前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇堅定的腳步范文，相信會為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

堅定的腳步范文第1篇

回到家，老媽又纏著我問成績了，我搖了搖頭，她期望的目光也隨之變成了失望。她安慰我，打開了電視，讓我放松心情。在這時，我看到了劉德華演唱的北京殘奧會的歌。在其中，說了一個普通的人在車禍中失去了一條腿，他知道自己失去了腿之后痛苦不堪，已經(jīng)失去了對生活的信心，但在十分激烈的思想斗爭后，他下定決心，要努力活下去，于是，他安了假肢，每天都練習跑步。剛開始，汗水在他的額頭上滲出，他每跑幾米后就摔倒，但他沒有氣餒，又爬了起來，頭上的汗在增多，但痛苦改變不了他堅定的腳步，反而使他更堅韌，更頑強。終于，在一次次摔倒之后，他成功地像正常人一樣地奔跑在路上、在跑道上、在他的人生路上。

看到這里，我心中頓時有一種莫名的感覺，是一種能帶給動力的感覺，我想，在人生道路中，每一個人都會遇到自己的困難，這種困難只有自己才能夠去戰(zhàn)勝，在困難面前，我們應學會挑戰(zhàn)困難，在失敗面前，我們更應學會接受失敗，從哪里跌倒就從哪里爬起來。

在這次考試中，我雖然有較大的失誤，但是，如果我在挫折面前低頭，那將會導致我徹底的失敗。只有重整旗鼓，從現(xiàn)在做起，堅定自己的腳步，才能不害怕失敗的打擊了。

堅定的腳步范文第2篇

【關鍵詞】 股骨粗隆間骨折；不穩(wěn)定骨折；股骨近端防旋髓內釘；動力髖螺釘

股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折多見于老年人和高能量損傷患者， 內固定治療是目前主流的治療方法[1]。本科比較了PFNA及DHS內固定治療的效果， 總結報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 以2011年1月～2013年6月本科治療的股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折患者66例為研究對象。其中男35例、女31例， 年齡22～68歲， 平均年齡（37.8±15.2）歲， 致傷原因：高處墜落傷12例、摔傷22例、暴力擊打傷19例、交通事故傷13例， AO/ASIF分型：A1型例23例、A2型29例、A3型14例。按照數(shù)字表法隨機分成對照組和觀察組各33例， 兩組患者在各方面比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）， 有可比性。

1. 2 手術方法 對照組使用DHS內固定治療：在C型臂X線下進行閉合復位， 取股骨大粗隆頂點向下的切口， 利用135°導向器將導針向股骨頭穿入、效果滿意后， 利用適宜的DHS拉力螺釘和固定鋼板固定。觀察組使用PFNA內固定治療：在C型臂X線下進行閉合復位， 取大粗隆頂點向上的切口， 依據(jù)AO標準安放入主釘和螺旋刀片、進行遠端靜力或者動力鎖定。

1. 3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析處理相關的數(shù)據(jù)， 計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）形式表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）形式表示， 采用χ2檢驗， P

2 結果

觀察組手術時間（75.8±15.2）min， 對照組手術時間（97.2± 18.3）min， 差異有統(tǒng)計學意義（P

3 討論

股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折固定不佳極易造成髖內翻、肢體短縮等并發(fā)癥的發(fā)生， 影響患者的活動功能[2]。DHS內固定屬于髓外固定的方式， 采用的是偏心性固定， 力學上需要承受較大的力矩， 抗旋轉力也差， 極易發(fā)生髓釘?shù)乃擅摵蛿嗔眩?尤其在股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折患者固定效果更差， 發(fā)生髖內翻的機率大大的升高。PFNA是一種改良的髓內固定系統(tǒng)。研究認為其具有獨特的技術優(yōu)勢[3]， 首先其貼合股骨解剖學形態(tài)的主釘設計利于準確的將髓內釘向股骨髓腔內插入；其次螺旋形刀片的使用使其與松質骨緊壓， 有效的防止刀片和股骨頭發(fā)生旋轉、降低丟失松質骨， 從而發(fā)揮抗旋轉和穩(wěn)固的支撐的功效；最后其具備的定位裝置， 有助于手術的操作、降低手術時間、減少手術的創(chuàng)傷。本組研究中， 觀察組的手術時間、骨折愈合時間和并發(fā)癥的發(fā)生率均少于對照組， 術后Harris評分高于對照組， 與張令弘等[4]獲得相同的結論， 表明PFNA內固定技術較DHS內固定技術更利于股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折的治療。

綜上所述， PFNA內固定治療股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折具有手術操作簡單、利于骨折愈合、臨床效果佳和并發(fā)癥少的優(yōu)勢， 較DHS更適用于股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折。

參考文獻

[1] 喻任， 倪誠， 徐文停， 等.三種固定方式治療老年不穩(wěn)定性股骨粗隆間骨折的比較.生物骨科材料與臨床研究， 2013， 10（4）：37-39.

[2] 楊海林， 張杰， 董金波， 等.DHS與PFNA內固定治療股骨粗隆間骨折的療效比較.中國骨與關節(jié)損傷雜志， 2013， 28（6）：553-554.

[3] 馮濤.Gamma-Ⅲ與PFNA釘治療不穩(wěn)定性股骨粗隆間骨折的對比研究.醫(yī)學綜述， 2013， 19（15）：2873-2875.

堅定的腳步范文第3篇

關鍵詞：內固定方法；股骨粗隆間骨折；住院時間；優(yōu)良率

股骨粗隆間骨折是臨床上常見的骨折疾病之一，發(fā)病人群以老年人為主，男性患者較女性偏多[1]。近幾年我國人口老齡化趨勢加快，越來越多人患有骨質疏松，大大增加了各種骨折的發(fā)生率、手術治療是治療股骨粗隆間骨折的主要方式，各種手術的局限性與優(yōu)點不同，達到的臨床效果也不盡相同。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2008年4月～2015年4月于我院治療的200例股骨粗隆間骨折患者作為研究對象，其中男性128例，女性72例；年齡44歲～95歲，平均（71.8±4.6）歲；根據(jù)Evans-Jensen分型標準判斷患者的骨折分型為：逆粗隆型6例，Ⅰb型25例，Ⅱa型31例，Ⅱb型98例，Ⅲ型40例；受傷原因：高處墜落傷5例，交通傷45例，摔傷138例，其他傷12例。所有患者隨機分為兩組，各100例。兩組患者一般資料差異無統(tǒng)計學意義，P>0.05，可以進行對比。

1.2治療方法 觀察組行Gamma釘內固定治療。對患者行連續(xù)硬膜外麻醉，幫助其保持仰臥位，墊高患側，使之向健側傾斜15°。由股骨大粗隆近側入路，將臀中肌鈍性分離至股骨大粗隆頂點，于C型臂透視的輔助下復位骨折，將Gamma釘置入髖內收位，并加以固定。

對照組行動力髖螺釘（DHS）內固定治療。對患者行連續(xù)硬膜外麻醉，幫助其保持仰臥位，墊高患側，使之向健側傾斜15°。由髖外側入路，在股外側肌后緣進行剝離，使大粗隆與股骨上端顯露出來，于C型臂透視的輔助下復位骨折，將DHS置入其中，并加以固定。

1.3觀察指標 記錄兩組患者的術中出血量、手術時間與住院時間，觀察其住院期間發(fā)生術后并發(fā)癥的情況，出院時應用Harris髖關節(jié)創(chuàng)傷后功能評價對兩組患者術后髖關節(jié)功能恢復情況進行評價，其中低于70分為差，70～79分為中，80～89分為良，90分及以上為優(yōu)，統(tǒng)計優(yōu)良率[2]。

1.4統(tǒng)計學處理 應用統(tǒng)計學軟件包SPSS130分析及處理相關數(shù)據(jù)，采用（x±s）的方式表示計量數(shù)據(jù)，用t檢驗其組間比較，采用百分比的方式表示計數(shù)數(shù)據(jù)，用？字2檢驗。如果P

2結果

2.1兩組的手術及預后情況對比 經(jīng)過分析與統(tǒng)計，觀察組的術中出血量少于對照組，手術時間和住院時間短于對照組，差異顯著，P

2.2兩組的術后并發(fā)癥情況對比 觀察組術后發(fā)生髖內翻2例，股骨粗隆間在骨折2例，并發(fā)癥發(fā)生率為4.0%；對照組術后發(fā)生傷肢短縮2例，螺釘穿出股骨頸3例，髖內翻5例，并發(fā)癥發(fā)生率為10.0%，高于觀察組，差異顯著，P

2.3兩組的髖關節(jié)功能恢復情況對比 兩組患者術后髖關節(jié)恢復情況為：對照組差3例，中11例，良37例，優(yōu)49例，優(yōu)良率為86.0%；觀察組中5例，良38例，優(yōu)57例，優(yōu)良率為95.0%，高于對照組，差異顯著，P

3討論

股骨粗隆間骨折是臨床上一種常見的骨折疾病，大多為不穩(wěn)定骨折，且具有粉碎性。發(fā)病人群以老年人為主，身體機能衰退，免疫力低，一旦治療不及時，很可能殘留肢體縮短、髖內翻等后遺癥。所以現(xiàn)階段國際上的學者均認為發(fā)生股骨粗隆間骨折后需要盡早實施手術，這樣才能使內固定更加堅強，重建股骨近端的穩(wěn)定性與連續(xù)性，進而使保守治療引起的并發(fā)癥減少，改善患者的關節(jié)功能[3]。

DHS內固定系統(tǒng)主要是對股骨上端外側皮質加以固定，發(fā)揮張力帶作用，持續(xù)對骨折端進行動態(tài)軸向加壓，使骨折斷面受到刺激后盡快愈合。這種內固定方法可以滑動加壓，具有固定牢固的優(yōu)點，然而若股骨不具備完整的內側皮質，應力在內側皮質處集中時，就容易造成鋼板螺釘斷裂或者骨折畸形愈合。所以當股骨粗隆間骨折穩(wěn)定或者相對穩(wěn)定時，適合應用DHS，可以起到堅強內固定的目的，配合早期功能鍛煉，可獲得理想的臨床療效[4]。Gamma釘屬于髓內固定，在擴髓后的髓腔內放置主釘，可以使骨距區(qū)壓應力明顯減少，促進骨折愈合。遠端髓釘有預后股骨旋轉的作用，能夠增強固定的牢固性，同時還不會引起骨折縮短移位。與髓外固定相比，髓內固定的手術及恢復時間均較短。本次研究中，觀察組的術中出血量少于對照組，手術時間和住院時間短于對照組，P

綜上所述，采用Gamma釘內固定治療股骨粗隆間骨折，不僅手術創(chuàng)傷小、安全性高、術后關節(jié)功能恢復快，而且術后并發(fā)癥少。

參考文獻：

[1]趙洪普，徐秋玉，呂玉明，等.三種內固定方法（PFNA、LPFP、DHS）治療老年股骨粗隆間骨折的比較[J].中國骨與關節(jié)損傷雜志，2012（6）：500-502.

[2]龐向華，歐陽建江，周建飛，等.人工關節(jié)置換與內固定治療骨質疏松性不穩(wěn)定股骨粗隆間骨折的對比分析[J].當代醫(yī)學，2013（10）：14-15.

堅定的腳步范文第4篇

【關鍵詞】 人工關節(jié)置換；鎖定鋼板；不穩(wěn)定型股骨轉子間骨折

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.13.032

股骨轉子間骨折好發(fā)于老年人， 死亡率達15%～20%[1]。目前治療方式以內固定為主， 也有學者主張采用人工關節(jié)置換。兩種方法哪一種更優(yōu)越， 尚難定論。本文通過病例回顧， 比較分析人工關節(jié)置換與股骨近端鎖定鋼板治療老年不穩(wěn)定型股骨轉子間骨折的療效?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 回顧2012年1月～2014年2月本院收治不穩(wěn)定型股骨轉子間骨折67例， 其中男30例， 女37例。按Evans分型， Ⅲ型39例， Ⅳ型28例。左側40例， 右側27例，

全部為新鮮骨折。根據(jù)手術類型分為關節(jié)組34例， 年齡71～92歲， 平均年齡78.2歲， Evans分型Ⅲ型19例， Ⅳ型15例；均使用雙極人工股骨頭、骨水泥型固定， 其中30例合并內科疾病。內固定組33例， 年齡60～85 歲， 平均年齡74.8歲。

Evans分型Ⅲ型20例， Ⅳ型13例；均使用股骨近端解剖型鎖定鋼板， 28例合并內科疾病。常見的內科疾病有：高血壓病、冠心病糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等。兩組患者年齡、性別、骨折分型等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 手術方法 內固定組：于牽引床上行骨折閉合復位， 采用股骨外側入路， 顯露骨折斷端， 進一步復位， 安放股骨近端鎖定鋼板， 克氏針經(jīng)鋼板近端小孔臨時固定， 然后在C臂透視下在股骨大轉子部以導向器引導鉆孔， 擰入鎖定螺釘3枚， 使轉子部螺釘呈多角度分布于股骨頸中。然后在骨折遠端鉆孔擰入3枚鎖定螺釘， C臂證實位置良好， 關閉切口。

關節(jié)組：患者取健側臥位， 髖后外側入路， 切開關節(jié)囊， 于小轉子上1 cm處鋸斷股骨頸， 取出股骨頭， 量取股骨頭大小。整復骨折塊并用鋼絲綁扎固定。股骨髓腔逐級充分擴髓， 調和并置入骨水泥， 插入股骨假體柄， 注意前傾角的角度。選擇合適大小的股骨頭安裝并復位。如果股骨矩粉碎或缺損難以復位， 則以骨水泥充填， 或以股骨頸皮質骨植骨補缺。

1. 3 術后處理 術后3 d常規(guī)使用抗生素預防感染， 術后24～48 h拔除引流管， 常規(guī)兩周預防血栓治療。術后3 d行關節(jié)持續(xù)被動運動（CPM）， 復查X片。關節(jié)組術后l周開始在助行器輔助下下地行走， 并逐漸負重， 而內固定組4周后視骨折愈合情況及骨折穩(wěn)定性拄拐下地逐步負重。

1. 4 觀察指標及判定標準 比較兩組手術時間、術中出血量、術后下地時間、圍手術期并發(fā)癥發(fā)生率及術后1、3、6個月Harris評分。按Harris評分標準對患者術后髖關節(jié)功能進行評估。優(yōu)：90～100分；良：80～89分；可：70～79分；差：

1. 5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P

2 結果

2. 1 隨訪情況 住院期間無患者死亡， 術后1年死亡3例， 關節(jié)組2例， 鋼板組1例。關節(jié)組術后隨訪5～18 個月， 平均隨訪12.5 個月。內固定組術后隨訪6～21個月， 平均隨訪14.3個月。

2. 2 手術情況 與內固定組比較， 關節(jié)組手術時間較長， 術中出血量較多， 下地時間較早（P

2. 3 術后關節(jié)功能 術后1、3個月關節(jié)組Harris評分顯著高于內固定組（P0.05）。

2. 4 術后并發(fā)癥 內固定組14例出現(xiàn)并發(fā)癥， 發(fā)生率為42.4%，

其中3例發(fā)生螺釘松動、4例出現(xiàn)肺炎、2例出現(xiàn)深靜脈血栓、及心力衰竭3例、髖內翻2例；關節(jié)組6例出現(xiàn)并發(fā)癥， 發(fā)生率為17.6%。其中肺炎3例、深靜脈血栓l例、假體周圍骨折2例。內固定組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于關節(jié)組（P

3 討論

股骨轉子間骨折多發(fā)于老年人， 對于EvansⅠ、Ⅱ型穩(wěn)定型骨折， 多數(shù)學者認為應行內固定術， 可選擇動力髖螺釘（DHS）、防旋股骨近端髓內釘（PFNA）等固定方式[2， 3]。對于逆行性轉子間骨折、不穩(wěn)定型、股骨外側壁不完整的轉子間骨折， 則應選擇PFNA或股骨近端鎖定鋼板[4]。

股骨近端鎖定鋼板屬髓外固定系統(tǒng)， 因為其角穩(wěn)定作用， 尤其適用于固定不穩(wěn)定型骨折。其優(yōu)越性在于：①鋼板與骨表面不強調完全貼附， 減少了骨膜的剝離， 更多保留了骨折端血供；②近端3枚螺釘成倒三角形植入股骨頸， 三者構成三維結構， 可將粉碎的骨塊拉攏固定， 維持穩(wěn)定性， 尤其適用于Ⅳ型轉子間骨折[5]。其缺點在于：①鎖定鋼板屬角穩(wěn)定， 非堅強內固定， 術后不宜早期負重活動， 對患者下肢功能的恢復有所影響；②其抗張力強度較差， 術后易發(fā)生髖內翻。本組下地時間明顯長于關節(jié)組， 也突出反映了這個問題。

國內外研究表明， 人工關節(jié)置換術在縮短臥床時間， 改善生活質量方面具有一定的優(yōu)勢[6]。本研究顯示， 關節(jié)組較內固定組手術時間長、出血量多， 考慮與關節(jié)置換手術軟組織剝離多， 擴髓及骨水泥準備耗時有關；而內固定組有限切開， 組織剝離相對較少， 內固定物植入過程耗時較少。但關節(jié)組術后下地明顯早， 術后1、3個月Harris評分明顯高于內固定組， 且內固定組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于關節(jié)組， 體現(xiàn)了人工關節(jié)的優(yōu)勢。

總之， 兩種方法治療老年不穩(wěn)定型股骨轉子間骨折各有優(yōu)缺， 人工關節(jié)置換雖不作為首選， 但對于高齡患者， 可以使患者在術后早期下床活動， 減少并發(fā)癥， 有助于盡早恢復傷前狀態(tài)， 提高患者生活質量， 減輕長期臥床帶來的經(jīng)濟和社會負擔。

參考文獻

[1] 王昌興， 姜滔， 沈建國， 等.人工股骨頭置換與動力髖螺釘治療老年股骨轉子間骨折的對比研究.中華創(chuàng)傷雜志， 2009， 25（5）：418-421.

[2] Ostermann PA， Haase N， Ekkernkamp N. Techniques of extrame-dullary osteosynthesis in proximal femoral fractures. Der Chirurg， 2001， 72（11）：1271-1276.

[3] 錢忠來， 徐耀增， 王現(xiàn)彬， 等.動力髖螺釘、股骨近端防旋髓內釘和第3代Gamma釘置入內固定后生物力學性能與臨床效果的比較.中國組織工程研究與臨床康復， 2010， 14（48）： 8974-8979.

[4] 苗旭漫， 南軍， 石偉， 等. 滑動加壓股骨粗隆間骨折外固定器的設計和臨床應用. 中國骨與關節(jié)損傷雜志， 2007， 22（1）：13-15.

[5] 鄒明， 柏廣富， 張焱， 等. 三種不同內植物固定治療老年股骨轉子間骨折. 中國組織工程研究， 2012， 16（30）：5696-5700.

堅定的腳步范文第5篇

[關鍵詞] 代謝組學； 磁共振； 假絲酵母菌； 主成分分析

[中圖分類號] R 739.86 [文獻標志碼] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.018

白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌是正常人口腔、胃腸道、呼吸道及陰道黏膜的常見共生菌，僅能在特定條件下造成宿主感染。代謝組學是20世紀90年代中期發(fā)展起來的一門對生物體或細胞的所有低相對分子質量代謝產(chǎn)物進行定量和定性分析的新技術。高分辨率磁共振（nuclear ma-

gnetic resonance，NMR）可用于對細胞外微量代謝組分進行檢測，得到相應的代謝圖譜，使用先進的軟件分析方法可以正確地歸類處理這些圖譜。本研究對與口腔黏膜病相關的3種假絲酵母菌的代謝圖譜進行比較，用主成分分析法（principal components ana-lysis，PCA）進行分析，探討用該方法尋找特征性產(chǎn)物來鑒定假絲酵母菌的可行性。

1 材料和方法

1.1 實驗菌株及實驗儀器

白色假絲酵母菌ATCC 10231、熱帶假絲酵母菌

ATCC 13803、光滑假絲酵母菌ATCC 15126（上海川翔生物科技有限公司）；CH-2生物顯微鏡（Olympus公司，日本），分光光度計（上海尤尼卡公司），高

速低溫離心機（Jouan公司，法國），-80 ℃低溫冰箱（Heto Ultra公司，美國），磁共振儀（Bruker公司，德國）；重水（上海楚柏實驗室設備有限公司）；分析軟

件SIMCA-P 11.0（Umea公司，瑞典）。

1.2 生長曲線的繪制

將白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌解凍，增菌48 h，經(jīng)顯微鏡形態(tài)學檢查及科瑪嘉顯色培養(yǎng)基鑒定為純培養(yǎng)后，分別將3種假絲酵母菌接種于沙保培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h，用分光光度計調整菌懸液吸光度值為1.00±0.05備用。在9支試管中分別加入沙保培養(yǎng)液4.5 mL，在每支試管中加入白色假絲酵母菌菌懸液50 μL，同法將熱帶假絲酵母菌及光滑假絲酵母菌菌懸液50 μL分別加入9支試管中，各試管在37 ℃、200 r·min-1搖床行增菌培養(yǎng)，在3、6、9、12、24、36、48、60、72 h各取1支，旋渦振蕩器混勻30 s，分光光度計測量菌懸液吸光度值，以純沙保培養(yǎng)液作陰性調零，測定3種假絲酵母菌的菌懸液密度。將實驗重復3次，取每個時間點的平均值，以時間（h）為橫坐標，以OD600值為縱坐標繪制生長曲線。

1.3 測試樣本的制備

分別取3種假絲酵母菌生長穩(wěn)定期（培養(yǎng)36 h）的培養(yǎng)液于4 ℃、10 000 r·min-1離心10 min，吸取上清液1 mL，加0.5 mL磷酸鹽緩沖液（2.4 g·L-1 KH2PO4，

8 g·L-1 Na2HPO4，7.2 g·L-1 NaCl），混勻后靜置10 min，以相同條件（4 ℃、10 000 r·min-1）離心10 min，吸取上清液用0.22 μm濾紙過濾，取1.35 mL濾液，加入重水0.15 mL，混勻后將樣品移入核磁管中（每管1.5 mL），置于-80 ℃低溫冰箱保存，NMR測定前解凍并保持在0 ℃左右。

1.4 1H-NMR圖譜的采集和處理

將核磁管放入磁共振儀中進行1H-NMR譜掃描，樣本的掃描溫度設置為295 K室溫。采用磁共振儀專用參數(shù)，包括采集點數(shù)32×1 024，累加次數(shù)128次，每個樣本掃描后均收集到131 072個數(shù)據(jù)點，波寬為7 788.162 11 Hz，每個樣本掃描2～3 min，將得到的15個原始的自由感應衰減信號（free induction decay，

FID）輸入MestReC軟件進行傅里葉轉換（Fourier tran-sition，F(xiàn)T），并進行相位調整和基線調整，獲得相位滿意、基線平整的1H-NMR圖譜。調用軟件的積分工具，除去水峰所在區(qū)間，并對1H-NMR譜進行分段積分，其中每個FID信號有200個積分值。將每個樣本的積分值導入Excel表中備用。

1.5 數(shù)據(jù)分析

用PCA進行數(shù)據(jù)分析。用SIMCA-P 11.0軟件對200個積分值進行化學計量上的處理，以主成分矢量為坐標軸作二維圖，即得分圖，從而對不同的菌懸液進行分析，找出類別間的差異所在。

2 結果

2.1 3種細菌的生長曲線

3種假絲酵母菌的生長曲線見圖1。由圖1可見，3種菌的生長規(guī)律相似，36～48 h生長繁殖達到高峰，處于穩(wěn)定期，48 h后處于衰亡期。選擇生長穩(wěn)定期（36 h）的代謝物測1H-NMR圖譜。

2.2 1H-NMR圖譜的測定結果

圖2為白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌的1H-NMR圖譜，3種菌的氫譜輪廓相似，其代謝物集中在化學位移值為3.5×10-6和1.0×10-6附近，每種菌代謝物集中出現(xiàn)區(qū)域的波譜形態(tài)與強度并不完全一樣，但通過單純的1H-NMR圖譜無法清楚準確地區(qū)分3種菌。

2.3 PCA結果

以不同假絲酵母菌代謝物主成分矢量為坐標軸做出的PCA得分圖見圖3～5，可見不同數(shù)據(jù)有組間離散、同類數(shù)據(jù)有組內聚集的特點。白色假絲酵母菌散點圖內部有較好的聚集，與熱帶假絲酵母菌的得分圖沒有混雜（圖3）。白色假絲酵母菌相對于光滑假絲酵母菌的散點圖團聚性更好，可以很好地與光滑假絲酵母菌區(qū)分開，且散點圖均位于95%的可信區(qū)間內（圖4）。熱帶假絲酵母菌與光滑假絲酵母菌各自

的團聚性很好，不同細菌沒有混雜（圖5）。

3 討論

近年來，隨著廣譜抗生素的濫用，腎上腺皮質激素、細胞毒性藥物和放射治療的廣泛應用，口腔假絲酵母菌性損害日益增多。Shen等[1]在研究中國老

年人根面齲細菌學時指出，白色假絲酵母菌檢出率高達63.33%。Gbris等[2]認為，白色假絲酵母菌是齲病的危險因素之一，其數(shù)量與齲有很強的相關性。由此可見，分離和快速鑒定假絲酵母菌有很重要的臨床意義。在假絲酵母菌性損害中，最常見的是白色假絲酵母菌，其毒力最強。近年來光滑假絲酵母菌檢出率也逐漸增高，且對氟康唑等抗真菌藥物并不敏感，需要在臨床中加以區(qū)分，以選擇不同的治療方案。本實驗采用代謝組學鑒定法對3種假絲酵母菌進行分析鑒定，結果發(fā)現(xiàn)：基于NMR的代謝組學及一系列化學計量學和多元統(tǒng)計學方法可以區(qū)分不同的假絲酵母菌。

近年來，代謝組學在疾病診斷，植物、微生物研究中均有大量的文獻出現(xiàn)。作為一門研究生物體內源性代謝物整體及其變化規(guī)律的學科，代謝組學實際上是分析化學、化學計量學和生命科學的交叉學科。它利用了分析化學的各種譜學技術，包括磁共振波譜、質譜、色譜、紅外和拉曼光譜等進行研究。本研究的方法是常用的磁共振波譜，通過磁共振波譜獲得海量、多維的數(shù)據(jù)后進行正確的分析是本研究的關鍵步驟。

PCA是最常用的分析方法，是將分散于一組變量上的信息集中于幾個綜合指標上，發(fā)揮了數(shù)據(jù)降維分析的作用，避免淹沒于大量數(shù)據(jù)中[3]。從PCA得分圖可觀察樣品的集聚或離散程度。樣品分布點越靠近，說明這些樣品中所含有的變量和/或分子的組成和濃度越接近；反之，樣品分布點越遠離，其差異越大；因此，得分圖也可以更形象地稱為樣品分布散點圖。本實驗中，3張散點圖中不同的細菌無交叉，同一細菌間有聚集趨勢。在光滑假絲酵母菌與熱帶假絲酵母菌的散點圖中，數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出很好的團聚性。PCA也存在一些問題，由于實驗的操作因素或樣本本身的原因經(jīng)常會有離群樣本點存在，這會嚴重影響聚類結果[4]和生物標志物的尋找結果。此

外，同一細菌的不同代謝物可能有較明顯的尺度差異，主成分的選擇會受到濃度較大組分的影響[5]，一

些濃度小的代謝組分的影響通常體現(xiàn)不出來，而這些小濃度組分往往有很重要的生物學意義。本實驗也發(fā)現(xiàn)，在同一張散點圖中，光滑假絲酵母菌相對于白色假絲酵母菌的散點圖更加分散。在后續(xù)的研

究中，筆者認為，應該摸索如何用尺度同一化的方法進行數(shù)據(jù)預處理來消除數(shù)據(jù)的尺度差異。

經(jīng)典的微生物分類方法多根據(jù)微生物形態(tài)學以及對不同底物的代謝情況進行表型分類。隨著分子生物學的發(fā)展，基因型分類法得到了廣泛應用，但是，某些菌株按照表型與基因型兩種方法分類時會得出不同的結果。在這種情況下，代謝譜分析法逐漸成為一種快速、高通量、全面的表型分類方法[6]。該方法可通過檢測細胞外代謝物進行鑒別，與現(xiàn)有其他細菌鑒定方法相比較，基于NMR的代謝組學技術具有樣品處理簡單、用量少（只需10 mg）、測定快

速（只需5 min）、無侵入性、不破壞樣品的結構性質

等優(yōu)點，可作為常規(guī)細菌鑒定分類方法的有益補充。

[參考文獻]

[1] Shen S， Samaranayake LP， Yip HK， et al. Bacterial and yeast flora

of root surface caries in elderly， ethnic Chinese[J]. Oral Dis， 2002，

8（4）：207-217.

[2] Gbris K， Nyrasdy I， Bnóczy J. Significance of assessing risk

factors for caries in their prevention[J]. Orv Hetil， 2002， 143（24）：

1467-1473.

[3] Waters NJ， Holmes E， Waterfield CJ， et al. NMR and pattern re-

cognition studies on liver extracts and intact livers from rats treated

with alpha-naphthylisothiocyanate[J]. Biochem Pharmacol， 2002， 64

（1）：67-77.

[4] Nicholson JK， Connelly J， Lindon JC， et al. Metabonomics： A plat-

form for studying drug toxicity and gene function[J]. Nat Rev Drug

Discov， 2002， 1（2）：153-161.

[5] Urbanczyk-Wochniak E， Luedemann A， Kopka J， et al. Parallel

analysis of transcript and metabolic profiles： A new approach in

systems biology[J]. EMBO Rep， 2003， 4（10）：989-993.

[6] Bundy JG， Willey TL， Castell RS， et al. Discrimination of patho-

genic clinical isolates and laboratory strains of Bacillus cereus by