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【摘要】目的測(cè)定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量。方法采用離子對(duì)色譜法，DiamonsilC18柱，乙腈水（體積比52∶48）（每1000mL加磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫為室溫。結(jié)果鹽酸小檗堿平均回收率為99.8%，RSD為2.89%（n=6）。結(jié)論該法可用于拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】拈痛丸；鹽酸小檗堿；離子對(duì)色譜法；含量測(cè)定

Abstract:ObjectiveTodevelopamethodforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.MethodsTheanalysiswasperformedonaDiamonsilC18columnusingacetonitrilewater(52∶48,containing3.4gofpotassiumdihydrogenphosphateand1.7gofsodiumlaurylsulfateper1000mL）asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1andthedetectionwavelength265nm.ResultsTheaveragerecoveryforberberinehydrochloridewas99.8%withRSD2.89%(n=6).ConclusionThemethodcanbeusedforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.

Keywords:Niantongwan；berberinehydrochloride；hplc

拈痛丸為香港注冊(cè)的中藥成方制劑，由廣藿香、延胡索、厚樸、黃連等18味中藥制成，具有解表化濕、理氣和胃、燥濕除滿、溫中止痛之功效。臨床用于治療外感風(fēng)邪、濕滯困阻所致的惡寒發(fā)熱、腹痛吐瀉、頭暈?zāi)垦！⑸眢w上下諸痛，兼治因寒濕氣滯所致的脘腹脹痛、不思飲食。此產(chǎn)品目前無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文建立了拈痛丸中鹽酸小檗堿含量測(cè)定的離子對(duì)色譜法，該法具有分離效果好、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

LC10ATVP型高效液相色譜儀（日本島津），SPD10ATVP型紫外可見檢測(cè)器（日本島津），HW2000色譜工作站（南京千譜軟件有限公司）。DL360超聲波清洗器（寧波石浦海天電子儀器廠），工作頻率（4.5±0.05）kHz，輸出功率240W。鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713－200208），拈痛丸（中港藥業(yè)公司，每包1g，每盒12包）；乙腈、十二烷基硫酸鈉為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純，水為雙蒸水。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1樣品液制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對(duì)照品19.8mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液(鹽酸小檗堿濃度為99μg·mL-1)。

2.1.2供試品溶液的制備取拈痛丸樣品10包，研碎，取約1.5g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入鹽酸甲醇（體積比1∶100）約95mL，60℃水浴中加熱15min，取出，超聲處理30min，室溫放置過夜，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液045μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.1.3陰性對(duì)照液的制備取處方組成中除黃連外的其余成分制成不含黃連的陰性對(duì)照品，按“21.2”項(xiàng)下的制備方法處理得陰性對(duì)照液。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪馬公司），乙腈水（體積比52∶48）（每1000mL加磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g）為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫為室溫。分別取對(duì)照品溶液（鹽酸小檗堿濃度為29.7μg·mL-1）、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10μL注入色譜儀，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿計(jì)算應(yīng)不低于6500；鹽酸小檗堿的拖尾因子為1.16，保留時(shí)間約為21.8min，鹽酸小檗堿與其他組分可基線分離，陰性樣品不干擾樣品測(cè)定，見圖1。

A.對(duì)照品;B.樣品;C.陰性1.鹽酸小檗堿

圖1鹽酸小檗堿對(duì)照品、樣品及陰性的高效液相色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatogramsofberberinehydrochloride(A)andsample(B)andnegative(C)

2.3方法學(xué)考察

2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別吸取一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品貯備液，加甲醇稀釋成鹽酸小檗堿濃度為4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4μg·mL-1的溶液。依次進(jìn)樣10μL，每個(gè)濃度測(cè)定3次以上。以峰面積（A）對(duì)對(duì)照品溶液系列濃度（C）進(jìn)行回歸，得鹽酸小檗堿回歸方程A=44782C+42971，r＝0.9999。表明鹽酸小檗堿濃度在4.95～59.4μg·mL-1之間與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.2精密度試驗(yàn)取質(zhì)量濃度為29.7μg·mL-1的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)測(cè)定5次，其峰面積的平均值為1387708，RSD為1.38%，表明儀器精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液（CK20060201）在0，2，4，6，8h分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的平均值為1341450，RSD為216%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（CK20060201）樣品6份，照“212”方法制備，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為1.914μg·mL-1，RSD為0.85%，表明方法精密度良好。

2.3.5加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批號(hào)樣品（CK20060201）共6份，加入相應(yīng)量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，照“2.1.2”方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。鹽酸小檗堿平均回收率為99.8%，RSD為2.89%，表明本方法準(zhǔn)確可靠。

2.4樣品測(cè)定取拈痛丸樣品3批，照“2.1.2”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液（29.7μg·mL-1）與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。

表1鹽酸小檗堿回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest(n=6)

表2樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）（略）

Tab.2Resultsofsampledetermination(n=3)

3討論

3.1鹽酸小檗堿是中藥黃連的有效成分，含量較高，故以其為指標(biāo)來控制拈痛丸的質(zhì)量。

3.2本文分別選用乙腈0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液［1］、乙腈0.1%磷酸溶液［2］為流動(dòng)相測(cè)定鹽酸小檗堿，但分離效果不好。參照文獻(xiàn)［3］采用離子對(duì)色譜法，并調(diào)整乙腈與水的體積比為52∶48，方得滿意結(jié)果。

3.3采用鹽酸甲醇（體積比1∶100）［4］為溶劑，分別超聲提取20、30、40、50、60min，結(jié)果表明30min即可提取完全，所以選擇超聲時(shí)間為30min。

3.4鹽酸小檗堿的含量測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定波長(zhǎng)有345nm［4］、347nm［5］、265nm［6］，測(cè)定中曾以345、347nm為測(cè)定波長(zhǎng)，但鹽酸小檗堿與其他峰的分離度達(dá)不到要求，且峰型不好，以265nm為測(cè)定波長(zhǎng)，鹽酸小檗堿峰型及與其他峰的分離好，所以本文選擇測(cè)定波長(zhǎng)為265nm。

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