量沖洗,繼用體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇7倍量洗脫(流速為0.5～1.0BV/h)。收集體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（60℃）減壓濃縮,濃縮至液體相對(duì)密度為1.15。濃縮液噴霧干燥（進(jìn)風(fēng)溫度220℃，出風(fēng)溫度80℃），最終得淡黃色固體粉末。置干燥器內(nèi)，備用。

2.3丹酚酸B含量測(cè)定

2.3.1供試品溶液的制備精密稱取丹參提取物粉末10mg，加入100mL量瓶中，加水溶解定容,搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜,即得。

2.3.2色譜條件色譜柱:C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇水乙腈甲酸(體積比30∶59∶10∶1);流速:1mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):286nm;進(jìn)樣量：10μL；柱溫:35℃;

2.3.3含量測(cè)定方法［4］精密量取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀中，按“2.3.2”項(xiàng)下條件操作，測(cè)定丹酚酸B吸收峰的峰面積積分值，計(jì)算丹酚酸B含量。

2.4樣品的固形物含量

將洗脫液于60℃恒溫水浴，揮干乙醇和部分水分成稠膏狀，膏狀物移至真空干燥箱（60℃，0.09MPa）減壓干燥，置干燥器0.5h（防回潮），待樣品冷卻后，精密稱量。

3結(jié)果

丹酚酸提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸,求得回歸方程Y=1961+2.0861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X22+0.0186X1X3,R2=0.9545,F=6.1501，方程顯著有效，并得到最佳工藝參數(shù)為：乙醇濃度為45%，提取2次，每次1h，溫度為70℃。對(duì)最佳處方進(jìn)行驗(yàn)證，3批樣品丹酚酸B含量分別為：70.23%、69.04%、69.69%。

4討論

4．1提取丹參藥材中水溶性成分丹酚酸B，大部分文獻(xiàn)采用水提醇沉法。本文采用乙醇浸提的方法提取，其目的是為了避免用水提取時(shí)提取液中含有糖類等水溶性雜質(zhì)而使液體黏稠。表2U9(96)均勻設(shè)計(jì)表及試驗(yàn)結(jié)果

4.2丹酚酸B對(duì)熱不穩(wěn)定，易氧化水解，對(duì)受熱溫度和受熱時(shí)間敏感，所以丹參提取液不宜長(zhǎng)時(shí)間高溫濃縮。試驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸提取宜采用減壓濃縮和噴霧干燥等工藝，降低工藝過(guò)程的溫度和受熱時(shí)間，有利于提取物中丹酚酸保存率的提高［4］。

4.3將濃縮液pH值調(diào)至3，可以使部分雜質(zhì)析出，且酸性體系有利于丹酚酸B水溶液在受熱條件下的穩(wěn)定；同時(shí)調(diào)節(jié)溶液的pH可以改變丹酚酸在溶液中的游離狀態(tài)，酸性條件下丹參酚酸的極性下降，有利于大孔吸附樹(shù)脂對(duì)丹酚酸的吸附。

4.4以體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇濕法裝柱，清洗，然后用水沖洗，沖洗速度宜慢，使大孔樹(shù)脂堆實(shí)以利于吸附藥液；藥液通過(guò)D101大孔樹(shù)脂，流速控制為樹(shù)脂體積2.0～3.0BV/h,這樣可以使藥液與樹(shù)脂充分接觸,靜置一段時(shí)間再用水進(jìn)行沖洗,洗脫糖等水溶性雜質(zhì),而丹酚酸B類成分未被洗脫。用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇洗脫，丹酚酸B具有良好的解吸附性。

【參考文獻(xiàn)】

［1］周長(zhǎng)新,羅厚蔚,丹羽正武.丹參水溶性化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30(6):411-416.

［2］孫金蘭，韓偉.丹參中丹酚酸B的提取分離及分析方法研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2007，9（1）：49-53.

［3］富志軍.濃縮、精制及干燥對(duì)復(fù)方丹參提取液中水溶性成分的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（2）：52-53.

［4］李寧,徐文進(jìn)，高崇凱.HPLC測(cè)定丹酚酸滲透泵片丹酚酸B的含量［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2008,24(5):469-471.