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1生物刺激修復(fù)法

1．1營養(yǎng)物質(zhì)添加營養(yǎng)物質(zhì)是生物刺激修復(fù)的一種常用手段。營養(yǎng)物質(zhì)是維持微生物活性的基礎(chǔ)，而環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)卻是有限的。潤滑油進入環(huán)境后，顯著增加了環(huán)境中碳的含量，氮、磷就成了制約微生物活性的主要因素。Lee等將土壤原碳氮磷比例1160∶4∶1調(diào)節(jié)為適宜的500∶10∶1，105d后分別測定調(diào)節(jié)后的土壤和未調(diào)節(jié)的土壤中潤滑油降解率，結(jié)果顯示前者降解率42%～51%，后者降解率僅為18%。表明營養(yǎng)物質(zhì)的添加，增強了微生物的活性，提高了潤滑油的生物去除率。因此在修復(fù)過程中，應(yīng)按一定的比例適時適量的添加營養(yǎng)物質(zhì)。

1．2溫度和pH溫度能影響蛋白質(zhì)和核酸等微生物細胞組成物質(zhì)的性質(zhì)，以及通過影響酶活性進而影響細胞內(nèi)生物化學(xué)反應(yīng)速率。過高或過低的溫度，都不利于微生物的生長繁殖及對底物的降解速率。通常情況下，30～40℃時微生物對石油烴的降解速率最高。pH可通過影響微生物中酶的活性，細胞膜的滲透性，代謝過程等影響微生物的生命活動。潤滑油中不同微生物適宜生長的pH值范圍不同，其大多數(shù)微生物適宜在中性或偏堿性的環(huán)境中繁殖。張楠研究了假單胞菌屬(Pseudomonas)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)、博德特氏菌屬(Bordetel-la)各自降解潤滑油適宜的pH和溫度，結(jié)果顯示，pH值分別為7．8，7．0，6．0;溫度分別為32～35℃、30～35℃、30～34℃。可見環(huán)境中存在著不同的可降解潤滑油的微生物，且pH值和溫度的變化對不同微生物的降解效率會產(chǎn)生影響。郭曉燕等做了進一步研究，利用正交實驗分析了一株黃桿菌屬在降解潤滑油中，溫度、碳源、氮源、pH值4種因素對潤滑油降解率的影響大小，結(jié)果依次為，溫度＞葡萄糖濃度＞硫酸銨濃度＞pH值，表明了溫度在微生物降解潤滑油過程中的重要性。為了提高潤滑油生物去除率，需要營造適宜的溫度和pH環(huán)境，而最適溫度、pH與選擇的降解菌種類以及具體的降解條件密切相關(guān)。

1．3溶解氧和水分大多數(shù)能降解潤滑油的微生物是好氧的，對氧的利用是制約微生物降解潤滑油的影響因素之一。水分則是微生物細胞的主要組分，微生物的生長代謝離不開水分的參與;但過高或過低的水分含量都不利于生物反應(yīng)的順利進行，環(huán)境中應(yīng)保持適宜的水分含量。如潤滑油進入土壤后會嚴重影響其通透性，需改善土壤環(huán)境，以增加土壤中溶氧量及水分含量，從而促進潤滑油的生物降解。

1．4表面活性劑表面活性劑能通過降低油水界面張力，改善油/水與微生物細胞界面的接觸行為，以及增加石油烴在水中的溶解度，加快微生物細胞對油類底物的利用速度。王九研究了陰離子型(十六烷基三甲基溴化銨)、非離子型(Tween-80)和陽離子型(十二烷基苯磺酸鈉)3類表面活性劑對潤滑油生物降解的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陰離子和非離子型能促進液壓油的生物降解，其生物降解度分別達72%和77%;陽離子型可能由于本身具有的殺(抑)菌功能，反而抑制了液壓油的生物降解，其生物降解度僅為3%。他還指出，陰離子和非離子型在水中的含量處于臨界膠束濃度狀態(tài)以下時，隨著其含量增加，液壓油的生物降解度也不斷增大，但其含量超過臨界膠束濃度后對促進潤滑油生物降解的能力降低。這說明表面活性劑的加入量不是越多越好，需根據(jù)實際情況適量添加。已有文獻報道證實生物表面活性劑能促進潤滑油生物降解。Lai等則對比了生物表面活性劑(鼠李糖脂、枯草菌脂肽)和化學(xué)表面活性劑(Tween-80、TritonX-100)對促進土壤中石油烴降解的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)生物類表面活性劑對石油烴的去除效果明顯好于化學(xué)類表面活性劑。生物表面活性劑具有化學(xué)合成表面活性劑的某些功能，且自身可被生物降解、環(huán)境毒性小、無二次污染，使其在今后的潤滑油污染生物修復(fù)中具有極大的應(yīng)用潛力。生物刺激修復(fù)具有操作簡單、費用低、環(huán)境影響小等特點，但在實際應(yīng)用中還應(yīng)綜合考慮多種環(huán)境因素的協(xié)同效應(yīng)，以期達到更好的修復(fù)效果。Ay-otamun等在對石油烴污染土壤進行生物刺激修復(fù)時，綜合考慮了幾種環(huán)境因素的作用，在每公頃施肥4．7～12．5t，維持pH在5．0～6．0、含水率4%～19%，每周耕作2～5次的條件下，修復(fù)36d使土壤中石油烴去除率達到了50%～95%。潤滑油大多組分生物降解能力差，單純依靠改善外界環(huán)境，增強土著微生物活力，難以將其完全降解。因此，還需要采用更為有效的生物強化修復(fù)法。

2生物強化修復(fù)法生物強化修復(fù)是利用

生物技術(shù)、工程學(xué)、環(huán)境學(xué)、生態(tài)學(xué)等手段來獲得高效降解菌種(群)，提高底物和微生物接觸機會以促進污染物高效降解，其關(guān)鍵在于獲得能高效降解潤滑油的菌種(群)。

2．1潤滑油高效降解菌種的分離當前通常采用增加環(huán)境選擇壓力的方法，從土著微生物中篩選潤滑油降解菌并研究其降解特性，再馴化成適應(yīng)性強、降解效能高的菌種，或者組建高效降解菌群重新投入環(huán)境中。近年來，已發(fā)現(xiàn)能降解礦物油中某些烴類的微生物共約100余屬200多種，分屬于細菌、放線菌、酵母菌等，其中研究較多的是細菌，約占40個屬。污染的土壤和水體環(huán)境中通常存在大量可以降解潤滑油的微生物，可作為菌種分離來源，

2．2高效降解菌種(群)強化修復(fù)的應(yīng)用Chanthamalee等將篩選出的戈登氏菌用于修復(fù)船用潤滑油造成的海水污染，經(jīng)過5d的修復(fù)，測得含潤滑油量為100～1000mg/L的海水生物降解率達到42%～56%，而僅含有土著細菌的潤滑油降解率僅為10%。但單一菌株能降解潤滑油中的組分有限，而構(gòu)建高效降解菌群利用其協(xié)同效應(yīng)，可以降解潤滑油中多種組分，是提高礦物潤滑油生物降解性的重要手段。張楠等從石油污染土壤中分離出4株降解菌，探討了4株菌的相互抑制作用和協(xié)同效應(yīng);結(jié)果表明，4株菌無抑制作用且有顯著的協(xié)同效應(yīng)，組成的同生菌群比單一菌株降解HVI500礦物基礎(chǔ)油的能力更強。Lee等也曾向潤滑油污染土壤中投加馬紅球菌(Rhodcoccus)、假單胞菌(Pseudomonas)和鞘氨醇單胞菌(Sphin-gomonas)的混合菌群，180d后，測得土壤中石油烴去除率達到54%。但高效菌群組合的機制還需進一步探索研究，以便在不同的污染環(huán)境下，快速的組建高效降解菌群，及時有效的提高潤滑油生物去除率。由于環(huán)境因素對微生物代謝繁殖影響較大且難以控制，可能導(dǎo)致投加的高效降解菌種(群)數(shù)量和活性迅速降低，無法達到預(yù)期修復(fù)效果。因此生物強化修復(fù)還可與生物刺激修復(fù)結(jié)合使用，盡力構(gòu)建微生物適宜的生長降解環(huán)境，保證微生物旺盛的新陳代謝，提高生物強化修復(fù)效果。當前，向潤滑油污染區(qū)域投加高效降解菌種(群)后，對菌株(群)進行強化修復(fù)的中間過程還尚不清楚;但在石油烴污染土壤生物修復(fù)中，已有研究報道利用T-RFLP、PCR-DGGE等微生物分子生態(tài)學(xué)技術(shù)，分析研究降解菌株(群)發(fā)揮作用的過程、土壤微生物群落的結(jié)構(gòu)以及降解菌株(群)與土著微生物的相互作用，為生物強化修復(fù)中高效降解菌的篩選、修復(fù)過程的優(yōu)化以及修復(fù)效果的評估提供了重要依據(jù)。今后，在潤滑油污染生物修復(fù)中也可引入微生物分子生態(tài)學(xué)技術(shù)，以便深入了解整個修復(fù)過程。

3結(jié)束語

生物修復(fù)法因費用低、效果好、無二次污染等優(yōu)點，已成為一種治理潤滑油環(huán)境污染的有效手段。今后，還有以下工作值得進一步深入研究:①生物強化修復(fù)將是治理潤滑油污染的發(fā)展方向，而獲得高效降解菌種仍是研究的重點;除環(huán)境選擇壓力篩選外，通過基因工程、誘變育種等生物技術(shù)也是獲得潤滑油高效降解菌種的另一途徑;②應(yīng)加強利用微分子生態(tài)學(xué)技術(shù)深入了解潤滑油污染生物強化修復(fù)的過程，以便優(yōu)化生物強化修復(fù)體系和開發(fā)出更高效的生物強化修復(fù)技術(shù);③通過向礦物基潤滑油中加入特定功能的添加劑，誘導(dǎo)其中微生物的生長繁殖，以及促進烴類組分在水相中的溶解度來增大其被微生物利用的機會，從而提高礦物基潤滑油自身的可生物降解性，可作為減少潤滑油環(huán)境污染的一個探索方向。

作者：伍濤姜巖王春張曉華單位：重慶工商大學(xué)