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【摘要】目的采用高效液相色譜法測(cè)定中藥烏梅中檸檬酸的含量。方法選用HypersilODS柱（4.6mm×200mm，5μm），流動(dòng)相為0.025mol/LNa2HPO4溶液（pH=2.5），流速為0.7ml/min，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，外標(biāo)法定量。結(jié)果檸檬酸線性范圍為3.0～9.0μg，r=0.9998，平均回收率為99.86%（RSD=2.0）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠，可用于烏梅的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；烏梅；檸檬酸

DeterminationofcitricacidcontentinfructusmumebyHPLC

【Abstract】ObjectiveTodeterminethecontentofcitricacidcontentinFructusMumebyHPLC.MethodsAHypersilODScolumn(4.6mm×200mm，5μm)wasusedasstationaryphaseand0.025mol/LNa2HPO4(pH=2.5)wasusedasmobilphasewith214nmfordetectionwavelength.Theflowratewas0.7ml/minandthecolumntemperaturewas25℃.Thequantitativeanalysisusedexternalstandardmethod.ResultsThelinearrangeofcitricacidwas3.0～9.0μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.86%(RSD=2.0).ConclusionThemethodissimple，accurate，stableandreproducible，andcanbeappliedtoqualitycontrolofFructusMume.

【Keywords】HPLC;fructusmume;citricacid

烏梅（FructusMume）為薔薇科植物梅Prunusmume（Sieb.）Sibe.EtZucc.的干燥近成熟果實(shí)，酸、澀，平，歸肝、脾、肺、大腸經(jīng)，具有斂肺，澀腸，生津，安蛔之功效［1］。用于肺虛久咳，久痢滑腸，虛熱消渴，蛔厥嘔吐腹痛，膽道蛔蟲等癥。果實(shí)含有機(jī)酸（如檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸等），萜類，甾醇，氨基酸，糖類，揮發(fā)性成分，黃酮類，生物堿，微量元素（Fe、Mg、Cu等）［2］。《中國(guó)藥典》2005年版采用電位滴定法測(cè)定烏梅中總有機(jī)酸的含量，本文采用HPLC法測(cè)定烏梅中檸檬酸的含量，為中藥烏梅及含烏梅的中藥制劑的含量測(cè)定提供依據(jù)。

1儀器與試劑

1.1儀器Waters高效液相色譜儀：Waters515泵、Waters2487雙波長(zhǎng)檢測(cè)器，Empower2色譜工作站，DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，BS224S型萬(wàn)分之一電子天平，回流裝置等。

1.2藥品與試劑檸檬酸（AR，含一分子結(jié)晶水）；烏梅：產(chǎn)地峨眉，經(jīng)本院中藥鑒定教研室宋良科副教授鑒定，符合中國(guó)藥典要求；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為HypersilODS柱（200mm×4.6mm，5μm）；柱溫為25℃；流動(dòng)相為0.025mol/LNa2HPO4溶液（pH=2.5）；流速0.7ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)214nm；進(jìn)樣量20μl。

2.2溶液的配制

2.2.1檸檬酸對(duì)照品溶液的配制精密稱取檸檬酸（AR）適量，加水溶解，制成0.5mg/ml的檸檬酸對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備分別取烏梅粗粉約4g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加水100ml，稱定重量，加熱回流4h，放冷，補(bǔ)足重量，濾過(guò)，收集續(xù)濾液。精密量取續(xù)濾液1ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線分別精密量取0.5mg/ml檸檬酸對(duì)照品溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml于10ml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得7個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣各20μl，測(cè)定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，檸檬酸在3～9μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：Y=4376.107+1824436X，r=0.9998。

2.4精密度試驗(yàn)精密量取0.5mg/ml檸檬酸對(duì)照品溶液6.0ml，加水定容至10ml，連續(xù)進(jìn)樣5次（進(jìn)樣量20μl），結(jié)果見表1、圖1，其峰面積的RSD=0.1%（n=5）。表1精密度試驗(yàn)結(jié)果圖1檸檬酸對(duì)照品HPLC圖（略）

2.5供試品溶液的測(cè)定取烏梅藥材約4g，精密稱定，按2.2.2法制備，分別測(cè)定其檸檬酸含量。結(jié)果見表2、圖2，RSD=1.36%（n=6）。表2烏梅中檸檬酸含量測(cè)定結(jié)果圖2烏梅HPLC圖（略）

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取按2.2.2制備的供試品溶液20μl，每隔2h進(jìn)樣2次，測(cè)定其峰面積，取其平均值，結(jié)果樣品峰面積在10h內(nèi)穩(wěn)定；RSD%=0.25%（n=6）。

2.7回收率試驗(yàn)取已知含量的烏梅藥材各2g，精密稱定，精密加入50.06mg/ml檸檬酸溶液10.0ml、10.0ml、7.5ml、7.5ml、5.0ml、5.0ml；按供試品溶液測(cè)定項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果見表3。檸檬酸平均回收率為99.86%，RSD=2.0（n=6）。表3烏梅中檸檬酸含量測(cè)定結(jié)果

3討論

3.1《中國(guó)藥典》2005年版采用電位滴定法測(cè)定烏梅中總有機(jī)酸的含量據(jù)報(bào)道，有人曾在烏梅中分離出近10種有機(jī)酸：蘋果酸、檸檬酸、草酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、焦精谷氨酸、甲酸、乙酸、丙酸。其中最主要的是蘋果酸和檸檬酸，且隨果實(shí)的不斷成熟，二者含量會(huì)有所變化，早期的蘋果酸含量大于檸檬酸，后期則是檸檬酸含量大于蘋果酸。此外，烏梅藥材中還含有綠原酸、延胡索酸、酒石酸等有機(jī)酸［3］。因此，測(cè)定烏梅中檸檬酸的含量比測(cè)定總有機(jī)酸的含量對(duì)烏梅質(zhì)量更具可控性。

3.2實(shí)驗(yàn)所用檸檬酸為分析純，含有一分子結(jié)晶水一水檸檬酸容易失去結(jié)晶水，為確保所柄制的對(duì)照品溶液的濃度準(zhǔn)確，采用了0.1mol/L氫氧化鈉滴定液滴定檸檬酸的含量，再進(jìn)行準(zhǔn)確配制檸檬酸對(duì)照品溶液。

3.3最大吸收波長(zhǎng)檸檬酸的最大吸收波長(zhǎng)為190nm，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證在214nm處吸收較好，峰形穩(wěn)定，而在其他波長(zhǎng)處測(cè)定時(shí)效果較差。

3.4檸檬酸為含有羧基和鄰二酚羥基的極性有機(jī)酸本實(shí)驗(yàn)選用0.025mol/L的Na2HPO4溶液為流動(dòng)相，將其pH調(diào)為2.5后，檸檬酸在酸性環(huán)境下能較好的游離出來(lái)，與其他物質(zhì)能很好地分離，出峰效果好。

【參考文獻(xiàn)】

1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.2005年版一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，124.

2劉友平，陳鴻平，萬(wàn)德光，等.烏梅的研究進(jìn)展.中藥材，2004，27（6）：459-461.

3耿家玲，孟芹，付敏.烏梅的化學(xué)成分研究進(jìn)展.云南中醫(yī)中藥雜志，2005，26（6）：43-44.