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1資料與方法

1.1一般資料

患者的入選是根據(jù)美國胸科協(xié)會制定的診斷指南，存在大于3周以上的咳嗽癥狀，有至少一條哮喘癥狀，并且體格檢查出現(xiàn)相應(yīng)體征的兒童患者隨機(jī)納入研究，研究時間從2012年1月～2014年6月。

1.2方法采用

流式細(xì)胞術(shù)。所收集樣本冷凍保存，統(tǒng)一檢測，末梢血樣采集于肝素鈉抗凝管中，取100μL血樣加入中含有20μL白介素-3的緩沖液中，室溫孵育10min，然后加入100μL兒童哮喘患者或健康對照組的血清，室溫孵育20min，其中緩沖液包含0.12MNaCI，0.005MKCI，0.025MTris，pH7.6。N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP0.4mmol/L）（Sigma-Aldrich公司，圣路易，MO，USA），一種非特異性細(xì)胞活化劑，被用于陽性對照，洗滌緩沖液（0.01M磷酸緩沖鹽水包括0.01M的磷酸二氫鈉，0.01M磷酸氫二鈉，pH為7.2～7.4）被用于陰性對照。孵育結(jié)束后將樣品置于冷卻的冰上防止嗜堿性粒細(xì)胞活化和降解，繼而與熒光FITC結(jié)合的抗CD63抗體孵育BectonDickinson，F(xiàn)ranklinLakes，NJ，USA），與熒光PE結(jié)合的抗IgE抗體（Pharmacia，Uppsala，Sweden），以及PerCP結(jié)合的抗CD45抗體（BectonDickinson）避光孵育20min，加入紅細(xì)胞溶解液。2500rpm離心10min，將沉淀用緩沖液懸浮，BDFACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。在采集過程中，紅色熒光（FL2）和前向散射（FSC）和側(cè)向角散射（SSC）的特點(diǎn)是采用至少1000嗜堿性粒細(xì)胞的表達(dá)高IgE介導(dǎo)的面密度的選框進(jìn)行分析，使用FSC/SSC特性淋巴細(xì)胞的定義。然后，從這些細(xì)胞，F(xiàn)L3/FL2圖上嗜堿性粒細(xì)胞的認(rèn)定為CD45低/IgE的高表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS®軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（SPSS公司，芝加哥，IL，美國）。x2檢驗(yàn)用于比較患者組和對照組之間各個受體的表達(dá)情況。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

共納入研究的哮喘兒童有72名，健康對照組32例。嗜堿性粒細(xì)胞的識別依賴表面受體的CD45的低表達(dá)和IgE的高表達(dá)，CD63的表達(dá)可用于識別嗜堿性粒細(xì)胞是否被患者或者健康對照組的血清激活。接受來自非過敏的健康志愿者的血清刺激后，抗FcεRI的自身抗體CD63的表達(dá)數(shù)目和比例如表1所示。29/78（37.2％）的哮喘患者血清表達(dá)CD63+的嗜堿性粒細(xì)胞，CD63+嗜堿性粒細(xì)胞的人數(shù)比例是為（36.9±8.3）％。與此相反，在健康組中的血清只有4/32（12.5％）對照表明CD63+嗜堿性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的“x±s”的比例人口，這是CD63+為（26.3±5.6）％。哮喘中的比重差患者與健康的比例。有CD63+嗜堿性粒細(xì)胞的對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3討論

當(dāng)前的研究表明高親和性免疫球蛋白（IgE）和蕁麻疹受體在哮喘癥的發(fā)病機(jī)制發(fā)揮著重要的角色。使用流式細(xì)胞儀的嗜堿性粒細(xì)胞活化試驗(yàn)（BAT）表明，哮喘患者的在免疫蕁麻疹（FcεRI）的自身抗體明顯比正常人水平要高（分別為37.2%和12.5%），這與我們之前的研究是一致的。除了特異反應(yīng)性之外，哮喘機(jī)制還包括氣道反應(yīng)性和相關(guān)的炎癥。同時，自身免疫性疾病也是內(nèi)因性哮喘的癥狀。高親和性IgE受體FcεRI是一種多聚蛋白質(zhì)的表面受體，在嚙齒動物細(xì)胞中，以四聚物高分子的形式表達(dá)；在人體中以三聚物高分子的形式存在。而在肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞中，F(xiàn)cεRI則是IgE介質(zhì)導(dǎo)致的急性過敏反應(yīng)的結(jié)果。IgE高親和受體FcεRI和多價體抗原的交叉感染可能導(dǎo)致肥胖細(xì)胞的活化，或者導(dǎo)致多種炎癥中介的后續(xù)反應(yīng)。此外，過敏和過高的自身免疫的部分原因可能來自于免疫系統(tǒng)的失調(diào)，而這恰恰可能導(dǎo)致蕁麻疹和哮喘。因?yàn)檫@兩種癥狀存在著某種的聯(lián)系，比如一致的發(fā)病機(jī)制。在哮喘和自身免疫疾病中，通過觀察肥大細(xì)胞，抗體，T細(xì)胞和細(xì)胞激素可以看到，免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)原理和方法是一致的。因此FcεRI和IgE的自身抗原可能是哮喘的發(fā)病體制中的一環(huán)。另外，我們的研究表明，哮喘患者和健康對照組比較，F(xiàn)cεRI抗原引發(fā)的自身抗體陽性，更加支持了上述結(jié)論：自身免疫反應(yīng)可能參與了哮喘的發(fā)病機(jī)制。

作者：饒冬東張福輝趙靜毛劍芳單位：福建省婦幼保健院檢驗(yàn)科廈門市婦幼保健院檢驗(yàn)科