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【摘要】將雙糖培養(yǎng)基改進為三糖鐵尿素斜面培養(yǎng)基，易于尿素酶陽性菌的結(jié)果觀察。在雙糖培養(yǎng)基基礎(chǔ)上再加入2%尿素，0.2%KH2PO4，1%蔗糖制成三糖鐵尿素培養(yǎng)基。結(jié)果經(jīng)改進后的三糖鐵尿素培養(yǎng)基與相關(guān)的目的菌進行性能測定試驗后的反應(yīng)符合要求。結(jié)論改進后的培養(yǎng)基易于尿素酶陽性菌的觀察，可以減少單管試驗。配制方法簡便易行、省時省力，尤其適用于基層實驗室工作。

【關(guān)鍵詞】雙糖尿素培養(yǎng)基

【Abstract】ObjectiveToquicklydetecttheintestinalbacteria.Methodsagarmediaoftriplesugariron(TSI)wasmadefrom2%ofurea,0.2%ofKH2PO4and1%ofsucroseonthedoublesugaragarandtestedforitsfunctionbyusingtherelatedbacteria.ResultsThetargetbacteriaweresuccessfullyculturedbyusingTSIagar.ConclusionThemodifiedculturemediumisfittoobservemasculinefungiofureaseandcanreducethesingle-valveexperiment.Theconfigurationmethodiseasy,timesavingandlaborsaving,especiallysuitableforthebasiclaboratory.

【Keywords】Doublesugariron;urea;culturemedium

為了能簡便快速的鑒定出腸道致病菌，以滿足基層實驗室的需求，我們根據(jù)現(xiàn)有的雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基進行改良配制后，選用各不同生化反應(yīng)的腸桿菌科的目的菌株對改進后的培養(yǎng)基進行了性能測定，證明效果尚佳，現(xiàn)將方法介紹如下。

1材料與方法

1.1材料來源

1.1.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（上、下層），購于杭州微生物試劑廠。三糖鐵瓊脂，購于杭州微生物試劑廠。尿素；KH2PO4均購于西安化學試劑廠。

1.1.2待檢菌株志賀菌(1.1869)；由GGMCC提供，沙門菌（1.1174）；由GGMCC提供，地方株：宋內(nèi)志賀菌株，菌號：05002；傷寒沙門菌株，菌號：04010；腸炎沙門菌株，菌號：05007；大腸埃希菌（ETECO78:K80，）菌號：05008；普通變形桿菌，菌號：07016；弗勞地枸櫞酸桿菌，菌號：040011，以上菌株均由本室保存。

1.1.3診斷血清志賀菌屬診斷血清（48種）；沙門菌屬診斷血清（59種）；腸致病性大腸埃希菌診斷血清（15種）以上各屬血清均由衛(wèi)生部蘭州生物制品所提供。腸侵襲性、產(chǎn)毒性大腸埃希菌診斷血清（16種）由衛(wèi)生部成都生物制品研究所提供。以上各屬血清均在有效期限內(nèi)使用。

1.2方法

1.2.1三糖鐵尿素培養(yǎng)基的配制配制培養(yǎng)基用華氏小試管應(yīng)清洗干凈后加塞包裝好，經(jīng)15Pa20min高壓滅菌后備用。將成品雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基按說明分別稱量配制上、下層后混勻，將已配好的上層培養(yǎng)基內(nèi)加入1%的蔗糖，稍加溫溶解混勻后分裝于適量的小三角燒瓶內(nèi)高壓備用。再按2%尿素、0.2%KH2PO4的量加入已稱量配好的下層培養(yǎng)基內(nèi)，稍加溫后混勻待溫度冷卻后用NaOH校正pH至7.0。將配好的該培養(yǎng)基下層分裝于已高壓滅菌好的華氏小試管中約1.5～2ml直立包裝。再與上層培養(yǎng)基一同經(jīng)10Pa10min高壓滅菌后置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

試驗前可將配制好的上層培養(yǎng)基溶解后，以無菌操作下分裝于已配制好并高壓滅菌的下層培養(yǎng)基管中2～2.5ml制成斜面?zhèn)溆谩４藭r的培養(yǎng)基即為三糖鐵尿素半固體斜面培養(yǎng)基。

1.2.2樣品接種將待檢目的菌進行復(fù)活后，分別劃種于S.S瓊脂平板上置37℃溫箱培養(yǎng)18～24h，再取配制好的三糖鐵尿素半固體斜面培養(yǎng)基注明菌號后，挑取經(jīng)S.S瓊脂平板上培養(yǎng)后的典型菌落，分別穿刺接種于上述培養(yǎng)基內(nèi)，置37℃溫箱培養(yǎng)18～24h后觀察結(jié)果，各待檢菌的初步生化反應(yīng)結(jié)果見表1。表1不同菌株在三糖鐵尿素斜面上的反應(yīng)注：（1）K為紅色；A為黃色；＋為陽性；-為陰性；+/-大多時為陽性，少時為陰性；-/+少時為陰性，大多時為陽性；(-)多時為陰性；(+)多時為陽性；D為不定。

1.2.3配制時應(yīng)注意點尿素酶極受溫度,高壓時溫度過高過久，都有可能使尿素酶分解，如加熱不足，又可造成滅菌不徹底，所以準確的把握滅菌溫度及加熱時間是關(guān)鍵。

加入適量的KH2PO4后，能阻止尿素在滅菌過程中產(chǎn)生的氨與二氧化碳聯(lián)結(jié)為氨基甲酸銨，同時KH2PO4還可起到緩沖作用，如果溫度掌握適中可使下層培養(yǎng)基pH保持在7.0～7.1，加入KH2PO4后，可發(fā)揮尿素酶的最大活力，易于尿素酶陽性菌的結(jié)果觀察。

2結(jié)果

我們將改進后的培養(yǎng)基經(jīng)過實驗后的反應(yīng)歸納有以下幾種：斜面不變色、底層變黃色，不產(chǎn)氣、無動力，硫化氫陰性，不分解尿素酶者可考慮為志賀菌屬細菌；

斜面不變色、底層產(chǎn)酸產(chǎn)氣、產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素酶者可考慮為沙門菌屬細菌；

斜面不變色，底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，尿素酶陰性、可產(chǎn)生少量硫化氫者可考慮傷寒沙門菌；

斜面和底層均變紅色，有動力，產(chǎn)或不產(chǎn)氣，硫化氫陽性或陰性，尿素酶陽性者可考慮為變形桿菌屬細菌。

根據(jù)以上各生化反應(yīng)，能初步判斷所屬的屬或種，然后再以血清學試驗加以證實確定屬或種，同時還可以從以上生化試驗中判定出無診斷血清的其它菌屬［1］。

3討論

細菌檢驗需要經(jīng)過分離、培養(yǎng)、繁殖、動態(tài)觀察以及生化特性的不固定變化等因素綜合判定并認真鑒定后才能拿到確定的菌株，與其他檢驗醫(yī)學方面最大的不同也在于此,至今仍離不開傳統(tǒng)的手工操作。改進后的三糖鐵尿素半固體斜面培養(yǎng)基與其他腸桿菌科培養(yǎng)基最大的優(yōu)點是易于觀察尿素酶的結(jié)果，可以不做其他輔助生化。在一支培養(yǎng)基中，同時觀察多種生化反應(yīng)和生長情況，可以防止尿素酶陽性的細菌漏檢。用于腸道菌檢查用的單糖，雙糖、三糖、四糖等培養(yǎng)基配制很多［2］，但由于配制耗時和基層實驗室在配制中的諸多，以致在許多基層實驗室不能正常使用。市場上出售的雙糖鐵（kligler）和三糖鐵（TS1）瓊脂培養(yǎng)基干粉成品［3］，雖已廣泛用于腸道細菌的檢驗工作，但均不含尿素成份。如果檢驗?zāi)蛩孛戈栃缘募毦毩碜鰡为毜哪蛩毓?，改進后的培養(yǎng)基就可以減少繁瑣的單管試驗方法。該培養(yǎng)基的配制方法簡便易行、省時省力，不需要任何高端技術(shù)和儀器，適用于各類實驗室，尤其適用于基層腹瀉病門診實驗室工作。

我們推薦使用的該培養(yǎng)基經(jīng)過同行多年的工作實踐，已在當?shù)赝扑]并長期使用，效果很好。我們相信該培養(yǎng)基在傳統(tǒng)的微生物分離技術(shù)上會給同行帶來方便，我們愿與同行共享。

【】

1P.R愛德華，W．H．愛文.腸桿菌科的鑒定.衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所.江西省衛(wèi)生防疫站，第3版，1997：92.

2陳夫元，劉捷.細菌培養(yǎng)基.北京：技術(shù)出版社，1992,149-156.

3扳琦利一．他．新細菌培地講座（第二版）下1.東京:近代出版社，1993,180