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【摘要】目的了解不同人群輸血傳播病毒(TTV)的感染狀況。方法采用套式PCR法檢測血清標本中TTVDNA，并對其中1株TTV的部分基因序列進行了測定。結(jié)果不同人群TTVDNA陽性率分別為：正常體檢人群10.3%，獻血員43.7%，吸毒者15.6%，血液透析病人54.4%，妓女65.0%，慢性丙型肝炎病人25.0%，非甲～庚型肝炎0/11。結(jié)論TTV在各類人群中均有較高的感染率。

Detectionoftransfusiontransmittedvirus(TTV)indifferentpopulationsofChina

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprevalenceoftransfusiontransmittedvirus(TTV)indifferentpopulationsofChina.MethodsTTVDNAwasdetectedinseracollectedfromdifferentpopulationsbynestedPCR.PartialgeneofaTTVisolatewasdirectlysequenced.ResultsTheprevalencesofTTVinvariouspopulationswereasfollows:10.3%(31/301)ingeneralpopulationwhenreceivingphysicalcheckup;43.7%(14/32)inblooddonors;15.6%(5/32)inintravenousdrugaddicts;54.4%(6/11)inhemodialysispatients;65%(13/32)inprostitutes;25%(4/16)inpatientswithchronichepatitisC.Noneofthe11patientswithnonA-GhepatitiswasdetectedTTVDNA.ConclusionHighprevalenceofTTVinfectionwasfoundindifferentpopulationsofChina.

【Keywords】Transfusiontransmittedvirus(TTV)Polymerase;chainreaction(PCR)NonA-Ehepatitisvirus

椐國內(nèi)外報道，在急性散發(fā)性病毒性肝炎中約10%～20%為非甲～戊型肝炎，其中能檢測到庚型肝炎病毒(HGV)者僅占2%～20%［1，2］，且HGV的致病性尚有爭議，提示存在新型肝炎病毒的可能性。1997年底，日本學者［3］應(yīng)用代表性差異分析法(RepresentativeDifferentiationAnalysis.RDA)從1名輸血后非甲～戊型肝炎病人中分離到1種新病毒，稱為輸血傳播病毒(TTV)。據(jù)報道［4］，該病毒感染與血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)異常有關(guān)，且在各型肝炎病人中均有較高的感染率。為了解我國人群TTV感染狀況，我們應(yīng)用套式聚合酶鏈反應(yīng)法(nPCR)，對不同地區(qū)不同人群進行了TTVDNA檢測，并對其中1株TTVDNA部分基因序列進行了測定?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

對象與方法

一、研究對象：獻血員、血液透析患者、吸毒者、妓女的血清標本采自深圳、安徽、云南、青島；常規(guī)體檢人群、慢性丙型肝炎病人以及非甲～庚型肝炎患者血清標本采自北京。所有血清標本均直接送到北京醫(yī)科大學微生物學系，置－20℃下保存?zhèn)錂z。

二、檢測方法：酶聯(lián)免疫法(EIA)檢測甲～庚型肝炎病毒的血清學指標；套式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-nPCR)檢測HGVRNA。TTVDNA檢測參照日本報道的TTV序列引物，采用套式PCR法(nPCR)，外引物為P1：5′-gcagcagcatatggatatgt-3′，P2：5′-tgactgtgctaaagcctcta-3′；內(nèi)引物為P3：5′-catacacatgaatgccaggc-3′，P4：5′-gtacttcttgctggt

gaaat-3′。TTVDNA提取采用SDS-蛋白酶K裂解法。第一輪和第二輪的PCR循環(huán)參數(shù)為94℃，30秒；55℃，30秒；72℃，50秒，終末延伸5分鐘，兩輪均為30個循環(huán)。擴增產(chǎn)物經(jīng)溴化乙錠染色，2%瓊脂糖凝膠電泳，然后在紫外燈下觀察鑒定。每次PCR均設(shè)陰性、陽性和空白對照。

三、PCR產(chǎn)物序列測定：擴增產(chǎn)物經(jīng)0.7%低熔點瓊脂糖凝膠電泳分離，切下目的DNA條帶，用原平公司純化試劑盒進行回收純化，采用雙脫氧鏈末端終止法直接測序，測序試劑盒購自Promega公司，測序儀為Bio-Rad公司產(chǎn)品。

結(jié)果

一、不同人群TTVDNA的檢出情況：由表1可見，TTVDNA陽性率以妓女最高，以下依次為血液透析病人、獻血員、慢性丙型肝炎病人、靜脈吸毒者和常規(guī)體檢人群，11名非甲～庚型肝炎病人中未檢出TTVDNA。

TTV與乙型(HBV)、丙型(HCV)、戊型(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)合并感染情況見表2。TTV與HCV合并感染最為常見，其次是與HBV，與HEV和HGV合并感染較為少見。此外，還可見與HBV和HCV、與HCV和HGV，以及與HCV、HEV和HGV重疊感染者。單獨TTVDNA感染僅占37.8%。

表1不同人群TTVDNA檢出情況

檢測人群檢測人數(shù)TTVDNA陽性例數(shù)(%)

常規(guī)體檢人群30131(10.3)

獻血員3214(43.8)

靜脈吸毒者325(15.6)

血液透析病人116(54.5)

妓女2013(65.0)

慢性丙型肝炎病人164(25.0)

非甲～庚型肝炎病人110(0.0)

表2TTV與HBV、HCV、HEV和HGV合并感染情況

合并感染組別例數(shù)構(gòu)成比(%)

TTV＋HBV＋511.1

TTV＋HCV＋1533.3

TTV＋HEV＋12.2

TTV＋HGV＋12.2

TTV＋HBV＋HCV＋36.7

TTV＋HCV＋HGV＋12.2

TTV＋HCV＋HEV＋HGV＋24.5

單獨TTV＋1737.8

合計45100.0

二、1株TTV部分基因序列測定：為確定nPCR檢測TTVDNA結(jié)果的可靠性，我們對1株TTVDNA陽性的nPCR產(chǎn)物直接進行了序列測定，并與日本報道的TTVDNA序列(AB008394)進行了比較(圖1)，其同源性為98.7%。

Atttacagacccacaactactagtacacacagaccccacaaaag

B-------------------------------------------

Agctttgttccttactctttaaactttggaaatggtaaaatgcc

B-----------------------------------------g-

Aaggaggtagtagtaatgtgcctattagaatgagagctaaatgg

B---------c---------------------------------

Atatccaacattatttcaccagcaagaagt

B-----------------------------

1從我國分離的1株TTVDNA的部分核苷酸序列(B)與日本株(A：B008394)比較

討論

1997年底日本學者［3］報道，從輸血后非甲～庚型肝炎病人中分離到一種DNA病毒，稱為TTV，該病毒在暴發(fā)性肝炎和原因不明的慢性肝病中有相當高的流行，并認為與血清ALT異常有關(guān)［4］，為探討非甲～庚型肝炎病毒提供了新的線索。對我國不同人群TTV感染狀況檢測結(jié)果表明，在正常體檢人群中TTVDNA陽性率為10.3%，與日本(12%)［4］和英國(10%)［5］的報告接近。在正常人群中存在如此高的攜帶率，其意義有待探討。慢性丙型肝炎的TTVDNA陽性率為25%(4/16)，與英國報告一致。本研究表明，TTV可與其他型肝炎病毒合并感染，也可單獨感染，但絕大多數(shù)TTVDNA陽性者的血清ALT正常。有學者報告，大多數(shù)TTV陽性病例肝臟無明顯生化或組織學改變，從而認為TTV可能與HGV相似，是一種與疾病無關(guān)的人類病毒［5］。

本次檢測的丙型肝炎病人均有獻血史，TTVDNA檢出率為25%，妓女中均無獻血史，但TTVDNA檢出率高達65%，提示TTV經(jīng)血傳播外，還可能存在性接觸傳播。非甲～庚型肝炎病人中未檢測到TTVDNA，可能與樣本量小有關(guān)。

雖然所測定的TTVDNA部分基因序列的片段較短，與日本株的同源性為98.7%，表明該區(qū)段比較保守；本研究設(shè)計的引物適用于TTVDNA的檢測。

對TTV的研究尚處于起步階段，關(guān)于該病毒的分子生物學、流行病學及其致病性等有待進一步研究。

參考文獻

1LinnenJ,JrWagesJ,Zhang-KeckZY,etal.MolecularcloninganddiseaseassociationofhepatitisGvirus:atransfusion-transmissibleagent.Science,1996,271∶505-509.

2LearyTP,MuerhoffSA,SimonsJN,etal.SequenceandgenomicorganizationofGBV-C:anovelmemberoftheflaviviradaeassiciatedwithhumannonA-Ehepatitis.JMedVirol,1996,48∶60-67.

3NishizawaT,OkamotoH,KonishiK,etal.AnovelDNAvirus(TTV)associatedwithelevatedtransaminaselevelsinposttransfusionhepatitisofunknownetiology.BiochemBiophyCom,1997,241∶92-97.

4OkamotoH,NishizawaT,KatoN,etal.MolecularcloningandcharacterizationofanovelDNAvirus(TTV)associatedwithposttransfusionhepatitisofunknwonetiology.HepatolRes,1998,10∶1-16.

5NaoumovNV,PetrovaEP,ThomasMG,etal.PresenceofanewlydescribedhumanDNAvirus(TTV)inpatientswithliverdisease.Lancet,1998,352∶195-197.