涼血顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

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【摘要】目的制定成品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層鑒別鑒定赤芍、甘草，高效液相色譜法測(cè)定制劑中芍藥苷的含量。高效液相色譜條件：Hypersil柱（4.6nm×250nm,10μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-醋酸-異丙醇（67：173：4：4）;流速：1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。結(jié)果薄層色譜鑒別專(zhuān)屬性好，高效液相法測(cè)定制劑中芍藥苷的含量方法重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確可靠。結(jié)論可用作為控制制劑質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】涼血顆粒；高效液相色譜；薄層色譜

涼血顆粒是由赤芍、甘草組成的中藥制劑，具有清熱涼血、散瘀止痛。該方組方簡(jiǎn)單，療效確切，為了有效控制制劑的質(zhì)量，對(duì)制劑建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1100,VWD檢測(cè)器，雙槽玻璃展開(kāi)槽。

1.2試劑甲醇：色譜純，美國(guó)天地（TEDIA）公司，其他試劑為分析純。

2鑒別項(xiàng)

取本品3粒內(nèi)容物，加醋酸乙脂20ml，超聲10min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g,缺甘草陰性樣品適量，同法制成對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照液。吸取上述三種溶液各5μl,點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（7.5：4：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)取出，晾干，噴以2%硫酸香草醛溶液（1：1），置105℃烘至斑點(diǎn)清晰，在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3含量測(cè)定

3.1實(shí)驗(yàn)條件芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢驗(yàn)所），色譜條件：色譜柱：依利特hypersilC18（4.6nm×250nm，10μm）;流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-醋酸-異丙醇（67：173：4：4）；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。

3.2測(cè)定方法對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取已干燥的芍藥苷對(duì)照品適量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物0.4g，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇50ml，超聲15min，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀。

3.3方法學(xué)考查

3.3.1樣品的分離度吸取蘆丁對(duì)照品溶液、赤芍藥材溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液按上述方法測(cè)定，見(jiàn)圖1～4。

圖1芍藥苷對(duì)照品HPLC圖

圖3陰性對(duì)照HPLC圖圖2赤芍HPLC圖

圖4供試品HPLC圖

3.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照品溶液（0.311mg/ml）進(jìn)樣量分別為5、8、10、15μl，按試驗(yàn)方法項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。以量（μg）為橫坐標(biāo)，色譜峰的面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，芍藥苷在1.55～4.67μg的范圍內(nèi)，其進(jìn)樣量與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程：Y＝388.1X-6144，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。

3.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品按含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定其峰面積，每隔1h測(cè)1次，連續(xù)測(cè)6次，測(cè)定結(jié)果RSD=1.7%，樣品在5h內(nèi)測(cè)定是穩(wěn)定的。

3.3.4精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，分別等量進(jìn)樣6次，按上述實(shí)驗(yàn)方法項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明其RSD=0.77%。

3.3.5重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品分別為5份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法分別測(cè)定，其RSD=1.3%，樣品測(cè)定有良好的重現(xiàn)性。

3.3.6回收率試驗(yàn)取已測(cè)定含量的供試品約0.2g，精密稱(chēng)定，精密加入3.8750mg/ml芍藥苷對(duì)照品2ml，按上述供試品溶液的制備方法制備和測(cè)定，一式5份，結(jié)果表1。

本方法測(cè)定的平均回收率為97.8%，基本符合要求。

4討論

赤芍的薄層鑒別，陰性對(duì)照無(wú)干擾，可作鑒別項(xiàng)用。甘草鑒別，已往鑒定甘草中的甘草酸銨和甘草次酸，因樣品色譜干擾較大，故只用甘草藥材作對(duì)照。芍藥苷的含量測(cè)定方法，文獻(xiàn)報(bào)道較多［1～3］，經(jīng)過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，采用流動(dòng)相為甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-醋酸-異丙醇（67：173：4：4），對(duì)樣品峰的分離效果最好。表1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2000,78;125.

2董春芬，劉天福.HPLC法測(cè)定冠心顆粒中芍藥苷的含量.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2003，3（16）：840-841.

3郝明虹，曾紅.健脾消食顆粒中芍藥苷的定量研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2000，6（2）：19-20.