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摘要：目的優(yōu)選三仙壯骨膠囊水提部位的最佳提取工藝。方法采用高效液相色譜法測(cè)定川續(xù)斷皂苷VI的含量，并以川續(xù)斷皂苷VI的含量作為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)考察三仙壯骨膠囊的最佳提取工藝。結(jié)果最佳提取工藝為:加10倍量的水煎煮2次，每次1h。結(jié)論該提取方法合理、可行，為生產(chǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：三仙壯骨膠囊；提取工藝；高效液相色譜法；川續(xù)斷皂苷VI

三仙壯骨膠囊是由續(xù)斷、淫羊藿、獨(dú)一味、當(dāng)歸等幾味中藥組成，本品為研制者常年行醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)方，臨床用于治療跌打損傷、筋骨扭傷、瘀積腫痛。方中續(xù)斷、淫羊藿、獨(dú)一味主要含有皂苷類成分及黃酮苷類成分，在水中溶解性較好，故此三味藥材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交設(shè)計(jì)法，以川續(xù)斷皂苷VI為指標(biāo)，用高效液相色譜法測(cè)定其含量［1-4］，以優(yōu)選三仙壯骨膠囊水提部位的最佳工藝。

1材料與試劑

Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996PDA檢測(cè)器,Empowers色譜工作站，DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪馬公司）。KQ100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；BSZZ4S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

川續(xù)斷皂苷VI對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111685200401）；乙腈為色譜純；水為屈臣氏蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按處方稱取續(xù)斷、淫羊藿、獨(dú)一味藥材，加水進(jìn)行煎煮，在煎煮過程中，采用L9(34)表安排正交試驗(yàn)，以續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為指標(biāo)，對(duì)提取效果影響較大的加水量、煎煮次數(shù)及煎煮時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行考察，各因素水平見表1。表1因素水平表

2.2川續(xù)斷皂苷VI含量測(cè)定

2.2.1色譜條件色譜柱為DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流動(dòng)相為乙腈水（體積比30∶70）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；柱溫為25℃；流速為1mL/min；進(jìn)樣量為10μL。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取川續(xù)斷皂苷VI對(duì)照品3.09mg，置2mL容量瓶中，用甲醇溶解配制成質(zhì)量濃度為1.545mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品液的制備取水提取液適量（相當(dāng)于續(xù)斷藥材0.75g），置圓底燒瓶中，減壓濃縮至干，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液2、4、8、12、16、20μL，依次注入高效液相色譜儀，各重復(fù)3次，記錄峰面積。以川續(xù)斷皂苷VI峰面積均值（A）對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=191595.75ρ97704.96，r=0.9998（n=6）。表明川續(xù)斷皂苷VI在3.09～30.9μg/mL之間與峰面積具有良好線性關(guān)系。

2.2.5樣品含量測(cè)定精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品和樣品色譜圖見圖1。

2.2.6精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果RSD值為0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)分別取同一批號(hào)樣品6份，按“2.2.3”項(xiàng)方法制備溶液，依法測(cè)定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，結(jié)果測(cè)得含量的RSD值為0.92%(n=6),表明本法重復(fù)性良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件，間隔不同時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD值為0.50%(n=5)，表明供試品溶液在4h內(nèi)測(cè)定基本穩(wěn)定。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品，分別加入一定量的對(duì)照品，置圓底燒瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液并在上述條件下測(cè)定，其平均回收率為100.30%，RSD為2.84%(n=6)。

2.3正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見表2、表3。表2正交試驗(yàn)結(jié)果表3方差分析表從表2、表3中可見，因素A、因素C對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，因素B對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較小。綜合正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及節(jié)約生產(chǎn)成本的角度考慮，確定最佳工藝為A3B2C2，即加10倍量水煎煮2次，每次1h。按最佳工藝對(duì)3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果3批樣品的平均含量分別為11.57、12.19和12.02mg/粒，可見該工藝穩(wěn)定可行。

3討論

3.1有關(guān)續(xù)斷等藥材成分提取的研究報(bào)道很多，綜合文獻(xiàn)研究和預(yù)試驗(yàn)，采用水煎煮方式進(jìn)行提取，并以川續(xù)斷皂苷VI含量作為考察工藝的指標(biāo)，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，得出三仙壯骨膠囊的水提部位最佳工藝條件。該工藝簡(jiǎn)便可行，有良好的可操作性。

3.2鑒于川續(xù)斷皂苷Ⅵ有防止骨質(zhì)疏松、增強(qiáng)骨密度的作用,與續(xù)斷的傳統(tǒng)功效吻合［5］,本文對(duì)提取液中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進(jìn)行了測(cè)定,其總量轉(zhuǎn)移率為90.03%。

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