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摘要：目的研究全蝎中無機陽離子對全蝎抗凝活性的影響。方法以凝血酶時間為指標(biāo)，分別在全蝎提取液中加入相應(yīng)不同濃度的無機陽離子，考察其對全蝎抗凝活性的影響。結(jié)果加入無機陽離子后，明顯縮短了全蝎的凝血酶時間（P＜0．01）。結(jié)論銨離子等無機陽離子對全蝎提取液抗凝活性有明顯的影響。

關(guān)鍵詞：全蝎；抗凝活性；凝血酶時間；無機陽離子

〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofinorganicionsinscorpinonanticoagulatingactionofscorpin．MethodsTakingthethrombintimeasthetargets，theinorganicionswithdifferentconcentrationwererespectivelymixedinthescorpinextractionandtheireffectsonanticoagulatingactionofscorpinweremeasured．ResultThethrombintimewasdistinctlyshortened（P＜0．01）aftertheionsjoiningintotheextraction．ConclusionTheionsareveryeffectivetotheanticoagulatingactionofthescorpinextraction．

〔Keywords〕scorpin;anticoagulatingactive;thrombintime;inorganicions

全蝎作為傳統(tǒng)的中藥材，具有熄風(fēng)止痙、解毒散結(jié)、通絡(luò)止痛等功效。全蝎除了含蝎毒素、三甲胺、?；撬帷⑻鸩藟A、膽甾醇、卵磷脂、甘油酯、棕櫚酸、硬脂酸、銨鹽17種氨基酸等，還含有Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb等元素［1，2］1415。實驗證明全蝎提取液具有明顯的抗凝、抗血栓及促纖溶作用［3，10］。為進一步研究全蝎抗凝活性的影響因素，本文探索了8種無機陽離子（NH4＋、Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋、Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋、Pb2＋）對全蝎抗凝活性的影響，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1實驗材料

1．1儀器

Start－4半自動四通道血凝儀（法國s11AGO公司）；4300－Pro紫外分光光度計（瑞士安瑪西亞公司）；HR2838型勻漿機（菲利普公司）；移液槍。

1．2試藥

全蝎（購自老百姓大藥房），凝血酶（上海太陽生物技術(shù)有限公司），血漿（自制），生理鹽水；NH4Cl，NaCl，CuCl2，CaCl2，MgCl2，F(xiàn)eCl2，MnCl2，PbCl2，ZnCl2，無水乙醇，均為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1供試品溶液的制備［3，10］

篩去塵渣，稱取全蝎50g，用8倍量的蒸餾水浸泡過夜，用勻漿機以10000r／min勻漿，然后煎煮3次（均為8倍量蒸餾水），每次30min，過濾，合并濾液，水浴濃縮至含生藥1g／mL，3000r／min離心20min，分別加無水乙醇至60％的濃度，4℃放置過夜，3000r／min離心20min，取上清液，水浴濃縮至含生藥1g／mL溶液，3000r／min離心20min，取上清液于4℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2．2凝血酶時間的測定方法［4，5］

先取凝血酶用生理鹽水稀釋至一定的倍數(shù)，然后取待測血漿（參比血漿）0．1mL，37℃保持2min，加入37℃預(yù)溫凝血酶0．1mL搖勻，立即開始測定，記錄凝固時間，調(diào)節(jié)凝血酶時間，使空白時間在20～22s。

2．3NH4＋Cl對全蝎抗凝活性的影響

分別取NH4Cl供試液，加至NH4＋的濃度為0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140、0．420、0．700、0．900、1．125、1．540μmol／mL中。加入血漿，全蝎提取液0．1mL，凝血酶0．1mL，測凝血時間。每個濃度重復(fù)測5次。結(jié)果如表1。通過對照在全蝎提取液中加入NH4Cl前后的凝血時間表明，明顯縮短了全蝎提取液的抗凝時間（P＜0．01）。2．4NH4＋影響全蝎抗凝活性的確認(rèn)

由于用NH4Cl提供NH4＋，為了確定其中的Cl－對全蝎提取液的抗凝活性的是否產(chǎn)生影響，用0．01、0．14、1．54μmol／mL的NH4Cl、NaCl溶液，加入全蝎提取液中，按“2．3”項下方法加血漿、凝血酶，測凝血時間，每個濃度重復(fù)測5次，取平均值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NaCl溶液對全蝎提取液的抗凝活性無影響，NH4Cl明顯降低了其抗凝作用，縮短了凝血時間。這表明是NH4＋而不是Cl－對全蝎抗凝時間有影響（P＜0．01），降低了全蝎抗凝活性。如圖1。

2．5NH4＋自身抗凝作用測定

為了確定NH4＋本身是否對血漿有抗凝活性，加入NH4＋至0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140μmol／mL，用生理鹽水代替全蝎提取液，其余同方法“2．3”，測凝血時間。發(fā)現(xiàn)凝血時間還稍有增加，見表2。經(jīng)過數(shù)理統(tǒng)計分析，NH4＋并無抗凝作用（P＞0．05）。

2．6其他無機元素對全蝎抗凝活性的影響

按“2．3－2．5”項下的方法，分別探討了加入Pb2＋，Mn2＋，Mg2＋，Cu2＋，F(xiàn)e2＋，Zn2＋，Ca2＋至0．1，0．2，0．3，0．4，0．5μmol／mL后對全蝎抗凝活性的影響，通過測凝血時間，發(fā)現(xiàn)在我們的濃度范圍，凝血時間都明顯縮短了（P＜0．01），但不同無機陽離子縮短的程度稍有差別。結(jié)果如圖2。

3討論

 許多中藥材里的微量無機陽離子對藥材的藥性藥效有很大的影響。全蝎的主要活性成分是蛋白質(zhì)、氨基酸等物質(zhì)，其中蛋白質(zhì)含量最高［6］，是主要活性物質(zhì)。全蝎的抗凝作用與其中的蛋白質(zhì)有關(guān)［3］11。在實驗中，所試驗的無機陽離子本身無抗凝作用（P＞0．05），雖然無機陽離子使凝血時間稍有增加（9s以內(nèi)），有輕微的促凝性，但與加到全蝎提取液中縮短的凝血時間（117s以上）相比是很小的。不難看出，不是無機陽離子的輕微促凝作用抵消了全蝎提取液抗凝作用，而是這些無機陽離子加入到全蝎提取液中后與之發(fā)生作用使凝血時間縮短，明顯降低了其抗凝活性（P＜0．01）。

每克全蝎中含有微克級的Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb及銨離子等［1］1415，這些微量離子的存在可能影響了全蝎毒蛋白結(jié)構(gòu)，從而影響全蝎的藥效作用。在實驗中，全蝎中加入微克級的這些離子后，全蝎的抗凝作用明顯降低了。不同來源的全蝎所含無機陽離子的量有所變化［1］［7］1414，實驗中加入微量元素的量在其變化范圍內(nèi)，全蝎中含有的無機陽離子很可能會減低全蝎抗凝活性。在實際應(yīng)用中盡量避免與這些無機陽離子混用，可提高全蝎的抗凝藥效。

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