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【關(guān)鍵詞】柴胡；,,高效液相色譜

摘要：目的制定柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量測(cè)定方法。方法用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLCELSD）,AlltimaC18色譜柱,流動(dòng)相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml・min1；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。結(jié)果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分別在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、靈敏、可靠、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可作為柴胡藥材的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：柴胡；高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)法；柴胡皂苷

DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD

Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDwasusedinthequantitativeanalysisbyusingAlltimaC18chromatographycolumnandmethanolwater(80∶20)asamobilephase.Theflowrateofmobilephasewas0.8ml・min1.Thetubetemperatureofthedetectorwas40℃.Thepressofpureairwas3.5bar.ResultsThelinearrangesforsaikosaponinaanddwere1.908~19.08μg（r=0.9996）and1.804~18.04μg（r=0.9992）,theaveragerecoverieswere98.35%(RSD=1.26%)and97.64%(RSD=1.58%),respectively.ConclusionThismethodiseasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri.

Keywords：RadixBupleuri;HPLCELSD;Saikosaponin

柴胡藥材來(lái)源于傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。為常用中藥,在我國(guó)已有2000多年藥用歷史,具有和解表里、疏肝、升陽(yáng)之功效［1］。其主要有效成分為柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a，d的活性較強(qiáng),具有抗炎、保肝、降低血中膽固醇等藥理活性［2］。應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定柴胡皂苷a，d含量的報(bào)道較多［3，4］。但由于檢測(cè)波長(zhǎng)在210nm,雜質(zhì)峰干擾十分嚴(yán)重,檢測(cè)靈敏度低,影響了含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。本文應(yīng)用HPLCELSD法同時(shí)測(cè)定柴胡皂苷a，d的含量,其雜質(zhì)峰干擾小,分離度好,靈敏度高,出峰時(shí)間短,便于操作。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀：Agilent1100系統(tǒng)，SEDEX75型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；超聲波清洗機(jī)（中國(guó)華南超聲波設(shè)備廠），工作頻率25kHz，功率250w。柴胡皂苷a，d對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用,批號(hào)分別為110777200303和110778200402；甲醇為色譜純（CALEDONLABORATORIESLSD.），水為重蒸水，其它試劑均為分析純；柴胡藥材經(jīng)鑒定為柴胡BupleurumchinenseDC.的根。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml・min1，柱溫25℃；檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。在選定的條件下，柴胡皂苷a、d對(duì)照品與樣品中其它組分色譜峰可基線分離，峰形好。按柴胡皂苷d峰計(jì)算，理論板數(shù)為3000以上。柴胡皂苷a，d對(duì)照品，供試品的高效液相色譜圖見圖1。

1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供試品圖譜b對(duì)照品圖譜

圖1高效液相色譜圖（略）

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取柴胡藥材粉末（過(guò)60目篩）約1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超聲處理40min，放置至室溫，加5%氨水甲醇至刻度，搖勻，靜置，精密吸取上清液20ml置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取柴胡皂苷a和d的混合對(duì)照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色譜儀中，分別測(cè)定柴胡皂苷a和d的峰面積。以峰面積自然對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.89721.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.86191.4965X，r=0.9992。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.18%和1.53%，表明儀器的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品溶液,按含量測(cè)定方法及色譜條件分別置0，2，4，6,8h測(cè)定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.29%和1.68%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同批號(hào)樣品6份，按含量測(cè)定方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樣品中柴胡皂苷a和d的平均含量分別為11.4541，8.3612mg・g1，RSD分別為1.34%和1.82%。

2.8回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的樣品6份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入柴胡皂苷a對(duì)照品6.0544mg和柴胡皂苷d對(duì)照品4.4621mg，按含量測(cè)定方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。

2.9樣品測(cè)定取不同批號(hào)的藥材，按上述供試液的制備方法制備供試液。精密吸取對(duì)照品溶液5，20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定柴胡皂苷a，d含量，結(jié)果見表1。

3討論

3.1柴胡皂苷a，d為柴胡的主要有效成分,但在提取過(guò)程中其結(jié)構(gòu)易發(fā)生變化,因此，嚴(yán)格控制提取條件十分重要。本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇、5%吡啶甲醇、5%氨水甲醇的提取效果。結(jié)果表明，5%氨水甲醇溶液超聲提取效果最佳。

表1樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

3.2采用5%氨水甲醇溶液超聲處理，分別測(cè)定了不同提取時(shí)間（20，30，40，50min）樣品中柴胡皂苷a，d的含量，結(jié)果在40～50min內(nèi)樣品中柴胡皂苷a、d的含量基本不變。故文中采用超聲40min的方法。

3.3本文采用HPLCELSD法測(cè)定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量,較采用紫外檢測(cè)器檢測(cè),能明顯減少雜質(zhì)峰的干擾,峰形好,出峰時(shí)間短,有利于提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和工作效率。

參考文獻(xiàn)：

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