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1、迎春花,花色呈現(xiàn)黃色??梢杂媒瘘S、鵝黃、嫩黃、淡黃、鮮黃、黃澄澄、淺黃、明黃來形容。白居易形容迎春花是“金英翠萼帶春寒”,劉敞形容為“黃花翠蔓無人愿”,韓琦形容為“帶雪沖寒折嫩黃”。
2、迎春花(學名:Jasminum nudiflorum Lindl. ):別名迎春、黃素馨、金腰帶,落葉灌木叢生。株高30-500厘米。小枝細長直立或拱形下垂,呈紛披狀。3小葉復葉交互對生,葉卵形至矩圓形。花單生在去年生的枝條上,先于葉開放,有清香,花色呈現(xiàn)黃色,外染紅暈??梢杂媒瘘S、鵝黃、嫩黃、淡黃、鮮黃、黃澄澄、淺黃、明黃等詞來形容它。因其在百花之中開花最早,花后即迎來百花齊放的春天而得名。
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每一個人都有一雙羨慕、嫉妒眼,看著別人的優(yōu)點,心里會非常嫉妒,而這樣的你的自尊心會嚴重的受到破壞,但上天是公平的,每一個人多有自己的優(yōu)點、都十分優(yōu)秀看你是否去發(fā)現(xiàn)。有的人到了50歲去發(fā)現(xiàn),而有些人一輩子也沒發(fā)現(xiàn),而有些人10幾歲便發(fā)現(xiàn)了。
我們班就有一位才子。
她正是我們的中隊長——張琪。她不但成績優(yōu)異,古箏也過了9級,拉丁舞也跳得十分好。我們班有許多人都羨慕她。我也不例外。一次中隊活動,她用自己的“絕活”——古箏,征服了現(xiàn)場的所有人,也受到外校老師的好評。
回到家中,我便對媽媽說,我也想學習古箏,但學可以,必須答應媽媽3個要求,1、不能半途而廢,2、每天必須練,3、必須認真學習,聽了要求,我答應了,于是我去學了。
第一天去學,十分輕松,只見老師拿來一本厚厚的古箏書,書名是《新編古箏教程修訂本(一)》,我十分好奇的看了看書的內(nèi)容:古箏是中國最古老的彈拔樂器,早在公元前237年的戰(zhàn)國時期,古箏已流行于陜西,它是以音而命名的樂器,因彈奏起來“zhengzheng”作響,故稱之為古箏。
在我的不懈努力和老師的辛勤教導,我已經(jīng)學會了《漢宮秋月》、《平湖秋月》、《蘇武牧羊》、《竹排歌》……一日,老師給媽媽打電話想我去考四級,媽媽答應了并和我一起去報名。
為了能考過,老師讓我天天談那三首考級曲子,我板著手指頭算了算,考級是7月份,而現(xiàn)在才3月,還要談四個月。“長天??!大地??!天天談那三首曲子,我都要崩潰了!”
今年夏天熱得十分早,6月便有35攝氏度,我天天練琴,媽媽便在一旁為我打扇,一練就一個小時,媽媽一分鐘打兩次扇,一共要120次,為了考級考過,媽媽付出了多少汗水,不顧自己,而為我涼爽。
時間如流水般過去了,考級的日子一天天來臨,七月十四日,我去一下藝??技墸技墪r,我以熟練、優(yōu)美的音樂打動了評委,并順利考過。
關鍵詞:硝化桿菌(Nitrobacter);培養(yǎng)基;培養(yǎng)條件;優(yōu)化
中圖分類號:Q939.96 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2013)15-3628-04
氮素是水體污染源的主要成分之一,水體的脫氮技術已經(jīng)成為人們關注與研究的熱點[1]。與傳統(tǒng)的物理化學脫氮工藝相比,生物脫氮具有成本低、效率高、無二次污染等優(yōu)勢?,F(xiàn)今采用最多的生物脫氮工藝為硝化―反硝化工藝,其中的硝化工藝由硝化細菌(Nitrifying bacteria)完成[2]。硝化細菌分為自養(yǎng)型硝化細菌和異養(yǎng)型硝化細菌2類,異養(yǎng)型硝化細菌僅占很少一部分,自養(yǎng)型硝化細菌是生物脫氮過程中起硝化作用的主要菌群,其硝化速率直接影響污水處理系統(tǒng)的硝化效果和生物脫氮效率[3]。硝化過程通常由氨氧化細菌(Ammonia-oxidizing Bacteria,AOB)先將氨氮轉化為亞硝酸鹽,然后由亞硝酸氧化細菌(Nitrite-oxidizing Bacteria,NOB)將亞硝酸鹽轉化為硝酸鹽[4]。與自養(yǎng)型AOB一樣,自養(yǎng)型NOB具有生長速度慢、自然條件下數(shù)量低等特點,這一方面使NOB的研究較為困難,另一方面也制約了其工業(yè)化生產(chǎn)和應用。因此,研究加快NOB生長速度的培養(yǎng)方法顯得尤為重要[5,6]。本研究以一株亞硝酸氧化細菌y3-2[7]為出發(fā)菌株,對其培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化,并采用實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)(Real-time quantitative PCR detecting system, qPCR)計數(shù)的方法對其菌液濃度進行計數(shù),以期獲得能快速培養(yǎng)硝化桿菌y3-2的方法。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌種 試驗用菌種硝化桿菌y3-2由農(nóng)業(yè)微生物學國家重點實驗室發(fā)酵工程分室分離純化保藏,經(jīng)16 S rDNA鑒定為硝化桿菌屬(Nitrobacter)細菌。
1.1.2 優(yōu)化前培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 優(yōu)化前初始培養(yǎng)基:MgSO4?7H2O 0.12 g/L、NaH2PO4?2H2O 1.16 g/L、K2HPO4?3H2O 0.33 g/L、MnSO4?H2O 0.007 6 g/L、(NH4)6Mo7O24?4H2O 50 μg/L、無水NaCO3 0.5 g/L、NaNO2 1.0 g/L、pH 7.5,121 ℃、30 min滅菌。優(yōu)化前的培養(yǎng)條件為250 mL三角瓶加入50 mL培養(yǎng)基,200 r/min、30 ℃恒溫培養(yǎng)。
1.1.3 試劑 亞硝酸鹽和硝酸鹽定性檢測試劑[8]:Griess試劑、鹽酸溶液、氨基磺酸銨溶液、二苯胺―硫酸試劑,細菌基因組DNA提取試劑盒和Real Master Mix(SYBR Green)試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司,硝化桿菌qPCR標準樣品為農(nóng)業(yè)微生物學國家重點實驗室發(fā)酵工程分室自制。
1.2 方法
1.2.1 培養(yǎng)基的優(yōu)化
1)單因素試驗。設計單因素試驗分別考察培養(yǎng)基中CaCO3、Na2CO3和NaNO2濃度對試驗菌株生長的影響。①CaCO3濃度。Na2CO3濃度1.5 g/L,NaNO2濃度0.5 g/L,CaCO3濃度分別為0、0.5、1.0、2.0、5.0 g/L。②Na2CO3濃度。CaCO3濃度0.5 g/L,NaNO2濃度0.5 g/L,Na2CO3濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 g/L。③NaNO2濃度。CaCO3濃度0.5 g/L,Na2CO3濃度1.5 g/L,NaNO2濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 g/L。每個單因素試驗設置3個平行,每天定性檢測NO2-、NO3-含量,觀察NO3-生成情況,記錄NO2-完全硝化所需時間,并對細菌進行計數(shù)。
2)正交試驗。設置三因素三水平正交試驗考察CaCO3、Na2CO3和NaNO2濃度對細菌生長的影響,每個試驗設置2次重復。
1.2.2 培養(yǎng)條件的優(yōu)化 采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株,設置單因素試驗考察培養(yǎng)溫度、pH和轉速對菌株生長的影響。①溫度。將種齡為48 h的新鮮菌液以5%的接種量接種到裝有50 mL培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中(后面搖瓶試驗接種方法一致),分別在15、20、25、28、30、35 ℃下恒溫培養(yǎng),pH控制在7.0~7.5,轉速設為200 r/min,記錄NO2-完全硝化所需時間及菌落數(shù);選擇適宜的溫度范圍進行正交試驗。②pH。培養(yǎng)基pH控制為6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5,培養(yǎng)溫度為28 ℃,轉速設為200 r/min。記錄NO2-完全硝化所需時間及菌落數(shù)。③轉速。將活化后的菌種接種到三角瓶中,28 ℃恒溫培養(yǎng),pH 8.0,轉速分別為50、100、150、200、250 r/min,記錄NO2-完全硝化時間及最終菌落數(shù)。每個單因素試驗設置3組平行。
1.2.3 分析方法 亞硝酸鹽定性檢測使用Griess試劑法;硝酸鹽定性檢測使用二苯胺-硫酸試劑法[8];菌液濃度定量分析:首先提取收集菌液的基因組DNA,然后使用Real-time PCR定量計數(shù)方法進行計數(shù)[9],qPCR反應體系總體積為20 μL,含有Real Master Mix/20×SYBR solution 9 μL、FGPS872(5′-TTTTTTGAGATTTGCTAG-3′)1 μL(終濃度100 nmol/L)、FGPS1269(5′-CTAAAACTCAAAGGAATT
GA-3′)1 μL(終濃度100 nmol/L),DNA模板1 μL,超純水8 μL。Real-time PCR反應程序為:95 ℃預變性4 min;95 ℃變性20 s,50 ℃退火20 s,68 ℃延伸40 s,共循環(huán)40次;最后一步設置自動制作溶解曲線。通過計算機對樣品PCR結果和標準樣品PCR結果進行對比分析,計算出擴增基因片段的拷貝數(shù),從而推算出樣品中的菌體含量。
2 結果與分析
2.1 培養(yǎng)基的優(yōu)化結果
2.1.1 不同CaCO3濃度對y3-2生長及硝化作用的影響 近年來多項研究表明NOB具有附著生長的特點,有研究者通過此特點對NOB進行固定化,從而提高NOB的硝化效率[10],本研究以CaCO3為添加物,提供y3-2生長的附著位點,考察其對y3-2生長的促進作用,結果如圖1所示。由圖1可以看出,CaCO3對y3-2的生長具有明顯的促進作用,其濃度為0.5 g/L時促進作用最佳,菌液終濃度達8.0×108 CFU/mL,而未添加CaCO3的對照組菌液濃度不足1.0×108 CFU/mL。此外,CaCO3添加濃度為0.5 g/L時,硝化速度也明顯加快,NO2-完全硝化僅需5 d,而對照組需要9 d。
2.1.2 不同Na2CO3濃度對y3-2生長及硝化作用的影響 Na2CO3濃度對y3-2生長和硝化作用的影響結果如圖2所示。由圖2可知,Na2CO3濃度為1.0~3.0 g/L時NOB具有良好的生長勢,其中1.0 g/L試驗組細菌生長情況最好,菌液終濃度最高,且完全硝化NO2-僅需5 d;當Na2CO3濃度小于1.0 g/L時,y3-2生長速度很慢,原因是過低的碳源濃度使y3-2生長不充分,生物量較低。在氮源濃度一定的情況下,碳源濃度過高致使培養(yǎng)液中碳氮比(C/N)過高,會導致細菌對氮源的代謝利用發(fā)生異常,從而細菌繁殖緩慢,因此Na2CO3濃度高于3.0 g/L時菌液中終濃度較低,NO2-完全轉化所需時間也延長。
2.1.3 不同NaNO2濃度對y3-2生長的影響 NO2-是NOB生長與繁殖過程中唯一的氮源,它是控制NOB生長的重要因素,不同NO2-濃度對y3-2生長的影響結果如圖3所示。由圖3可知,NaNO2濃度為0.5~4.0 g/L時對NOB生長有明顯的促進作用,0.5 g/L時y3-2生長速率最快,NaNO2為4.0 g/L時菌液終濃度最大,約為2.0×109 CFU/mL;但隨著NaNO2濃度進一步升高,y3-2的生長被抑制,且完全硝化NO2-的時間也逐漸延長。這是因為NO2-濃度過低使細菌缺乏充分的底物來進行繁殖,而濃度過高時會對y3-2產(chǎn)生抑制,這種抑制可能是過高濃度的NO2-的毒害作用或是一種鹽脅迫。
2.1.4 正交試驗結果 正交試驗結果見表2。由極差分析可知,各因素中對菌液終濃度的影響由大到小依次為CaCO3濃度、Na2CO3濃度、NaNO2濃度。最佳試驗組合為A2B1C1,即培養(yǎng)基中含有CaCO3濃度0.5 g/L、Na2CO3濃度1.0 g/L、NaNO2濃度0.5 g/L。在此條件下進行4次重復試驗,得到的平均菌液終濃度為4.31×109 CFU/mL,高于所有正交試驗組合的結果。
2.2 培養(yǎng)條件優(yōu)化的結果
2.2.1 溫度對y3-2生長和硝化作用的影響 有文獻報道NOB在15~30 ℃具有較好的生長狀態(tài)和硝化活性[11]。y3-2在不同培養(yǎng)溫度下的生長及硝化NO2-的情況見圖4。從圖4可以看出,菌液終濃度隨培養(yǎng)溫度的升高呈先升高后降低的變化趨勢,28 ℃時y3-2的菌液終濃度最高,此時完全硝化0.5 g/L NaNO2所需時間為4 d。
2.2.2 pH對y3-2生長和硝化作用的影響 pH不同會導致菌株酶活力的變化,從而使菌體生長和代謝能力發(fā)生改變[12],傳統(tǒng)研究認為pH在6.5~8.0適宜NOB生長,在pH 8.0~8.5范圍內(nèi)NOB硝化效率最高[13]。pH對y3-2生長和硝化作用的影響見圖5。從圖5可以看出,pH為8.0時菌液濃度可達1.68×109 CFU/mL,明顯高于其他處理,說明y3-2的最適培養(yǎng)pH為8.0,此時完全硝化0.5 g/L NaNO2所需時間為4 d。
2.2.3 搖床轉速對y3-2生長和硝化作用的影響 NOB是好氧性細菌,溶氧量對其生長有著重要的影響,一般而言溶氧需控制在2 mg/L以上[14]。在一定溫度下溶氧是裝液比(培養(yǎng)基裝液量/三角瓶體積)和搖瓶轉速的函數(shù),如果裝液比固定則轉速將直接影響培養(yǎng)基中的溶氧量。y3-2在不同轉速下的生長情況見圖6,從圖6可以看出,菌液終濃度隨著轉速的加快先快速升高,當轉速達到200 r/min及以上時菌液終濃度隨轉速加快而升高的趨勢變得平緩,說明轉速達到200 r/min時溶液中的溶氧量已達到細菌最快生長所需的條件,再增大轉速也無益于提高細胞濃度,反而消耗過多的能源,增大培養(yǎng)成本。
3 小結與討論
本研究針對一株硝化桿菌y3-2進行了培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化,優(yōu)化后培養(yǎng)液中的菌液終濃度達到了4.31×109 CFU/mL,并且培養(yǎng)時間從初始的7 d縮短至4 d,減少了接近一半的培養(yǎng)周期,為亞硝酸氧化細菌的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了一定的基礎。優(yōu)化后的培養(yǎng)基中Na2CO3濃度為1.0 g/L、NaNO2濃度為0.5 g/L,優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為28 ℃恒溫培養(yǎng)、pH 8.0、搖床轉速200 r/min。另外,本試驗還探討了添加硝化細菌生長附著物CaCO3之后對細菌培養(yǎng)的影響,并確定CaCO3濃度為0.5 g/L時最有利于y3-2的生長。
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也許是剛到冬天不久,天氣似乎并不是那樣冷,只是偶爾寒風吹過面龐時,臉上有些輕微的刺痛;卻無意中發(fā)現(xiàn)一課課樹不久前依然風華正茂,而今已變成一個個孤單落寞的守望者,一片片象征幸運女神的三葉草不知不覺被壓得沉重而陰郁。也許冬天,是個生命滯留的季節(jié)吧!
早晨輕輕的推開門,忽然感覺眼前比往常亮了許多,才發(fā)現(xiàn)剛剛下了一夜的雪,潔白的地面把漆黑的星空反襯的格外明亮。“嗯,下雪了呢”心里默默的說道。時間似乎過的真很快,眼前還沉浮在讓我失落的夏日,如今已成為白雪皚皚的一片。而天空依然揮灑著早已成為定格的六邊形花瓣,一片,一片,落在我的頭上,衣服上,手上……迷茫的踐踏著厚實的積雪,仿佛感到讓我重新回到思緒起點輕柔,軟軟的,留下一個個深深的腳印。
這是我生命的第十四個冬季,我很慶幸我被生在冬季之前,這樣我每過一個冬季,我會感到我的生命又走過一載。一直吧冬天看作是自己生命的季節(jié),即使冬天,萬物靜然。我不明白那些燕子為什么一到冬季就急著往南方跑,不能像我們?nèi)艘粯樱煸诒狈缴顟T了,習慣了漫天飛舞的大雪,就不再向往溫暖的南方,而我喜歡這里,喜歡這里的冬天,因為我總認為:冬天有了大雪,那才叫做冬天。
這天下課后和同學們一起去玩了打雪仗,似乎很久沒有重溫過這樣的游戲了,在此之前,我一直淡忘著大雪飛揚的浪漫,一直淡忘著兒時天真無邪的笑聲,漸漸長大的我,總是被埋沒在青春的壓抑之中,于是,我需要這樣的大雪,來找回那個陌生而熟悉的我,親切那個我一直愛著的大雪。
還是一樣的《皂羅袍》,一樣的《游園驚夢》,一樣的《拾畫叫畫》,一樣的身段和眼神,但版本眾多,各有千秋,讓人詫異,為何只有昆曲、只有《牡丹亭》,會有如此多元的演出樣態(tài)和營銷方式?會以“XX版”為標簽為賣點?
白先勇先生應該是此番《牡丹亭》熱的始作俑者。不知他是否預料到如今《牡丹亭》的“姹紫嫣紅開遍”,又是否滿意如今的現(xiàn)狀。為制作青春版《牡丹亭》,他一直四處托缽化緣,甚至自掏腰包。一般來說,一次全本演出的費用是二十至五十萬人民幣,在青春版《牡丹亭》過去的百余場巡演中,只有2004年8月參加北京國際音樂節(jié)的演出費是由政府出資的,但同年9月在杭州參加的第八屆中國藝術節(jié)演出,其性質(zhì)雖為商業(yè)演出,但由于高校演出票價低廉,故票款收入基本是杯水車薪,資金支持大部分只能依靠澳門何洪毅家族基金,作為此項基金的顧問,白先勇先生為青春版《牡丹亭》爭取到了三年的資助。為了青春版《牡丹亭》能夠走進大學校園,能夠完成白先勇先生在大學生心目中埋下昆曲種子的心愿,私人基金會背后的支持也是功不可沒。自2009年起,白先勇又爭取到一家飲料公司的五百萬人民幣,啟動了“北京大學白先勇昆曲傳承計劃”,共為期五年。
上海昆劇團的《牡丹亭》則顯示了國家院團的優(yōu)勢。2008年歲末,命名為“主題演出”的《臨川四夢》集體亮相,其中,菁粹版《牡丹亭》作為建團三十周年的重頭戲,以“五代同堂傳承昆曲名劇,四方精英賀演上昆經(jīng)典”為票房號召力,一展上昆演藝實力之外,還特邀了“巾生魁首”汪世瑜和北昆優(yōu)秀演員魏春榮加盟。今年在蘭心大戲院的演出雖然演員陣容略有不同,但導演思維、劇本結構、舞臺美術上與“菁粹版”幾乎相差不大,同時蔡正仁、梁谷音、張洵澎的壓陣也頗有票房號召力
自昆曲列合國首批人類非物質(zhì)遺產(chǎn)之后,國家為搶救、保護和扶植這一古老劇種特設了經(jīng)費,文化部、財政部更給予了挖掘整理劇目和普及性演出專項補貼。菁粹版《牡丹亭》在有“外援”陣容時的票價為六十至三百八十元,而完全由上昆演員擔綱時票價則為三十至兩百八十元,充分體現(xiàn)出“低門檻”票價就能看到高質(zhì)量演出的國家院團所應有的姿態(tài)。
三山會館的《夢幻?牡丹亭》和朱家角課植園內(nèi)的《夢回?牡丹亭》均在上海世博會期間演出,兩個造“夢”的《牡丹亭》都是由演出環(huán)境應運而生。
三山會館的“夢幻”緣起丁盛和蘇晨兩位年輕的制作人,他們啟用了尚沒有走出校門的昆五班學生,由此,目前上海年齡最小的一批昆曲傳承人開始了粉墨登場的演出實踐。會館內(nèi)的《牡丹亭》設置了“昆宴”,陳列了贊助人提供的紅木家具和瓷器,并申請到了二十萬元的上海文化發(fā)展基金。盡管如此,就場地租金和演出成本而言,會館版的資金回收才剛剛起步。