在线观看av毛片亚洲_伊人久久大香线蕉成人综合网_一级片黄色视频播放_日韩免费86av网址_亚洲av理论在线电影网_一区二区国产免费高清在线观看视频_亚洲国产精品久久99人人更爽_精品少妇人妻久久免费

首頁 > 文章中心 > 心中的玫瑰

心中的玫瑰

前言:想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎?我們特意為您整理了5篇心中的玫瑰范文,相信會為您的寫作帶來幫助,發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

心中的玫瑰范文第1篇

沒和母親結(jié)婚前,父親有一個很相愛的戀人。這是個秘密,除了父親和那個女孩彼此心照不宣,其他人誰都不知道,包括爺爺奶奶。那個女孩的太爺爺是我奶奶的遠(yuǎn)房表哥,論輩分她該叫我父親“叔叔”,可她從沒叫過,她愛我父親,她要做他的妻子。這個秘密是我8歲那年從母親口中得知的。直到大學(xué)畢業(yè),我才從父親那里知道了故事的全部。

“我們打小一塊兒玩,她是我的玩伴中唯一的女孩子。任性的她從小就特別黏人,我的‘隊伍’只要被她瞄見,就擺脫不掉了,她會很快進入‘副總’角色,甩也甩不掉……”

說這話時,父親臉上洋溢著一個收藏家談及自己的稀世珍品時才有的表情――迷醉的眼神、微微上揚的嘴角。我仿佛看到了夕陽西下時,一個扎著羊角辮的小女孩扯著一個男孩的衣角歡呼雀躍,拖著長長的影子歡快地結(jié)伴回家。

“你們什么時候開始的?”

父親好像沒有聽到我的發(fā)問,自顧自地說下去:“不知不覺我們就到了對性別很敏感的年齡。她粲然顯露的美,讓我既自豪,又自卑。說不清什么時候開始的。是我得了胸膜炎,她以借東西的名義探頭探腦時?還是那幫小子起哄時?抑或是家人開玩笑說給我找媳婦,她投來羞澀又幽怨的眼神時?或者我沒考上大學(xué)回家當(dāng)了會計,她放棄了城里姨媽給她安排好的工作,回家告訴我時?我真不知道?!?/p>

“那段日子,我的心總被一種莫名的希冀撞擊著,我自己也不清楚那是什么。我只知道,當(dāng)別人提到她的名字時,我會立刻豎起耳朵,表面上卻裝得漫不經(jīng)心。一想到現(xiàn)實問題,我就會陷入痛苦焦灼的矛盾之中。但該來的還是來了,我必須得相親了。24歲的我沒有任何理由再去拒絕父母的要求。你爺爺奶奶是很傳統(tǒng)的人,他們接受不了,更無法理解我和她的關(guān)系。我的心能頂住世俗的目光,卻無法抗拒老人的眼淚。”說到這里,父親深深地埋下了頭,像一個丟失糖果的孩子。

“你相親的人就是我媽媽吧?”

也許我不該在這個時候提到母親,可我忍不住為母親難過,我不甘心母親是父親生命中的第二。至今我依然記得8歲那年的事。童年的我喜歡極了隔壁的那個長得像花兒一樣的藍(lán)姐姐。我想回家問媽媽,那個姐姐喜不喜歡我,是否抱過我?來不及把氣兒喘勻,我就竹筒倒豆子般對著正在做飯的媽媽稀里嘩啦說了一通。媽媽半天沒吭聲,像是要哭了。我小心地走過去拉母親的手,我感覺到母親的眼淚撲簌簌落在我的發(fā)間。母親突然開口了:“就是她,是她逼問你爸爸后不后悔,她有什么資格?”8歲的我斷然是聽不明白母親的話的,可我還是從母親反常的行為里感到了一些不和諧的東西。母親也許不知道那件事在我幼小的心靈上留下的痕跡?;叵肫鹉赣H那天包的餃子,一定是放了很多的蔥和姜,全是辣的。

“你媽媽是個很稱職的妻子,比我小兩屆,是學(xué)校里的才女。見面那天,你媽媽穿的是白色的確良襯衫,淡藍(lán)色的褲子,兩條不長不短的麻花辮兒垂在胸前,靜靜地站著。她的眼睛很漂亮,還有一張電影明星般的瓜子臉,我心想就是她了!”

“你就那么自信我媽一定會看上你?”

“這點兒自信還是有的,我覺得我都帥呆了!”“哈哈……”父親大笑起來,我也大笑起來。

“就在我和你媽相親的頭天晚上,她找過我,問我能不能帶她走?我沒回答她,更沒法答應(yīng)她。她哭著跑了,我的心像被刀子剜了一樣。這輩子注定給她幸福的人不是我。那時你爺爺奶奶都老了,我想是該為他們活著了,我要給他們幸福,他們需要我,未來的家庭也需要我。你媽媽賢淑溫順,家里的一切都被她打理得井井有條。婚后的生活雖然波瀾不驚,但我卻能感受到實實在在的幸福。一年后你出生了,家里更是笑聲不斷,你就是我們的‘開心果’?!?/p>

“那你愛我媽媽嗎?”

心中的玫瑰范文第2篇

最近一段時間,我明顯地感覺到,老公在床上有些心不在焉,每個月的那幾次,往往是草草收兵,一副例行公事的樣子。

記得剛結(jié)婚那陣子,每天,我們都會有一個美好的夜晚。

婚前,我對書刊上的一些夫妻的描繪表示懷疑,等結(jié)了婚才知道,原來男女間的事情竟然如此美妙。

愛如潮水般散去后,老公都會溫柔地對我說:“丫頭,我是不是位高超的舵手?”當(dāng)老公用那種親親的柔柔的眼神看著我說這句話時,我都會用我的拳頭不住地捶打著他那寬厚的肩膀,嘴里說著你壞你壞,心里卻幸福得要死。我想,雖然我只是蕓蕓眾生中一個普通得不能再普通的女人,可我卻是這世界上最最幸福的小女人。

我無數(shù)次地憧憬著,我和老公的這艘愛情航船會永遠(yuǎn)這樣駛往幸福的彼岸,可我沒想到,在我和老公結(jié)婚七年后,我們這艘婚姻的航船竟在險灘上擱淺了。也不知道從什么時候開始,老公這個舵手時?!伴_小差”,我們的不再琴瑟和諧。每逢我有那個要求,他常常以累了困了為由婉言拒絕我。

可是我發(fā)現(xiàn),老公的身體并沒有?。∷徊贿^對我失去了興趣而已。

老公,你這是怎么了?難道,真應(yīng)了“七年之癢”這句話了嗎?

癥結(jié)出在哪里呢?我是個遇事較真的人,我決定找出老公對我喪失興趣的原因。

(2)

夫妻間的這種事情畢竟屬于難言之隱,我決定先從自身查找原因。

我知道,熟悉的地方?jīng)]景色,再好吃的食物要是頓頓吃,用不了多久就會膩了。在男人面前,女人就是風(fēng)景就是食物。結(jié)婚幾年,老公對我熟悉得不能再熟悉了,我決定悄悄“包裝”一下自己,給老公煥然一新的感覺。

老公不止一次對我說,雖然男人更多的時候喜歡文靜的淑女,但女人在穿著上有時也要學(xué)會一點點“野性”,可我對此并沒有上心。我反駁他說,居家過日子,哪來的那些浪漫?可這次,為了取悅老公,我只好“改頭換面”了。

那天,我穿了一身遠(yuǎn)遠(yuǎn)望去有點夸張的艷麗裙子,化了比平時稍重的妝。我這樣做,就是想吸引老公的注意。然后,我給老公打了電話,讓他陪我逛公園。老公開始有些遲疑,但最后還是答應(yīng)了。

等見了面,老公用非常驚訝的眼神看著我,然后拉過我的手笑著說:“我發(fā)現(xiàn),其實,你有一副很漂亮的身材,按當(dāng)今流行的標(biāo)準(zhǔn)來說,你屬于那種寬肩、蜂腰、圓臀、長腿的體型。你今天的這身打扮,看上去要比實際年齡小一些,我第一眼看到你的時候,以為哪來的明星呢!”

那天,一直到離開公園,我們的手也沒分開過。老公說:“我們好久沒這么開心過了,我好像又回到我們相戀的日子?!?/p>

我知道,我“包裝”自己的預(yù)期效果達(dá)到了,甚至比想象的還要好。

到了晚上,我將臥室布置得溫馨浪漫。有人說,朦朧的粉紅色的燈光,最能喚起夫妻對性生活的感覺。我將床頭燈悄悄換成了柔和的粉紅色燈,晚上,在洗完澡后換上新買的性感內(nèi)衣,灑上老公喜歡聞的香水,先上了床,準(zhǔn)備給他一個驚喜。

老公在微微驚愣之后,很快,就將我擁在懷中。

那天晚上,老公又成了浪尖兒上勇猛的舵手,帶領(lǐng)我沖上一個又一個快樂洶涌的巔峰。我依偎在老公的懷里,慶幸自己找到了久違的感覺。

我知道,老公之所以“性”趣大減,一定是我對老公造成了審美疲勞的緣故。

我本以為老公會因此回到從前,可沒過多久,即便我將自己打扮得再漂亮性感,再怎樣調(diào)他胃口,老公又對我愛搭不理了。我明白了,雖然我將自己包裝了一下,可換皮沒換瓤,我只不過是稍稍刺激了一下老公的激情。

難道,老公在外頭有了別的女人或者精神背叛了我?我知道,精神的背叛有時候比肉體的背叛更為可怕……

(3)

我真真切切地感覺到,在我和老公中間,一定有那么一個女人,就是這個女人抓走了老公的心?,F(xiàn)在,老公雖然沒有跟我提出離婚,可他的心已經(jīng)走了。

我開始格外留心老公的一言一行,并將可能跟老公有“親密接觸”的女性像過篩子似的篩了篩,可我并沒有發(fā)現(xiàn)老公移情別戀的蛛絲馬跡。

難道是我多疑了?

就在我為自己的判斷喪失耐心的時候,我忽然有了新的發(fā)現(xiàn)。這天,我竟然在衛(wèi)生間的垃圾筒內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一只用過的安全套。現(xiàn)在,老公正和我打著身體的冷戰(zhàn),即便偶爾有的那么一次,也沒用過安全套??!

我當(dāng)時就暈了。盡管我料到老公會移情別戀,可那只是我的推測,當(dāng)事情真正擺在面前的時候,我還是受不了。我當(dāng)時就想拿著這只骯臟的東西沖到老公面前質(zhì)問他,可我想了想,還是忍住了。

就在我滿腹狐疑的時候,終于發(fā)現(xiàn)了老公的秘密。

這天晚上,都十點多鐘了,老公還在書房里。我悄悄下床,想為老公做點夜宵。隔著玻璃,我見老公坐在轉(zhuǎn)椅里,正在瀏覽網(wǎng)上的美女圖片。讓我怎么也想不到的是,老公竟然在!

看著老公陶醉的神情,我只好悄悄回到臥室。我終于明白,老公之所以對我不感興趣,是因為他用的方式在想象中感受著和那些網(wǎng)上的美女歡愛時給他帶來的。

第二天一早,我果然又在垃圾筒的底部發(fā)現(xiàn)一只用過的安全套。

我終于明白:夾在我和老公之間的“那個女人”,其實就是這些網(wǎng)絡(luò)上的。

我不禁在心底涌起一縷悲哀。我沒想到,網(wǎng)上的居然成了我的“情敵”!我想不通,再好,畢竟是沒有生命的,也不及我這個大活人具備真實感吧!可現(xiàn)在,我居然敗給了這些虛幻飄渺的。我怕老公難堪,沒有將這件事情揭穿。

我在一本雜志上看過這樣一句話,夫妻是這條鋼絲繩上的兩個演員,誰先掉下來就意味著夫妻生活的失敗。即便我們誰都不是贏家,但率先失敗的卻是我。

我再一次陷入困惑和迷茫之中。

(4)

有一天晚上,因為一點瑣事,我們吵過后,老公對我說:“我們離婚吧!”我驚呆了。我怎么也沒想到,他會對我說出這種話來!

“為什么?”我強忍著,不使眼中的淚水落下來。

老公嘆息了一聲,說:“不為什么,就是過夠了?!?/p>

在我的心中,老公就是天空,我從沒想過有一天我們會分開。盡管我一再追問老公為什么,可他最終還是沒有說出來。

盡管我和老公的婚姻沒有因此終結(jié),可老公比以前更孤獨了,每日回到家就將自己關(guān)在書房里,我們之間的交流越來越少,枕席間的交流更趨于零。我想,如果沒有女兒,他真的會義無反顧地離開我?,F(xiàn)在,維系我們的僅僅是道義和責(zé)任。

就在我近乎絕望的時候,忽然想到了一位開心理診所的朋友。聽了我的講述,朋友說:“你每天在他面前晃來晃去,甚至寸步不離,深層的原因就是你不再創(chuàng)新自己,甘于為丈夫作陪襯,這種行為最初還能被丈夫接受,但久而久之,夫妻間的思想距離、觀念距離、生活方式距離隨著時代的變化而越拉越大,丈夫不再愿意像從前那樣廝守一個觀念落伍、整日以家庭居室為樂的妻子。還有,造成夫妻處于困惑和迷茫之中的原因還有一個,那就是工作壓力過大。現(xiàn)在生活節(jié)奏日益加快,尤其是男人。他們肩上擔(dān)負(fù)著養(yǎng)家糊口的重任,很容易造成生理和心理上的失衡。所以,他在網(wǎng)絡(luò)上尋找宣泄也在情理之中?!?/p>

最后,朋友坦言,對于上述夫妻失調(diào)者,搶救的辦法只有一個,就是提高自身素質(zhì),提高生活質(zhì)量,為老公減壓,才能找回“性”福。

朋友一言中的。

老公是做售后的,收入雖豐但不穩(wěn)定,老公常嘆息說要改行,可又舍不得他深愛的專業(yè)?,F(xiàn)在,我閑在家里,身為一家之主的他,一定感到了肩上沉重的壓力。誰不渴望有個寬松的生活環(huán)境呢?

于是瞞著老公,我應(yīng)聘到了一家醫(yī)藥公司上班。上班時,我兢兢業(yè)業(yè);下班后,我對老公溫言軟語,不時地還撒個嬌。我驚喜地發(fā)現(xiàn),老公看我的眼神也從最初的驚訝到欣賞直至后來的親切。

讓我感到溫馨的是,每天下班后,只要有時間,老公竟然將飯菜做好等著我回來。以前,他可是從不做家務(wù)的。老公對我越來越體貼了。當(dāng)聽說我被提為藥房店面經(jīng)理,老公說:“老婆,你真是越來越能干了!這下,我就沒后顧之憂了,可以放手大干一場了。兩年內(nèi),咱們換房,買車。老婆,我不會讓你失望的!”見我靜靜地聽著,老公突然摟著我的腰說:“其實,你是個挺有味道的女人。”說罷,溫柔地?fù)砦胰霊选B犞瞎目洫?,我激動得想哭?/p>

那天晚上,老公又成了一個勇猛的舵手,一次次把我?guī)蠍鄢钡膸p峰……

打那兒以后,我和老公的終于峰回路轉(zhuǎn),我們又遠(yuǎn)航了,我再也沒有在垃圾筒內(nèi)發(fā)現(xiàn)安全套。一次激情過后,老公對我說:“有件事情其實我很對不住你。在咱們冷戰(zhàn)的日子,我迷上了網(wǎng)絡(luò)圖片。有一次我實在沒控制住,竟然了,從此,一發(fā)不可收,在的時候用了安全套,咱們家床頭柜里的安全套差不多都讓我用光了。”

我喜歡老公的真誠??粗⒆影阈呒t的臉,我一樂:“傻瓜,網(wǎng)絡(luò)中的美人再好,也比不上我這個大活人吧?”

在我的戲謔下,老公詭笑:“男人嘛,要么征戰(zhàn)在沙場,要么馳騁在床上?!蔽尹c著他的額頭,說:“瞧你那沒出息的樣兒?!毙睦飬s像被蜜浸過一般的甜。

心中的玫瑰范文第3篇

我緊蹙眉毛,深吸一口氣,剛要張開嘴訓(xùn)斥……

“又看見你了,玫瑰花一樣的老師!”坐在最前排的宇突然站起來沖我大聲地說??粗t撲撲的小臉,我張開的嘴頓時沒了聲音。教室里依然嘈雜,他的聲音卻很清晰地傳進了我的耳朵。

玫瑰花一樣的老師,多美的稱呼??!瞬間,我心里的不快消失了一半。我走到他面前俯身問道:“怎么把老師和玫瑰花聯(lián)系到一起了?”

“老師今天穿的衣服上有朵小小的玫瑰花,我就想到了你的笑臉。你笑起來的時候也像朵玫瑰花?!彼苷J(rèn)真地說。

他的話,讓我的心情豁然開朗。

這個小家伙,不止一次地對我說過很多讓我開心的話。每次去他們班上課,他都會早早地等在教室外的走廊上,看見我拿著教具走來,立刻歡天喜地地跑到我面前,接下我手上的東西,并且跟我說話。有趣的是,他多數(shù)時候不會按我的姓來稱呼我,而是用一些形容詞來代替我的姓。比如,他會說“漂亮的老師”“充滿陽光的老師”“可愛的老師”“笑瞇瞇的老師”“激情洋溢的老師”……他的小腦袋瓜里似乎有著說不完的形容詞。

每次聽他對我說這些話的時候,我都非常開心,心情也變得異常愉快。其實,除了宇,還有很多學(xué)生都是喜歡我的,只不過,宇更敢于把他對我的感受直接地表達(dá)出來。我不想辜負(fù)他們對我的喜愛!因為這樣,我在課堂上更加注意自己的言行舉止,更加投入和充滿激情。學(xué)生們也在我的感染下,愉快而積極地和我進行課堂互動,一節(jié)課往往是在其樂融融的氛圍中結(jié)束。甚至于在課后,我還會和學(xué)生談?wù)撘恍┧麄兿矚g的話題,幫助他們解決彼此間的小矛盾,教他們與人為善,助人為樂。我在努力把自己最美好的一面展示給學(xué)生的同時,也享受著學(xué)生們對我的愛戴。

但是,前段時間,我對學(xué)生做了一次教學(xué)效果測試,結(jié)果和我所期望的目標(biāo)相差甚遠(yuǎn)。那些我精心設(shè)計的教學(xué)游戲,花費不少時間制作的單詞卡片,以及每一次的激情操練,到最后卻似乎只是走了一個過場。想到我付出的努力和熱情換來的卻是令人失望的結(jié)果,我不禁有些泄氣。連續(xù)幾日,我沒有了上課的激情。我機械地按照教學(xué)步驟上課,不要他們說話,不要他們隨便發(fā)言,也不再跟他們做游戲。如果學(xué)生認(rèn)讀單詞不到位,我就會失去耐心,就會生氣。學(xué)生們眼里笑瞇瞇的老師變成了不拘言笑、兇巴巴的老師。

可是宇對我說,我是個像玫瑰花一樣的老師??!玫瑰是美麗和愛的象征,而我這段時間的表現(xiàn)美嗎?有愛心嗎?僅僅因為他們沒有達(dá)到我所期望的目標(biāo)就對自己失去信心,對他們失去耐心甚至遷怒于他們,可我平時不是常常教育他們要勇于接受挫折、不怕失敗嗎?那些鼓勵他們要自信、要奮發(fā)、要努力的話,到我這里怎么就失去了意義呢?

我突然感到很羞愧!

老師的職責(zé)是教書育人,“教書”是向?qū)W生傳授知識的過程,我們只需要利用一定的教學(xué)技巧和教學(xué)手段就能達(dá)到目的。而“育人”,卻需要用我們自身的道德魅力言傳身教。所謂“其身正,不令則行。其身不正,雖令不從。”我們的一舉一動、一言一行都會在無形中影響學(xué)生。也只有一個儀表整潔、談吐優(yōu)雅、和藹可親、胸懷寬廣、平易近人的老師才會讓學(xué)生“親其師,信其道”。作為老師的我,深知其中的道理,卻很難時刻注意到自己的言行。

是那個小男孩用美好的稱呼在告訴他們喜歡的老師:“你笑起來的時候像朵玫瑰花!”他在提醒我,他們喜歡那個漂亮的、陽光的、充滿愛心和激情的老師!

心中的玫瑰范文第4篇

關(guān)鍵詞:煤礦井下軌道;運輸新技術(shù)

一、延長蓄電池電機車在煤礦井下的使用壽命

煤礦井下采區(qū)的平巷運輸多采用蓄電池式電機車運輸。由于各單位管理和使用方法有較大區(qū)別,蓄電池的使用壽命也存在較大差異。

管理方法不同。有些煤礦在采區(qū)使用地點就地充電,由機車的使用人員代管。機車上使用一塊電池,將備用電池充電。其缺點是充電機的利用率低;蓄電池中的電解液蒸發(fā)后得不到及時的補充;充電點不能保證建在總回風(fēng)巷附近;充電時間沒有保證。有的煤礦在井下充電室按《煤礦安全規(guī)程》規(guī)定使充電室內(nèi)的回風(fēng)流直接進入總回風(fēng)巷,并安裝多臺充電機同時對多組蓄電池進行充電,為井下所有的蓄電池電機車提供足夠的電源,在機車使用地點設(shè)換電點。其缺點是須提前指定運輸?shù)攸c。

充電方式不同。分散充電―隨掘進工作地點的變更隨之移動充電機的位置,多數(shù)單位對一臺充電機充電過程中產(chǎn)生的有毒氣體不如對待瓦斯那樣重視,違反了《煤礦安全規(guī)程》中的規(guī)定,含有氫氣的風(fēng)流對現(xiàn)場人員身體健康有傷害。集中充電―充電室位置設(shè)計符合《煤礦安全規(guī)程》的規(guī)定,充電過程產(chǎn)生的有毒有害氣體能直接進入到總回風(fēng)巷中,對現(xiàn)場人員身體健康沒有傷害。

電解液配制。電解液密度過大或過小都影響到蓄電池容量和使用壽命。蓄電池初充電。電解液的高度在單只蓄電池中以高出極板15mm為宜。液面過高,初充電過程中由于產(chǎn)生熱量而膨脹溢出箱體外,腐蝕箱體和地面;液面過低,因發(fā)熱蒸發(fā)露出極板,使蓄電池容量降低。初充電完畢停電24h后再調(diào)整單組蓄電池中的電解液密度。如果電解液密度高于1.26kg/L則補充蒸餾水;如電解液密度低于1.23kg/L則補充密度為1.30kg/L的電解液。

二、變頻調(diào)速技術(shù)在電機車電動機的應(yīng)用

電機車是礦井軌道運輸?shù)闹饕獱恳O(shè)備。其中,架線式牽引機車多年來一直沿用結(jié)構(gòu)復(fù)雜、故障率高和維修費用大的直流電動機,且目前國內(nèi)絕大多數(shù)礦山牽引機車還在使用觸頭電阻調(diào)速方式,處于耗電量與維修量大的狀態(tài)。由于變頻調(diào)速牽引機車采用了故障率低和性能可靠的三相異步交流鼠籠式電動機,結(jié)合技術(shù)先進與節(jié)電效果顯著的變頻調(diào)速器,取代直流電機車比較落后的驅(qū)動技術(shù),達(dá)到了當(dāng)代世界先進技術(shù)水平。由于工作環(huán)境特點所致,礦用電機車調(diào)速系統(tǒng)處于頻繁的啟動、制動和加減速等狀態(tài),還要適應(yīng)負(fù)荷上下坡和顛簸路況等情況,因此要求電動機啟動轉(zhuǎn)矩大、過載能力強。另外,調(diào)速系統(tǒng)不但要能四象限運行,還要能再生制動到低速。這樣,當(dāng)負(fù)載轉(zhuǎn)矩增大時,轉(zhuǎn)速就能迅速下降,而電動機輸出功率基本不變,從而使電動機不易因負(fù)載增大而引起過載。反之,當(dāng)負(fù)載變小時,電動機轉(zhuǎn)速能自然上升,以利于提高生產(chǎn)效率。此外,為防止主輪打滑,調(diào)速系統(tǒng)還應(yīng)考慮具有最大轉(zhuǎn)矩限幅功能。由于逆變器和電動機都安裝在電機車上,所以整個調(diào)速系統(tǒng)應(yīng)盡可能設(shè)計得體積小、重量輕、硬件結(jié)構(gòu)簡單和控制方便。對于直接轉(zhuǎn)矩控制而言,在高速運行階段,除了電動機定子電阻不需知道其它參數(shù),所以直接轉(zhuǎn)矩控制對電動機參數(shù)的依賴性比矢量控制要低許多。其產(chǎn)品包括5t、8t和10t隔爆型電動機斬波調(diào)速控制裝置,目前已廣泛應(yīng)用于以電池為動力源的交流電動機牽引驅(qū)動礦山電機車上。

三、煤礦工作面移動變電站運輸安全制動系統(tǒng)

我國煤礦機械化水平不斷提高,設(shè)備向重型化、復(fù)雜化發(fā)展,井下采煤工作面綜采設(shè)備被廣泛使用,與其相配套的采煤工作面移動變電站設(shè)備龐大。一個大型煤礦工作面移動變電站使用的設(shè)備往往要幾十輛平板車裝載運輸,但采煤工作面巷道起伏坡度大、地質(zhì)條件復(fù)雜,且變電站隨工作面推進而頻繁移動,尤其在坡道上由于斷繩、斷銷、斷連桿等原因有時會形成跑車事故,給人員和設(shè)備安全帶來很多隱患,同時可能造成工作面水、電、液和部分設(shè)備供應(yīng)中斷,給煤礦生產(chǎn)造成直接或間接經(jīng)濟損失。為解決這個問題,對工作面移動變電站運輸安全制動系統(tǒng)進行研究,設(shè)計一種自帶制動的平板車與其它車輛配套使用,設(shè)備安裝在制動平板車上,確保設(shè)備運行安全,是完全必要的。

新研制的工作面移動變電站運輸安全制動系統(tǒng)設(shè)計為多臺制動平板車串聯(lián)聯(lián)接,通過液壓系統(tǒng)實現(xiàn)同時快速制動。這種制動平板車主要由車架、制動器、輪對、快速釋放閥、液壓系統(tǒng)等組成。制動器采用了提閘式抱軌制動,制動力由碟形彈簧產(chǎn)生,屬失效安全型。制動器在制動平板車運行過程中抬離軌面,故可適于普通道岔的巷道,并與其它輔助設(shè)備配套使用。

四、制動平板車

順槽移動變電站是綜采工作面水、電、液和部分備件的臨時供應(yīng)中心,通過絞車的雙向牽引,實現(xiàn)同綜采工作面的同步移動,極大提高了工作效率。在絞車牽引過程中,由于斷繩、斷銷、斷連桿等原因,有時會發(fā)生跑車事故,給人員、設(shè)備等造成威脅,同時可能造成綜采面的供應(yīng)中斷。

新研制的制動平板車在正常工作時可以自由牽引;遇到斷繩等事故發(fā)生時,可推動手動緊急釋放閥,實現(xiàn)緊急制動;還可以根據(jù)需要實現(xiàn)慢速工作制動。緊急制動閘由閘塊、閘鉗、缸體、彈簧等組成。正常工作時,制動缸體A腔內(nèi)的液壓力把彈簧壓緊,帶動閘鉗轉(zhuǎn)動,把閘塊抬離軌面,從而保證制動平板車行走、移動時能正常通過軌道和道岔。當(dāng)需要制動時,釋放制動缸體A腔的液壓力,彈簧便壓緊活塞并帶動缸體一起移動,通過閘鉗使閘塊壓緊軌道,實現(xiàn)制動功能。閘塊是制動平板車的關(guān)鍵部件之一,由基體和粉末冶金燒結(jié)而成。粉末冶金屬脆性材料,故正常停車制動時要求采用慢速停車制動,防止閘塊同軌道的沖擊而降低閘塊的使用壽命。

試驗中發(fā)現(xiàn)多臺車聯(lián)動的響應(yīng)速度偏低,原因是緊急制動時聯(lián)動管路內(nèi)的乳化液壓力難以瞬時降低,從而導(dǎo)致快速釋放閥閥芯不能迅速移動,致使快速釋放失敗。后來對液壓系統(tǒng)進行了改進,并增設(shè)了先導(dǎo)閥。由于聯(lián)動先導(dǎo)閥口的管路乳化液少且無任何補充,所以壓力釋放快,又因為各車壓力釋放系統(tǒng)相對獨立,故各聯(lián)動車輛能實現(xiàn)真正的快速反應(yīng)。

五、斜巷常閉擋車欄自動控制裝置研究應(yīng)用

其工作原理如下:當(dāng)列車正常下行的時候,只要行駛至測速區(qū)AB(傳感器)處,傳感器A接收到礦車下行的指令對其進行檢測。傳感器B發(fā)出信號傳遞給可編程自動化控制器,由可編程自動化控制器判定礦車是否在正常行駛速度范圍內(nèi)。若礦車正常運行,可編程自動化控制器觸發(fā)電磁氣控閥動作,擋車欄抬起,指示燈變?yōu)榧t色;若礦車超速運行,則常閉擋車欄不動作并且發(fā)出報警信號,將信息反饋給轎車司機,預(yù)防事故的發(fā)生;當(dāng)?shù)V車下行并通過傳感器C的時候,傳感器C發(fā)出信號給可編程自動化控制器,可編程自動化控制器觸發(fā)電磁氣控閥動作,擋車欄常閉,指示燈變?yōu)榫G色。礦車上行時首先經(jīng)過傳感器C處,傳感器C接收到礦車上行的指令,傳感器C發(fā)出信號傳遞給可編程自動化控制器,可編程自動化控制器判定礦車是否在正常行駛速度范圍內(nèi)。若礦車正常運行,可編程自動化控制器觸發(fā)電磁氣控閥動作,擋車欄抬起,指示燈變?yōu)榧t色;若礦車超速運行,則常閉擋車欄不動作并發(fā)出報警信號;當(dāng)?shù)V車上行行并通過傳感器B的時候,傳感器B發(fā)出信號給可編程自動化控制器,可編程自動化控制器觸發(fā)電磁氣控閥動作,擋車欄常閉,指示燈變?yōu)榫G色。操作系統(tǒng)還具有電手動操作和氣手動操作。

心中的玫瑰范文第5篇

【摘要】 建立氯霉素,克倫特羅和雌二醇 3種獸藥殘留同時檢測的懸浮芯片法。通過將3種獸藥的BSA蛋白結(jié)合物偶聯(lián)于懸浮芯片的固相載體——聚苯乙烯熒光微球上作為檢測探針,采用間接競爭法,在液相反應(yīng)體系中,3種小分子獸藥抗原和微球上的獸藥結(jié)合物共同競爭液相中各自特異性的生物素化單抗,再加入藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素,反應(yīng)后檢測獲得熒光信號,繪制出3種獸藥殘留檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時進行3種獸藥的常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附法標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定。在檢測技術(shù)、檢出限、檢測區(qū)間、特異性、盲樣測定和多元分析等方面對兩種方法進行比較。除了特異性外的其它指標(biāo)的比較中,懸浮芯片法均具有明顯優(yōu)勢。兩種方法的特異性檢測具有良好的一致性。高通量懸浮芯片技術(shù),具有操作簡單、靈敏快速和成本低廉等優(yōu)點,為多種獸藥殘留的快速檢測提供了新方法。

【關(guān)鍵詞】 懸浮芯片, 酶聯(lián)免疫吸附法, 殘留, 微球, 中位熒光強度值

Abstract A novel suspension array technology was established for the detection of three kinds of veterinary drug residues: chloramphenicol, clenbuterol and 17βestradiol. The three conjugates in which veterinary drugs coupled with BSA were immobilized on the solid carrier of the suspension microarraypolystyrene fluorescent microspheres/beads as detective probes. Indirect competitive technology was employed. Competitive reactions between the veterinary drugs in the aqueous phase and the veterinary drugsBSA conjugates on the beads for coupling with their complimentary specific biotinylated monoclonal antibodies were carried out. And then, straptavidinphycoerythrin was added for coupling and the fluorescent signals were captured. Afterwards the detective standard curves were plotted. The regular ELISA standard curves of the three veterinary drugs were also plotted. Comparison between suspension array and regular enzymelinked immunosorbent assay(ELISA) was in the respects of the detective technology, the detection limits, the detective ranges, the samples detection and the multianalysis. Suspension array technology is distinct advantageous except for specificity. There was well consistent performance between the two methods. The highthroughput suspension array provides a novel method for multianalysis of veterinary drugs with simple operation, sensitive, rapid and low costing.

Keywords Suspension microarray, Enzymelinked immunosorbent assay, residue, microspheres beads, median fluorescent intensity

1 引 言

近年來,食品安全已成為社會共同關(guān)注的公共衛(wèi)生問題,而獸藥殘留成為食品安全監(jiān)管的重要問題。獸藥殘留如克倫特羅 (clenbuterol, CL)、氯霉素(chloramphenicol, CAP)和雌二醇 (17βestradiol, E2)的濫用和食用可導(dǎo)致多種健康損害[1~6]。加強獸藥殘留檢測分析是監(jiān)管和控制獸藥殘留的重要手段。因此,簡單、快速和靈敏的微痕量檢測技術(shù)的研究和創(chuàng)新尤為重要。目前,酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)[7,8]是獸藥殘留的主要檢測方法之一具有簡單、快速、靈敏度高和特異性強等諸多優(yōu)點[9]。懸浮芯片技術(shù)是一種多功能的液相芯片分析平臺,既具有固態(tài)片膜芯片的高通量特性,又具有操作簡便、重復(fù)性好、靈敏度高等優(yōu)點。目前,對該技術(shù)的研究多集中于大分子蛋白質(zhì)和核酸的檢測[10~12],并未見應(yīng)用懸浮芯片同時檢測多種獸藥CAP、CL和E2的報道。本研究采用懸浮芯片法和常規(guī)ELISA法對3種獸藥進行同時檢測,并在靈敏度、特異性、檢出限等方面進行比較。

2 實驗部分

2.1 儀器和試劑

BioPlex懸浮系統(tǒng),Model 680型酶標(biāo)儀(美國BioRad公司);MALDITOFMS REFLEXⅢ型質(zhì)譜儀(德國Bruker公司),DU530型紫外可見分光光度計 (美國Beckman公司);6930型冷凍離心機(日本Kubota公司);MS3型旋渦混勻器(德國IKA公司),YM10過濾柱 (孔徑1.2 μm,美國Millipore公司),Costar96孔酶標(biāo)板 (美國Corning公司); 日立S4500型掃描電鏡 (日本Hitachi公司)。

3種不同編碼的熒光微球(beads,Φ=5.6 μm)和蛋白氨基偶聯(lián)試劑盒(包括激活緩沖液和儲備緩沖液)購自美國BioRad公司;CAP單克隆抗體和E2單克隆抗體(美國Biodesign公司);CL單克隆抗體 (英國Abcam公司);3種單抗的生物素化由本實驗室完成;CAP、CL、E2、EDC、SulfoNHS、沙丁胺醇、萊克多巴胺、N,N二甲基甲酰胺 (DMF)、鄰苯二胺(OPD)和E2BSA結(jié)合物(美國Sigma公司);鏈霉親和素藻紅蛋白(Straptavidinphycoerythrin, SAPE,美國Invitrogen公司);BSA(德國Roche公司); CAPBSA和CLBSA為本實驗室合成。其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

2.2 實驗方法

2.2.1 懸浮芯片檢測微球的制備

參照試劑盒說明書,取3種熒光微球 (1.25×107 個/mL),磷酸鹽緩沖液 (PBS) 重懸后,加入到激活緩沖液中,并立即加入新鮮配制的偶聯(lián)試劑EDC和SulfoNHS(濃度均為50 g/L),室溫下攪拌20 min使其活化;活化后,分別加入3種獸藥的BSA結(jié)合物5 μg,并用PBS緩沖液(pH 7.4)定容至500 μL,室溫下中速旋渦振蕩混勻2 h,14000 g離心4 min,棄去上清液,封閉,清洗,加入儲備緩沖液, 4 ℃儲存。上機進行偶聯(lián)確證,以便用于下一步測試。

2.2.2 3種獸藥的懸浮芯片多元分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

實驗采用間接競爭法,在96孔反應(yīng)板的每個反應(yīng)孔中分別加入優(yōu)化后的3種靶標(biāo)物對應(yīng)的生物素化單抗5、1和16 ng,分別將CAP、CL和E2的標(biāo)準(zhǔn)品(以下涉及到3種獸藥均按此順序)按照5×、5×和3×梯度分別稀釋成7個梯度加入。將3種熒光微球等比例混合,每孔加入3種熒光微球各2000個,并用PBS補足至50 μL/孔,同時再各準(zhǔn)備一個不加標(biāo)準(zhǔn)品的陽性對照孔。37 ℃中速漩渦振蕩2 h,使熒光微球上的獸藥BSA結(jié)合物與溶液中相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品共同競爭生物素化的單抗,然后加入1∶100的SAPE 50 mL/孔,37 ℃中速振蕩反應(yīng)30 min。懸浮芯片讀取每孔100個熒光微球,獲得中位熒光強度值(MFI)。以各種靶標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸,以檢測得到的MFIs為Y軸,繪制3種獸藥小分子的懸浮芯片檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.3 3種獸藥的常規(guī)ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

采用間接競爭法[13~15],在酶標(biāo)板上包被小分子獸藥的BSA結(jié)合物,以方陣滴定法篩選和優(yōu)化3種獸藥常規(guī)ELISA的包被原量(分別是2、0.2和0.25 μg)和單抗工作濃度 (稀釋度分別為1∶80000、1∶20000和1∶80000),確定反應(yīng)條件后,選擇3種獸藥標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,繪制各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.4 兩種方法對3種獸藥殘留的特異性測試

準(zhǔn)備3組沙丁胺醇、萊克多巴胺、慶大霉素和紅霉素測試品,終濃度達(dá)到50、 1250和31250 ng/L,每個濃度平行做3個樣,同時準(zhǔn)備一個陽性對照樣,懸浮芯片讀數(shù)并與陽性對照樣比較。以交叉反應(yīng)率(CR%)測試常規(guī)ELISA檢測的特異性。

2.2.5 3種獸藥盲樣的檢測比較

準(zhǔn)備3個濃度的3種獸藥盲樣,交由測試者進行檢測,每個盲樣平行測試3次。根據(jù)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算盲樣的濃度,并與實際濃度進行比對。

3 結(jié)果與討論

3.1 懸浮芯片法對3種獸藥檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

按優(yōu)化的比例加入相應(yīng)的抗體和SAPE,使反應(yīng)充分進行,可省去真正的懸浮芯片反應(yīng)所需的抽濾步驟。因此,檢測更加簡單快速。在優(yōu)化條件下,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(見圖1和表1)。

由于每次檢測取100個熒光微球,每個熒光微球都有1個獨立的檢測值,也即每個樣品 (包括標(biāo)準(zhǔn)品)被重復(fù)測試了100次,樣本量有足夠的代表性。由于E2難溶于水,加入少量DMF可增加其溶解度,實驗發(fā)現(xiàn),抗體活性并未受影響。CAP、CL和E2懸浮芯片的檢測區(qū)間分別為50~6.25×105 ng/L, 56~7.81×105 ng/L和1×103~7.29×105 ng/L; 它們的檢出限分別為50、56和1000 ng/L,檢測范圍跨2~4個數(shù)量級。在這些范圍內(nèi),可對這3種獸藥同時進行快速的定量測定,全部檢測過程只需約2.5 h。檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的這些指標(biāo)和熒光微球上的抗原結(jié)合物的偶聯(lián)量、抗體的親和力、單抗的生物素化程度都有密切關(guān)系。

3.2 ELISA法對3種獸藥檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

按照棋盤滴定所獲得的最佳抗原結(jié)合物包被量和最適抗體稀釋度,對CAP、CL和E2殘留進行標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定和繪制,結(jié)果如圖2所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、檢出限和檢測區(qū)間等各參數(shù)見表1。比較懸浮芯片法和常規(guī)ELISA法可見:在 CAP的檢測中,常規(guī)ELISA法的檢測區(qū)間略比懸浮芯片法稍寬,但不存在絕對的優(yōu)勢;而在CL和E2的檢測中,懸浮芯片法的檢出限明顯低于常規(guī)ELISA法,檢測區(qū)間比ELISA法寬,這在實際檢測中占有較大優(yōu)勢。懸浮芯片法主要應(yīng)用于多元靶標(biāo)物的分析檢測,而常規(guī)ELISA每次只能檢測一個目標(biāo)物,在多元分析中處于劣勢。表1 懸浮芯片法和ELISA法檢測3種獸藥殘留的比較(略)

3.3 懸浮芯片法和常規(guī)ELISA法在檢測技術(shù)上的比較

懸浮芯片法使用的檢測原理同常規(guī)ELISA法一樣,同為間接競爭法,所用試劑略有不同。但在檢測的靈敏度和檢測區(qū)間上懸浮芯片法明顯優(yōu)于常規(guī)ELISA法。兩種方法存在性能差異的主要原因如下:

(1)懸浮芯片抗原以化學(xué)鍵進行偶聯(lián),而ELISA法利用一種物理性的非特異性吸附,其連接的牢固程度和穩(wěn)定性比懸浮芯片的抗原偶聯(lián)方式差很多。(2)懸浮芯片激光檢測器的分辨率明顯高于ELISA法采用的普通酶標(biāo)儀,檢測更加靈敏。(3)懸浮芯片技術(shù)使用主要試劑是生物素親和素,其親和力高達(dá)1015L/mol[16,17],比抗體親和力高10000倍以上。懸浮芯片技術(shù)信號放大更靈敏,更穩(wěn)定,受環(huán)境干擾較小。(4)懸浮芯片的抗原抗體反應(yīng)在液相中進行,有效地保證了試劑的活性;而且檢測微球的比表面積遠(yuǎn)大于酶標(biāo)板的底部,使反應(yīng)更加充分;而ELISA法反應(yīng)在固相中進行。(5)懸浮芯片的標(biāo)準(zhǔn)曲線是多元參數(shù)的Logistic回歸曲線,檢測范圍寬;而常規(guī)ELISA法多用直線方程,使用曲線方程在一定程度上可增加其檢測范圍。

3.4 兩種方法檢測的特異性測定

由表2可知,不同濃度下的沙丁胺醇萊克多巴胺的MFI和陰性對照組無顯著性差異,P>0.05;加入不同濃度慶大霉素和紅霉素對檢測無明顯干擾,P>0.05。因此,懸浮芯片檢測的特異性良好,與其它藥物無明顯交叉反應(yīng)。同時,用ELISA對表2中藥物的CR進行測定,CR均

3. 5 盲樣的測定

測試結(jié)果和實際濃度值的比對見表3。由表3可見,懸浮芯片檢測濃度值與實際濃度偏差為8.09%~17.03%,可認(rèn)為偏差相對較小。由于多種靶標(biāo)物盲樣的濃度低于ELISA的檢出限,并未能對其進行檢測。在其檢測區(qū)間內(nèi),ELISA與實際濃度偏差為9.19%~17.74%,偏差也相對較小。懸浮芯片法對盲樣測定的檢測區(qū)間較寬,與ELISA法相比,有較大的優(yōu)勢。

表3 3種獸藥殘留盲樣的檢測(略)

參考文獻(xiàn)

1 Pellegrino M A, D'Antona G, Bortolotto S, Boschi F, Pastoris O, Bottinelli R, Polla B, Reggiani C. Exp. Physiol., 2004, 89(1): 89~100

2 Jorge B, Clara C, Jos M, Manuel S, Celeste N, Carlos A, Fernando R, Maria I N D S. Food. Addit. Contam., 2005, 22(6): 563~566

3 Diskin C. Mayo. Clin. Proc., 2005, 80: 1389~1390

4 Kasten M J. Mayo. Clin. Proc., 1999, 74: 825~833

5 Jimmy L S, Paul D, Robyn S, Rachael L, Marylynn B. Science, 1999, 285: 1259~1261

6 MacDonald P C, Madden J D, Brenner PF, Wilson J D, Siiteri P K. J. Clin. Endocr. Metab., 1979, 49(6): 905~916

7 Ting X, Bao M W, Wei S, Qing X L, Xiao L, Shao J L. J. Environ. Sci. Health B., 2007, 42(2): 173~177

8 Scortichini G, Annunziataa L, Haouet M N, Benedetti F, Krustevaa I, Galarini R. Anal. Chim. Acta, 2005, 535(1): 43~48

9 Wang ShanXia (萬善霞), Xu XiuYuan (徐修遠(yuǎn)), Wang JianLi (王建立), Zhang ShuPing (張淑萍). Chinese Animal. Sci. Veterinary. Med.(動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)), 2004, 21(7): 23~25

10 Sameena S K, Meghan S S, Debra R, Anthony F S, Philip M. Clin. Cytometry. (Part B), 2004, 61(1): 35~39

11 Dunbar S A. Clin. Chim. Acta, 2006, 363: 71~82

12 Jun L, Gad G, Eric A M, Ezequiel A S, Justin L, David P, Alejandro S C, Benjamin L E, Raymond H M, Adolfo A F, James R D, Tyler J, Robert H, Todd R G. Nature, 2005, 435(9): 834~838

13 Xu Ting (許 艇), Qin ZhiXiang (秦治翔), Wang Wen (王 文), Li Ji (李 季). Chin. J. Appl. Environ. Biol.(應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報), 2004, 10(5): 569~572

14 Shi DeShi (石德時), Zhou Bin (周 斌), Tan YaLi (覃雅麗), Wang GuiZhi (王桂枝). Chin. J. Vet. Sci.(中國獸醫(yī)學(xué)報), 2002, 22(1): 77~79

15 Xu ChuanLai (胥傳來), Wang WuKang (王武康), He TieMing (賀鐵明). Clin. J. Public Health(中國公共衛(wèi)生), 2004, 20(11): 1285~1286

桂阳县| 静海县| 南平市| 永州市| 舞阳县| 金塔县| 定边县| 珠海市| 宁南县| 安顺市| 渝北区| 宜州市| 廉江市| 和平县| 钟祥市| 建始县| 邹平县| 栾川县| 五河县| 棋牌| 连江县| 泊头市| 喀什市| 裕民县| 武汉市| 阿拉善右旗| 通州区| 年辖:市辖区| 老河口市| 临泽县| 浮梁县| 德令哈市| 大冶市| 雷山县| 讷河市| 全州县| 平乡县| 柘城县| 河曲县| 河南省| 阳西县|